Aquí, presentamos un modelo potente y fisiológico para estudiar los mecanismos moleculares subyacentes la secreción de la hormona intestinal y la absorción intestinal: el intestino aislado de rata perfundidos.
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Artículo de método
Mecanismos subyacentes de la secreción de la hormona del intestino utilizando los aislados perfusión intestino de rata
En este artículo
Resumen
Resumen
El intestino es el órgano endocrino más grande del cuerpo, produciendo más de 15 diferentes las hormonas peptídicas que regulan el apetito e ingesta de alimentos, digestión, absorción de nutrientes y distribución y excursiones de glucosa post-prandial. Comprensión de los mecanismos moleculares que regulan la secreción de la hormona intestinal es fundamental para entender y traducir la fisiología de la hormona intestinal. Tradicionalmente, los mecanismos subyacentes a la secreción de hormona intestinal tampoco se estudiaron in vivo (en animales o seres humanos) utilizando o mucosa primaria secretor de hormona de tripa cultivos celulares de células. Aquí, presentamos un intestino aislado de rata perfundidos como un método alternativo para el estudio de secreción de la hormona intestinal. Las virtudes de este modelo son que se basa en el intestino intacto, lo que significa que recoge la mayoría de los parámetros fisiológicamente importantes responsables de la secreción en estudios in vivo, incluyendo mucosa polarización, paracrina relaciones y vías de exposición de perfusión/estímulo. Además y a diferencia de los estudios in vivo, el intestino aislado de rata perfundidos permite casi completo control experimental y evaluación directa de la secreción. En contraste con estudios in vitro, es posible estudiar la magnitud y la dinámica de la secreción y para responder preguntas importantes, como qué estímulos provocan secreción de hormonas intestinales diferentes, de qué lado de la tripa (luminal o vascular) es la secreción de estimulado y analizar en sensores moleculares detalle subyacente de la respuesta secretora. Además, la preparación es un poderoso modelo para el estudio de la absorción intestinal y detalles con respecto a la dinámica de la absorción intestinal, incluyendo los transportadores de la responsables.
Introducción
El intestino es el órgano endocrino más grande del cuerpo, produciendo más de 15 diferentes las hormonas peptídicas que regulan la absorción de nutrientes y eliminación de nutrientes, crecimiento intestinal y modulan apetito1. Las hormonas del intestino, por lo tanto, participan en muchos procesos fisiológicos fundamentales, y entender estos patrones de secreción y los detalles moleculares que controlan la secreción de las hormonas respectivas así es importante para nuestra básica fisiológica comprensión y para abordar aspectos traslacionales de la acciones de la hormona del intestino; pero, ¿cómo puede uno estudiar los mecanismos de detección ....
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Protocolo
Todos los estudios se llevaron a cabo con la autorización de la inspección de experimentos animales danés (2013-15-2934-00833) y el Comité de ética local, siguiendo las directrices de la legislación danesa sobre experimentación animal (1987) y el nacional Institutos de salud (número de publicación 85-23).
1. animales
- Obtener las ratas macho Wistar (250 g) y casa 2 por jaula, con acceso ad libitum a chow estándar y agua y mantener en un 12:12 h ciclo de luz-oscuridad. Nuestras instalaciones de animales utiliza agua no tratada y Alrtromin chow roedor (1319 FORTI, Brogaarden, Lynge, Dinamarca).
Nota: Deje que los animales al menos....
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Resultados
La capacidad para determinar si un determinado estímulo provoca la secreción de la hormona intestinal de interés se basa en una secreción basal constante. Además, si no hay respuesta al estímulo se observa una respuesta secretora robusta para el control positivo debe ser evidente para excluir que la falta de respuesta al estímulo de prueba no refleja una falta general de capacidad de respuesta. Figura 2A y 2B se muestra un ejemplo de datos de.......
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Discusión
El intestino aislado de rata perfundidos es una herramienta potente que permite la dinámica y mecanismos moleculares subyacentes la secreción de la hormona del intestino que se estudiarán en detalle. El paso más crítico para el éxito de la producción de datos con este modelo es la intervención quirúrgica. Manejo del intestino inevitablemente causará algún daño en el intestino y debe por tanto mantenerse en un absoluto mínimo. Más importante aún, la velocidad de operación es clave, especialmente en el momento de la coloca.......
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Divulgaciones
Los autores de este trabajo no declaran posibles conflictos de interés relevante a este artículo.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por una subvención sin restricciones de Prof. Jens Juul Holst Novo Nordisk del centro de la investigación metabólica básica (Novo Nordisk Foundation, Dinamarca), una subvención independiente de la Fundación de Novo Nordisk para hacer estudios de roedores de la perfusión (no de la concesión. NNF15OC0016574), una subvención a Prof. Holst desde el Consejo Europeo de investigación (Grant no.695069) y la Unión de la europea del séptimo programa marco de investigación, TechnologicalDevelopment y demostración (Grant no. 266408) así como postdoc conceder a Rune E. Kuhre de la Fundación Lundbeck (R264-2017-3492). Agradecemos a Jenna E. Hunt y Caroly....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Productos químicos para tampón de perfusión | |||
| Albúmina sérica bovina (BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| Cloruro de calcio dihidratado (CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| Dextran 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| Sal disódica de ácido fumárico (C44H2Na2O4) | Sigma Aldrich | F9642 | |
| Glucosa (C6H12O6) | Merck | 108342 | |
| Sulfato de magnesio hepatahidrato (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| Cloruro de potasio (KCl) | Merck | 104936 | |
| Fosfato de dihidrógeno potásico (KH2PO4) | Merck | 104873 | |
| Ácido pirúvico sal sódica (C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| Sodio bicarbonato (NaHCO3) | Merck | ||
| Cloruro de sodio (NaCl) | Merck | 106404 | |
| L-glutamato de sodio monohidratado (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| Name | Company | < strong>Número de catálogo | Comments |
| >Perfusion equitmentment | |||
| Sistema de perfusión universal | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 732316 UNIDAD BÁSICA UNIPER UP-100, TIPO 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Bomba de rodillos, con cuatro canales | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| Windkessel | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Circulador termostático, volumen de baño 3L, 230V / 50Hz | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Mesa de operaciones, calefactada sobre soporte de trípode, tipo 873 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Cánula con sol, diámetro exterior = 2,0 mm, diámetro interior = 1,0 mm | Harvard Bioscience, Inc. |
Referencias
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al.
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Reimpresiones y permisos
