Modelo murino de aspiración orofaríngea de neumonía bacteriana asociada a la ventilación y adquirida en el Hospital

Resumen

Neumonía infecciosa está entre las infecciones más comunes en humanos. Un modelo apropiado en vivo es fundamental para entender la patogénesis de la enfermedad y prueba la eficacia de la terapéutica de la novela. Con este modelo de neumonía murina aspiración orofaríngea, uno puede examinar la patogenesia y nuevos tratamientos contra las infecciones mortales.

Resumen

Modelos murinos de infección son fundamentales para entender la patogénesis de la enfermedad y prueba la eficacia de la terapéutica novedosa para combatir agentes patógenos causales. Neumonía infecciosa está entre las infecciones más comunes que presentan los pacientes en la clínica y así garantiza un modelo apropiado en vivo . Neumonía típica modelos utilizan la inoculación intranasal, que deposita excesiva organismos fuera del pulmón, causando complicaciones fuera del objetivo y los síntomas, tales como sinusitis, gastritis, enteritis, trauma físico o micropartículas de la bruma para imitar el aerosol propagación más típica de la neumonía viral, tuberculosa o micótica. Estos modelos no reflejan con exactitud la patogenia de la neumonía bacteriana típica o healthcare-adquirida en la comunidad. En contraste, este modelo murino de neumonía por aspiración orofaríngea imita el recorrido de la gota en neumonía adquirida en el cuidado de la salud. Suspensión en la orofaringe de ratones anestesiados inocular 50 μl de las bacterias hace que aspiración reflexiva, que produce neumonía. Con este modelo, uno puede examinar la patogenesia de patógenos causantes de neumonía y nuevos tratamientos para combatir estas enfermedades.

Introducción

Infección de vías respiratoria inferiores es la enfermedad contagiosa más mortífera del mundo y la causa más común de muerte en los países en desarrollo¹. Estas infecciones representan a nivel mundial, más de 3,2 millones de muertes de¹. Además, neumonía nosocomial es una de las formas más comunes y mortales de salud infecciones adquiridas y es causada por los patógenos más resistentes a los antibióticos^2,3. La ruta típica de adquisición de neumonía bacteriana tanto adquiridas en la comunidad y neumonía nosocomial es la aspiración de contenido orofaríngeo en el a....

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran animales deben ser aprobados por el investigador institucional Animal Care y el Comité uso (IACUC).

1. preparación del inóculo bacteriano

1. Aislar colonias bacterianas.
   1. Racha de una cepa bacteriana (p. ej., a. baumannii "HUMC1") en medio de agar estéril adecuada (por ejemplo, agar soja tríptico), teniendo cuidado de generar colonias aisladas.
   2. Incubar en condiciones apropiadas (por ejemplo, durante la noche a 37 ° C).
2. Crecer el cultivo durante la noche.
   1. Seleccione a un representante de Colonia aislada de la pl....

Resultados

Con cuidado, siguiendo el protocolo, pueden obtenerse fácilmente reproducibles y robustos de datos. Es importante apegarse estrictamente a la personalizada inóculo preparación protocolo para experimentos para ser comparado con una entre sí. También es importante manejar adecuadamente los ratones durante el proceso de infección. Asegúrese de colocar ratones en una cámara de anestesia desprovisto de isoflurano. Ratones se asuste si se colocan en una cámara que ha sido previamente llenada co.......

Discusión

Sin duda, los ratones no son seres humanos miniatura. Resultados obtenidos en modelos de ratón deben ser considerados en contexto y posteriormente interpretadas para su aplicación a seres humanos, basada en las diferencias y similitudes entre las dos especies⁶. También es importante elegir la cepa de ratón apropiado como algunos son más susceptibles a algunas infecciones que otros; lo mismo se aplica a la cepa del patógeno de elección¹⁶.

Es impre.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Agar	BD	214530	Combine con TSB para hacer perlas TSA
, vidrio de borosilicato	Kimble	135003	Esterilizar horneando o esterilizando en autoclave antes de cada uso
Vaso de precipitados, 250 mL	Pyrex	1003	Utilizado durante la alícuota precisa de inóculos bacterianos concentrados
Centrífuga	Sorvall	ST 40R	Capaz de 4.000 veces; g a 4 y grados;
C Cámara para anestesia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	Tiene capacidad para hasta 5 ratones
Cryomold, tamaño intermedio	Sakura Tissue-Tek	4566	Moldes de muestras de vinilo desechables, 15 veces; 15&veces;
Hilo dental	Oral-B	37000469537	Amarre al poste estable aprox. 6" por encima de la altura
Pinzas	VWR	82027-440	Se utiliza para extraer suavemente la lengua de la boca del ratón
Homogeneizador para tejido pulmonar	Autoclave Omni International	TM125-115 antes del	primer uso; enjuague entre muestras
Isoflurano para anestesia	Abbott	10015516	Se pueden utilizar medicamentos alternativos; modificar el procedimiento en consecuencia
Cartucho iSTAT	Abbott	03P79-25	Hay varios cartuchos disponibles para satisfacer sus necesidades
Ketamina, 100 mg/mL	Western Medical Supply	4165	Diluir 1:10 en PBS a 1 mg/mL y combinar con xilacina a 1 mg/mL
Pomada para los ojos	Akorn	Lágrimas Renovadas	Evite tocar el ojo con la punta del dispensador
Temperatura óptima de corte (O.C.T.) Compuesto	Fisher Scientific	23-730-571	Se utiliza para congelar muestras de pulmón a -80 &0 grados; C para preparar el corte de patologías
Placa de Petri VWR		25384-302	Poliestireno, desechable, esterilizado, 100 veces; 15 mm
solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Corning	21-031-CM	PBS de Dulbecco sin calcio y magnesio Puntas de
pipeta, 200-μ L	VWR	10017-044	Autoclave antes de usar
Pipeta, 200-μ L	Gilson	Pipetman P200	Autoclave y calibrar antes de usar
Dilector, Célula Bacteriana	Bel-Art	F377360006	Esterilizar horneando o esterilizando en autoclave antes de cada uso
Barra agitadora, magnética, 7,9 mm Diámetro y veces; 38,1 mm Longitud	VWR	58948-150	Se utiliza para agitar inóculos bacterianos concentrados durante la alícuota
Placa de agitación, magnética	Corning	PC-620D	Se utiliza para agitar inóculos bacterianos concentrados durante la alícuota
Caldo de soja tríptico (TSB)	BD	211822	Combinar con agar para hacer TSA
Vialón, Cónico, Estéril, 50 mL	Corning	431720	Se utiliza para preparar inóculos bacterianos
Viasco, Cónico, Estéril, 500 mL	Corning	431123	Se utiliza para concentrar inóculos para preparar inóculos congelados
Vial criogénico, 2,0 ml	Corning	430659	Se utiliza para el almacenamiento criogénico de inóculos bacterianos concentrados de
xilacina, 20 mg/mL	Akorn	AnaSed inyectable	Diluir 1:20 en PBS a 1 mg/mL y combinar con ketamina a 1 mg/mL

de 5 mm de la mesa