Aquí, presentamos un protocolo de constricción aórtica transversal (TAC) a través de una toracotomía lateral. Esta técnica es un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, cerrado pecho con el objetivo de simular la sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca en ratones utilizando la configuración estándar de laboratorio de TAC.
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Artículo de método
Un modelo del cerrado-pecho para inducir constricción aórtica transversal en ratones
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Investigación en hipertrofia cardíaca e insuficiencia cardíaca con frecuencia se basa en modelos de ratón de sobrecarga de presión inducidos por la TAC. El procedimiento estándar consiste en realizar una toracotomía parcial para visualizar el arco aórtico transversal. Sin embargo, el trauma quirúrgico causado por la toracotomía en pecho abierto modelos cambia la fisiología respiratoria como las costillas están disecadas y salió sueltas tras cierre de pecho. Para evitar esto, hemos establecido un acercamiento como mínimo invasor, cerrado pecho vía toracotomía lateral. Aquí nos acercamos a arco aórtico mediante el espacio intercostal 2nd sin entrar en las cavidades del pecho, dejando el ratón con una lesión menos traumática para recuperarse. Realizamos esta operación usando configuración de laboratorio estándar para procedimientos de pecho abierto TAC con tasas de supervivencia igual. Aparte de mantener patrones de respiración fisiológica debido a lo cerrado del pecho, los ratones parecen beneficiarse, mostrando una recuperación rápida, como la técnica menos invasiva para facilitar un proceso curativo rápido y para reducir la respuesta inmune después de un traumatismo.
Introducción
Modelos de ratón se utilizan a menudo para mímico enfermedades humanas1. Constricción aórtica transversal (TAC) se utiliza para inducir sobrecarga de presión y ventricular izquierdo hipertrofia2. El modelo de TAC de tórax abierto en ratones fue validado por Rockman et al. 3 y el procedimiento quirúrgico es descrito en detalle por DeAlmeida et al. 4. anillamiento de la aorta transversa es más favorable en comparación con constricción aórtica abdominal debido a una porción más grande de la circulación puede compensar los efectos negativos de este último proc....
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Protocolo
Este protocolo fue aprobado por el Comité de ética de animales experimentación LANUV Recklinghausen (#84-02.04.2016.A374). Generalmente, este procedimiento se realiza en ratones adultos > 10 semanas de edad. Sin embargo, es posible realizar esta cirugía en animales más jóvenes así. Herramientas quirúrgicas deben ser esterilizados antes de su uso y todas las medidas deben realizarse bajo condiciones asépticas.
1. inducción de la anestesia y la intubación
- Inyectar la buprenorfina 0.1 μg/g de peso corporal por vía intraperitoneal para aliviar el dolor. Repetir las inyecciones intraperitoneales de 0.1 mg/kg de buprenorfina cada 8 h pa....
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Resultados
Un TAC éxito garantiza la inducción de sobrecarga de presión y la hipertrofia ventricular izquierda. Una validación especial de sobrecarga de presión se logra mediante la medición de la velocidad de flujo Doppler como se muestra en la figura 2. Mientras que la velocidad de flujo arterial preoperatoria es igual en ambas arterias carótidas, TAC provoca una velocidad aumentada de sangre en la arteria carótida derecha debido a la presión elevada en el ventrículo .......
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Discusión
El inicio rápido de la hipertensión arterial debido a la TAC diferencia de hipertrofia clínicamente relevante causada por estenosis aórtica o hipertensión. Sin embargo, el uso de modelos animales pequeños para inducir insuficiencia cardíaca tiene muchas ventajas y es, por tanto, elegido por muchos investigadores11. Este modelo de pecho cerrado mejora los modelos ya existentes de la técnica quirúrgica para inducir constricción aórtica transversal en ratones4.
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Stilla Frede y Susanne Schulz por su asistencia técnica. Este estudio no recibió financiación de ninguna.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Catéter de presión-volumen | Millar Instruments, EE. UU. | SPR-839 | |
| Ventilador de ratón | Harvard Apparatus GmbH, Alemania | Minivent - TYPE 845 | |
| Ventilador de ratón | Harvard Apparatus GmbH, Alemania | Conexión en Y con cánula de intubación OD 1,2 mm 73-2844 | |
| Vaporizador | Drä ger Medical AG&CO. KG, Alemania | 19.3 Isofluran-Vaporizer (una versión más reciente está disponible bajo el número de catálogo D-877-2010) | |
| Microscopio | Leica Microsystems, Alemania | MZ 7.5 | |
| Fuente de luz | Schott AG, Alemania | KL 1500 LCD | |
| 6-0 Prolene | Ethicon, EE. UU | Sutura de polipropileno BV-1 9,3 mm Sutura 3/8c | para cirugía |
| Seraflex | Serag Wiessner, Alemania | USP 5/0 schwarz; IC108000 | Sutura para constricción |
| Mesas de operaciones controladas por homeotermia | Harvard Apparatus GmbH, Alemania | Typ 872/3 HT con soporte de trípode y controlador homeotérmico Tipo 874; 73-4233 | |
| Sonda rectal flexible | Harvard Apparatus GmbH, Alemania | 1,6 mm de diámetro exterior; 55-7021 | |
| Instrumento de visualización de señales Doppler Indus | Instruments, EE. UU. | Estación de trabajo de procesamiento de señales Doppler (DSWP) con módulo | |
| Pinza intracapsular Arruga Altomed | , Reino Unido | A5400 | |
| Sonda Doppler | Indus Instruments, EE. UU | 20MHz Sonda | |
| Jaffe Retractor de tapa | Altomed, Reino Unido | A3513 |
Referencias
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods Mol Biol Clifton NJ. 573, 115-137 (2009).
- Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. Mouse cardiac surg....
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Reimpresiones y permisos
