Aquí presentamos un protocolo de masa basado en la espectrometría de tándem para la cuantificación de los antibióticos utilizados en unidades de cuidados intensivos, es decir, cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid y piperacilina.
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Artículo de método
Múltiplex análisis farmacológico por la dilusión del isótopo HPLC-MS/MS de los antibióticos en enfermedades graves
En este artículo
Resumen
Resumen
Hay una demanda creciente para el monitoreo de drogas terapéuticas de antibióticos en muchas instalaciones clínicas, particularmente con respecto a la implementación de programas de administración de antibióticos del hospital.
En el presente trabajo, presentamos un protocolo multiplex alto rendimiento líquido cromatografía-espectrometría total en tándem (HPLC-MS/MS) para la cuantificación de cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid y piperacilina, utilizados antibióticos en unidades de cuidados intensivos. El método comprensivo anteriormente se validó según la pauta de la Agencia Europea de medicamentos.
Después de una limpieza rápida de la muestra, los analitos son separados en una columna HPLC de fase reversa C8 dentro de 4 minutos y cuantificados con el correspondientes estables isótopo-etiquetada estándares internos en espectrometría de masas por electrospray ionización (ESI +) en reacción de múltiples tiempo control (MRM). El método presentado utiliza una instrumentación simple ajuste con condiciones cromatográficas uniforme, lo que permite el seguimiento diario y robusto antibiótico terapéutico en los laboratorios clínicos. La curva de calibración extiende el rango de concentración farmacocinética, así como antibióticos cantidades cerca de la concentración inhibitoria mínima (CIM) de las bacterias susceptibles y las concentraciones máximas (Cmax) que se obtienen con bolo regímenes de administración. Sin la necesidad de la dilución de suero antes de la limpieza de la muestra, puede obtenerse el área bajo la curva para un antibiótico administrado a través de mediciones múltiples.
Introducción
Aunque los antibióticos han revolucionado la práctica de la medicina, graves infecciones bacterianas siguen siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad en enfermedades graves1. En este sentido, la administración pronta de un antiinfeccioso adecuado en una dosis adecuada es de importancia superior para el control de la enfermedad2.
Un creciente cuerpo de evidencia demuestra que el tratamiento empírico con antibióticos de amplio espectro se está convirtiendo en cada vez más problemático con la complejidad de las poblaciones de pacientes. Esto es especialmente cierto para unidades de c....
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Protocolo
Nota: Se recomienda para trabajar en una campana de humos al manipular disolventes orgánicos, como el metanol. Preparar todos los búferes y fases móviles en matraces aforados. Si no indique lo contrario, las soluciones se pueden almacenar a temperatura ambiente hasta 1 mes después de la preparación.
1. preparación de los calibradores y las muestras de Control de calidad
Nota: Una hoja de análisis de datos correspondientes para la preparación de soluciones stock y spike se da en el Archivo suplementario. Por razones de trazabilidad, inserte el fabricante, número de catálogo y mucho número de cada an....
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Resultados
Utilizando el protocolo descrito, un cromatograma típico se muestra en la figura 2. Según el United States Pharmacopeia (USP) cromatografía directrices16, se determinó el volumen muerto de la columna en el sistema actual con ~0.22 mL y el volumen de la columna extra (incluyendo los conectores, inyector y tubería) con ~0.08 mL, dando un volumen de retención de ~0.30 mL. Los factores de retención calculado para todos los analitos fueron .......
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Discusión
En este manuscrito, se presenta el protocolo para un método de masa basado en la espectrometría de tándem sencillo y robusto para la cuantificación de los antibióticos utilizados en el ICU19, es decir, cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid, y piperacilina14. Una hoja de cálculo acompaña el manuscrito para la preparación de soluciones stock de antibióticos, calibradores y controles de calidad, teniendo en cuenta la pureza de los antibióticos y el peso.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Dr. Schütze por su ayuda a establecer el método presentado y Dr. Zoller por el valioso aporte con respecto a la gama de calibración apropiada. Los autores reconocen también el personal técnico de las instalaciones de la espectrometría de masas.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| clorhidrato de cefepima | Sigma-Aldrich 1097636 | Estándar de referencia USP | |
| trihidrato de meropenem | Sigma-Aldrich | Y0001252 | EP Estándar de referencia |
| ciprofloxacina | Sigma-Aldrich | 17850 | |
| clorhidrato de moxifloxacina | Sigma-Aldrich | ||
| linezolid | Toronto Research Chemicals | ||
| piperacilina sódica sal | Sigma-Aldrich | 93129 | |
| cefepima-13C12D3 sulfato | Alsachim | C1297 | Patrón interno marcado con isótopos para cefepima |
| meropenem-D6 | Toronto Research Chemicals | M225617 | Patrón interno marcado con isótopos para meropenem |
| ciprofloxacina-D8 | Toronto Research Chemicals | C482501 | Patrón interno marcado con isótopos para ciprofloxacina |
| clorhidrato de moxifloxacina-13C1D3 | Toronto Research Chemicals | M745003 | Patrón interno marcado con isótopos para moxifloxacina |
| linezolid-D3 | Toronto Research Chemicals | L466502 | Patrón interno marcado con isótopos para linezolid |
| piperacillin-D5 | Toronto Research Chemicals | P479952 | Isótopo marcado internamente estándar para piperacillina |
| metanol | JT Baker | 8402 | |
| Agua de grado HPLC | JT Baker | 4218 | |
| ácido fórmico | Biosolve | 6914132 | |
| ácido acético | Biosolve | 1070501 | |
| formiato de amonio | Sigma-Aldrich | 70221-25G-F | |
| terc-Butil éter metílico | Merck | 101845 | |
| Fortis 3 μ m C8 100 * 2,1 mm | Fortis | F08-020503 | |
| Filtro Prifilter revestido de Ti-PEEK (2 μ m) | Chromsystems | 15011 | |
| 2795 Alliance Sistema de HPLC | 176000491 | ||
| Quattro micro API de Waters Sistema de cuadrupolo en tándem | 720000338 | de Waters | |
| QuanLynx 4.1 | de evaluación de aguas | / | datos proporcionado por el fabricante del espectrómetro de masas |
| Archivo | Soluciones de stock |
Referencias
- Fleischmann, C., et al. Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).
- Dellinger, R. P., et al.
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Reimpresiones y permisos
