Aquí presentamos técnicas para medir la deformabilidad del glóbulo rojo y la heterogeneidad celular por ektacytometry. Estas técnicas son aplicables a las investigaciones generales de la deformabilidad del glóbulo rojo y las investigaciones específicas de enfermedades de la sangre caracterizadas por la presencia de rígidos y deformables eritrocitos en la circulación, tales como anemia de células falciformes.
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Artículo de método
Medición de la deformabilidad y la heterogeneidad de glóbulos rojos en sangre por Ektacytometry
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Disminución de eritrocitos deformabilidad es característica de varios trastornos. En algunos casos, el grado de deformabilidad defectuoso puede predecir la severidad de la enfermedad o la aparición de complicaciones graves. Ektacytometry utiliza láser viscometry difracción para medir la deformabilidad de eritrocitos sometidos a tensión de esquileo creciente o un gradiente osmótico en un valor constante de esfuerzo de corte aplicado. Sin embargo, las mediciones directas de la deformabilidad son difíciles de interpretar al medir sangre heterogénea que se caracteriza por la presencia de eritrocitos rígidos y deformables. Esto es debido a la incapacidad de las células rígidas para alinear correctamente en respuesta a la tensión de esquileo y los resultados en un patrón de difracción distorsionado caracterizado por una disminución exagerada de deformabilidad aparente. La medición del grado de distorsión proporciona un indicador de la heterogeneidad de los eritrocitos en sangre. En la anemia de células falciformes, esto se correlaciona con el porcentaje de células rígidas, que refleja la concentración de hemoglobina y la composición de la hemoglobina de los eritrocitos. Además de medir la deformabilidad, osmótico gradiente ektacytometry proporciona información acerca de la fragilidad osmótica y el estado de hidratación de los eritrocitos. Estos parámetros también reflejan la composición de la hemoglobina de los glóbulos rojos de pacientes de la célula de hoz. Ektacytometry mide deformabilidad en las poblaciones de glóbulos rojos y no, por lo tanto, proporciona información sobre la deformabilidad o propiedades mecánicas de los eritrocitos individuales. Cueste lo que cueste, el objetivo de las técnicas descritas en este documento es proporcionar un método conveniente y confiable para medir la deformabilidad y la heterogeneidad celular de la sangre. Estas técnicas pueden ser útiles para el monitoreo de cambios temporales, así como la progresión de la enfermedad y respuesta a la intervención terapéutica en algunos trastornos. Anemia de células falciformes es un ejemplo bien caracterizado. Otros posibles trastornos donde las mediciones de la deformabilidad del glóbulo rojo y heterogeneidad son de interés incluyen el almacenamiento de la sangre, diabetes, infección por Plasmodium , deficiencia de hierro y las anemias hemolíticas por defectos de membrana.
Introducción
Ektacytometry proporciona una medida conveniente de la deformabilidad de eritrocitos en respuesta a alteraciones en la tensión de esquileo (medida en pascales (Pa)) o suspendiendo la osmolalidad del medio. Correspondientes parámetros de deformabilidad del glóbulo rojo son el índice de alargamiento máximo (máximo de IE), una medida de la máxima deformabilidad de un glóbulo rojo en respuesta a la creciente tensión de esquileo y tensión de esquileo ½ (SS ½), el esfuerzo cortante requerido para lograr el máximo de la mitad deformabilidad. 1 ektacytometry gradiente osmótico tiene varios parámetros informativos. Estos incluyen el índice de alargamien....
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Protocolo
Todos los sujetos en este estudio dieron consentimiento informado conforme a la declaración de Helsinki y los protocolos nacional institutos de salud Junta de revisión institucional aprobó.
1. encender el ektacytometer
- Conecte la tubería de la solución de limpieza a las soluciones de polivinilpirrolidona (PVP) osmolar baja y alta. Tenga cuidado de conectar el tubo osmolar 0 la solución osmolar bajo y el tubo osmolar 500 a la solución osmolar elevado.
Nota: La solución PVP baja osmolar debería tener una osmolalidad entre 35 y 55 miliosmoles por kilogramo (mOsm/kg), un pH de 7.25 7.45 a 25 ° C y una viscosidad en....
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Resultados
Los resultados de ektacytometry descritos en este manuscrito pueden utilizarse para medir la deformabilidad del glóbulo rojo en cualquier condición. Un esquema de la configuración general de un ektacytometer se muestra en la figura 1. Poblaciones homogéneas de eritrocitos produce un patrón de difracción elíptica en respuesta al aumento de estrés de cizalla que pueden utilizarse para calcular el índice de alargamiento, como se muestra en la
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Discusión
El ektacytometry técnicas descritas son sencillas y bien automatizados, asegurando resultados válidos y reproducibles. Sin embargo, existen algunos pasos críticos. Control de la temperatura adecuada de la sangre es importante. Almacenamiento a temperatura ambiente durante más de ocho horas puede afectar a SS ½ valores. 34 asegurar que la temperatura de la máquina es estable a 37 ° C también es importante, como el medio de suspensión es temperatura dependiente. Sangre se debe oxigenar completamente.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el programa de investigación intramuros de los institutos nacionales de la Diabetes, digestivo y enfermedades del riñón y el National Heart, Lung and Blood Institute de los institutos nacionales de salud. Las opiniones aquí expresadas son responsabilidad exclusiva de los autores y no representan necesariamente las opiniones oficiales de los institutos nacionales de salud.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| LoRRca MaxSis versión estándar | Mecatrónica | LORC109000 | |
| LoRRca MaxSis Osmoscan | Mecatrónica | LORC109001 | |
| Solución de polivinilpirrolidona (PVP) 0mOsm | Mecatrónica | QRR030910 | |
| Solución de polivinilpirrolidona (PVP) 500mOsm | Mecatrónica | QRR030930 | |
| Solución de polivinilpirrolidona (PVP) 5mL viales | Mecatrónica | QRR030901 | |
| X limpia | Mecatrónica | QRR010946 | |
| P1000 | MilliporeSigma | Z646555 | |
| P200 | MilliporeSigma | Z646547 | |
| P200 Puntas de filtro | MidSci | AV200-H | |
| P1250 | MidSci | AV1250-H | |
| Kimwipes | MidSci | 8091 | |
| 1,5 mL Tubos Eppendorf | MidSci | AVSS1700 | |
| 15 mL vial cónico | MidSci | C15R |
Referencias
- Bessis, M., Mohandas, N., Feo, C. Automated ektacytometry: a new method of measuring red cell deformability and red cell indices. Blood Cells. 6 (3), 315-327 (1980).
- Clark, M. R., Mohandas, N., Shohet, S. B. Osmotic gradie....
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Reimpresiones y permisos
