En este estudio, describimos el enfoque del canal semicircular posterior como un método confiable para la entrega del gene de oído interno en ratones neonatales. Mostramos que entrega del gene a través del canal semicircular posterior es capaz de inundar todo oído interno.
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Artículo de método
Enfoque del Canal Semicircular posterior para la entrega del Gene de oído interno en ratón Neonatal
En este artículo
Resumen
Resumen
Oído interno la terapia génica ofrece gran promesa como tratamiento potencial para la pérdida de oído y mareos. Uno de los determinantes críticos del éxito de la terapia génica de oído interno debe encontrar un método de entrega que se traduce en eficiencia de transducción consistente de tipos celulares específicos y reducir al mínimo pérdida de la audición. En este estudio, describimos el enfoque del canal semicircular posterior como un método viable para la entrega del gene de oído interno en ratones neonatales. Mostramos que entrega del gene a través del canal semicircular posterior es capaz de inundar todo oído interno. La fácil identificación anatómica del canal semicircular posterior, así como mínima manipulación del hueso temporal necesario, hacer este quirúrgico acercarse una opción atractiva para la entrega del gene de oído interno.
Introducción
Oído interno la terapia génica es un campo de rápido desarrollo de la investigación. Se ha aplicado en varios modelos de animales para combate ototoxicidad, traumatismo de ruido y de pérdida de audición hereditaria1. Varios estudios recientes han demostrado la recuperación funcional de la audición y las funciones de balance en ratones mutantes después de oído interno gene terapia entrega2,3,4,5,6, 7. uno de los principales factores en determinar el ....
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Protocolo
Todos los procedimientos animales fueron aprobados por el cuidado Animal y uso en el Instituto Nacional en sordera y otros trastornos de la comunicación (NIDCD ASP1378-15).
1. preparación y configuración del procedimiento
- Esterilizar todos los instrumentos de óxido de etileno en el inicio del experimento. Entre los animales, limpiar instrumentos usando esterilización del grano.
- Cargar la solución con terapia génica viral en una micropipeta en el inyector de micro. Los vectores virales utilizados en este estudio fue AAV2/8-whirlin (1 x 1013 copias de genoma por mililitro, consulte la tabla de materiales).
No....
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Resultados
Inyección de whirlin AAV8 terapia génica en ratones neonatales whirler a través del canal semicircular posterior dio lugar a whirlin expresión (verde) en células de pelo utricular (figura 2), con la eficiencia global de la infección del 53,1% (SD 38.1, n = 28)5 . Células transduced había alargado estereocilios (rojo) en comparación con las células de pelo de orejas no contralaterales (5.35 μm ± 2.11 vs 3,20 ± 0.34 μm, respectivamente)<.......
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Discusión
Se han descrito varios abordajes quirúrgicos para tener acceso a roedores interior de orejas. Cochleostomy y enfoques de ventanas redondas son más utilizados para acceder a la cóclea, mientras que el canal semicircular posterior y el saco endolinfático enfoques se suelen utilizar para acceder a los órganos vestibulares1. En un estudio reciente, mostramos canal semicircular posterior inyecciones de terapia génica viral dio lugar a la alta eficacia de transducción de la célula de pelo en los órganos.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen ninguna divulgación pertinentes para hacer.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por fondos de la NIDCD División de intramuros investigación /NIH (DC000082-02 para W.W.C.), así como DC000081 a base de proyección de imagen avanzada. Estamos agradecidos por el personal de Animalario NIDCD para el cuidado de nuestros animales.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Microscopio de operación Microscopio | Zeiss | OPMI Pico ENT. Otros microscopios de disección también funcionarían. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 y #55 |
| Dumont Micro-tijeras | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanolitro2000 microinyector | World Precision Instruments | ||
| Almohadilla térmica | Mastex | Modelo 500/600 | |
| 5-0 Suturas Vitryl | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| vidrio | Sutter Instruments | B100-75-10 Vidrio de | borosilicato |
Referencias
- Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. Gene therapy for sensorineural hearing loss. Ear Hear. 36, 1-7 (2015).
- Askew, C., et al. Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice. Sci Transl Med. 7, 295(2015).
- Akil, O., et al.
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Reimpresiones y permisos
