A11-positivo β-amiloide oligómero preparación y evaluación mediante Dot blot análisis

Huang Chunhui; Xu Dilin; Zhang Ke; Shentu Jieyi; Yan Sicheng; Wu Dapeng; Wang Qinwen; Cui Wei

doi:10.3791/57592

Artículo de método

A11-positivo β-amiloide oligómero preparación y evaluación mediante Dot blot análisis

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DOI:

10.3791/57592

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22 de mayo de 2018

Huang Chunhui¹^,² , Xu Dilin¹ , Zhang Ke¹ , Shentu Jieyi² , Yan Sicheng¹ , Wu Dapeng³ , Wang Qinwen¹ , Cui Wei¹^,²

¹Ningbo Key Laboratory of Behavioral Neuroscience, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology, School of Medicine, Ningbo University, ²Li Dak Sum Yip Yio Chin Kenneth Li Marine Biopharmaceutical Research Center, Ningbo University, ³School of Materials Science and Chemical Engineering, Ningbo University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe cómo preparar oligómeros de Aß de un péptido sintético en vitro y evaluar cantidades relativas de oligómero Aβ mediante un punto de análisis el borrar.

Resumen

Β-amiloide (Aβ) es un péptido hidrofóbico con una tendencia intrínseca a la uno mismo-montar en agregados. Entre los diversos agregados, oligómero Aβ es ampliamente aceptado como la neurotoxina líder en el progreso de la enfermedad de Alzheimer (EA) y es considerado como el evento crucial en la patogenia de la EA. Por lo tanto, inhibidores de oligómero Aβ podrían prevenir la neurodegeneración y tienen el potencial para desarrollarse como modificadores de la enfermedad tratamientos de AD. Sin embargo, protocolos de formación diferentes de oligómero Aβ pueden dar oligómeros con diferentes características. Por otra parte, no hay muchos métodos con eficacia pantalla Aβ_1-42 oligómero inhibidores de. Un anticuerpo A11 puede reaccionar con un subconjunto de tóxicos oligómero Aβ_1-42 con estructuras de β-hoja de la URL. En este protocolo, se describe cómo preparar una muestra de ricos oligómero A11 positivo Aβ_1-42 de un sintético Aβ_1-42 péptido en vitro y para evaluar las cantidades relativas de oligómero de A11 positivo Aβ_1-42 en muestras frotando un punto Análisis usando A11 y Aβ_1-42-6E10 específico anticuerpos. Mediante este protocolo, inhibidores de oligómero de A11 positivo Aβ_1-42 pueden también proyectará a partir de resultados experimentales semi-cuantitativo.

Introducción

Enfermedad de Alzheimer (EA) es una de las más importantes enfermedades neurodegenerativas que afectan a personas mayores en todo el mundo¹. Es ampliamente aceptado que la agregación anormal de β-amiloide (Aβ) puede ser el factor patológico principal del anuncio. Agregados de Aß son los principales componentes de las placas seniles, uno de los marcadores biológicos en el cerebro de pacientes con EA. Por otra parte, agregados de Aß, oligómeros en particular producen neurotoxicidad potente, que pudo ser la causa de la muerte neuronal como progresa AD. Por lo tanto, la inhibición de la formación de Aß oligómero puede prevenir la neurodegeneración,....