Las estimaciones del número total de Nefrona renal son importantes clínicamente y experimentalmente, ya que existe una Asociación inversa entre el número de Nefrona y un mayor riesgo de enfermedad renal y cardiovascular. En este documento, se demuestra el uso del método de maceración ácida, que proporciona estimaciones rápidas y fiables del número total de Nefrona renal.
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Artículo de método
Estimación del número de Nefrona en riñón entera utilizando el método de maceración ácida
En este artículo
Resumen
Resumen
La investidura de Nefrona se refiere al número total de nefronas con las que nace un individuo, ya que la nefrogénesis en los seres humanos se completa por 36 semanas de gestación y no se forman nuevas nefronas después del parto. El número nefrón se refiere al número total de nefronas medidos en cualquier punto en el tiempo después del parto. Ambos factores genéticos y ambientales influyen tanto en la investidura de Nefrona como en su número. Comprender cómo influyen los genes o factores específicos en el proceso de nefrogénesis y pérdida o desaparición de Nefrona es importante, ya que se cree que las personas con una dotación o número de Nefrona más baja tienen un mayor riesgo de padecer enfermedad renal o cardiovascular. Entender cómo las exposiciones ambientales en el transcurso de la vida de una persona afecta el número de Nefrona también será vital para determinar el riesgo futuro de la enfermedad. Por lo tanto, la capacidad de evaluar el número completo de Nefrona renal de forma rápida y confiable es un requisito experimental básico para comprender mejor los mecanismos que contribuyen a o promueven la nefrogénesis o la pérdida de Nefrona. Aquí describimos el método de maceración ácida para la estimación del número entero de Nefrona renal basado en el procedimiento descrito por Damadian, Shawayri y Bricker, con ligeras modificaciones. El método de maceración ácida proporciona estimaciones rápidas y fiables del número de Nefrona (evaluados por el conteo de glomérulos) que están dentro del 5% de los que se determinan utilizando métodos más avanzados, aunque caros, como la resonancia magnética. Además, el método de maceración ácida es un excelente método de alto rendimiento para evaluar el número de Nefrona en grandes cantidades de muestras o condiciones experimentales.
Introducción
La nefrona es tanto la estructura básica como la unidad funcional del riñón1. Estructuralmente, la nefrona consiste en el glomérulo (capilares y podocitos) ubicado dentro de la cápsula del Bowman y el túbulo renal, que consiste en el túbulo proximal, el lazo de Henle, y el túbulo distal que termina en el conducto colector. Funcionalmente, el papel de la nefrona es la filtración y reabsorción de agua y electrólitos y la secreción de desechos. En general, la nefrogénesis se completa a las 36 semanas de gestación en humanos y poco después del nacimiento en varias especies como el ratón y la rata2. La investidura de Nefrona ....
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Protocolo
Los suministros y reactivos enumerados a continuación son para la determinación de todo el número de Nefrona renal en un ratón, es decir, dos riñones. Las modificaciones para el uso del método de maceración ácida para ratas se identifican con asteriscos. Todos los protocolos experimentales se conformaron con la guía de institutos nacionales de salud para el cuidado y uso de animales de laboratorio y fueron aprobados por el Comité institucional de cuidado y uso de animales en el centro médico de la Universidad de Mississippi.
1. procedimiento de aislamiento renal
- Pesar el ratón (u otras especies) y eutanasia con un isoflurano (5%-8....
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Resultados
A continuación se presentan estimaciones representativas del número de Nefrona renal completa de un modelo de ratón establecido de hipertensión y un modelo de rata genética de la enfermedad renal crónica relacionada con la edad. Las características clave de identificación de los glomérulos, como una estructura esférica con o sin estructuras pre-o post-arteriolar o tubulares adjuntas, se destacan para aquellos nuevos en el método de maceración ácida (figura 1).......
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Discusión
Con una buena técnica experimental, el método de maceración ácida es ideal para estimar el número de Nefrona en todo el riñón. Aunque el riñón se disuelve en ácido, los glomérulos permanecen en gran parte intactos y son fácilmente identificables, haciendo que el conteo de glomérulos individuales sea relativamente fácil y sencillo. La técnica de maceración ácida es particularmente ventajosa por varias razones. En primer lugar, el método de maceración ácida es un método rápido y conveniente que requiere relativamente poco .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por los institutos nacionales de salud, corazón nacional, pulmón, y el Instituto de sangre (R01HL107632).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Anestesia de isoflurano | Abbott Laboratories | 05260-05 | |
| Sistema de vaporizador de isoflurano y medidor de flujo | Braintree Scientific | VP I | Incluye suministro de oxígeno de grado médico |
| Microscopio invertido Leica Microscopio DMIL LED Leica | Microsystems | DMIL LED | Cualquier marca también es adecuada |
| Baño de agua digital | Fisher Scientific | 2239 | Cualquier marca también tijeras |
| quirúrgicas ToughCut Fine | Fine Fine Science Tools | 14058-11 | filo de 25 mm, 11,5 cm de longitud; Puntas: agudo-afilado; Forma de la punta: |
| recta Pinzas de disección Micro 4 1/4 pulg. | Biomed Res Instruments, Inc | 10-1760 Tablero de | |
| plexiglás de punta curva de 5 pulgadas x 7 pulgadas | cualquier fuente adecuada | n/a | Cualquier marca también adecuada |
| Plato de pesaje de poliestireno hexagonal | Fisher Scientific | 02-2002-100 | Cualquier marca también adecuada |
| Hojas de afeitar | Fisher Scientific | 12-640 | Acero al carbono de un solo filo 0.009 |
| Esponjas de gasa 4 x 4 pulg. 8 capas | Fisher Scientific | MSD-1400250 | |
| 10x concentrado de fosfato tamponado salino tamponado (PBS) | Sigma Aldrich | P5493-4L | Diluir a 1x |
| Solución de ácido hidrocólico 6 N | Sigma Aldrich | 3750-32 | |
| Tubo de centrífuga cónico de 15 mL | Fisher Scientific | 14-959-70C | Cualquier marca también adecuada |
| Tubo de centrífuga cónico de 50 mL | Fisher Scientific | 14-959-49A | Cualquier marca también adecuada |
| Jeringa desechable de 5 mL | Cole Palmer | EW-07944-06 | Cualquier marca también adecuada |
| 18G1.5 desechable aguja | Fisher Scientific | 14-826-5D | Cualquier marca también adecuada |
| 21G1.5 aguja desechable | Fisher Scientific | 14-826-5B | Cualquier marca también adecuada |
| Placas de cultivo celular de pocillos múltiples de 12 pocillos con tapa | Cole Palmer | #FW-01959-06 | Cualquier marca también adecuada |
| tubos de ensayo de polipropileno | Cole Palmer | #EW-06733-00 | Capaz de alojar tubos cónicos de 15 y 50 mL; cualquier marca también adecuada |
Referencias
- Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
- Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics.....
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Reimpresiones y permisos
