La administración intratraal (IT) de agentes experimentales en ratones a menudo resulta en un parto asimétrico a los pulmones distales. En este informe, describimos un enfoque intrabronquial directo (IB) para canalizar cada pulmón en ratones vivos de forma no operativa. Este enfoque se puede utilizar para administrar selectivamente agentes a un pulmón o puede adaptarse para mejorar el suministro de agentes simétricos a ambos pulmones.
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Artículo de método
Administración intrabronquial directa para mejorar la deposición selectiva del agente dentro del pulmón del ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
La administración intratraqueal (IT) de agentes experimentales es una técnica esencial en modelos murinos de enfermedades pulmonares difusas, como la fibrosis pulmonar inducida por bleomicina. Sin embargo, la distribución de agentes administrados por vía intratratal al pulmón del ratón distal es a menudo asimétrica, con concentraciones parénquimas pulmonares incrementadas en el pulmón izquierdo más pequeño (pero igualmente accesible) del ratón. En este informe se describe un nuevo enfoque intrabronquial (IB) para canalizar los pulmones izquierdo y/o derecho de ratones vivos de forma no operativa. También se demuestra cómo este enfoque puede utilizarse para administrar selectivamente agentes a un pulmón o adaptados (mediante la administración de IB ajustada por dosis) para mejorar la simetría izquierda-derecha de la administración pulmonar de agentes experimentales, mejorando así los modelos de difusión difundido enfermedad pulmonar como la fibrosis pulmonar inducida por bleomicina.
Introducción
La administración pulmonar directa de agentes experimentales en ratones permite el estudio de las respuestas inmunitarias pulmonares, la lesión pulmonar aguda y la fibrosis pulmonar. La administración pulmonar directa se realiza típicamente a través de la instilación intratrahealal (IT), como se describió anteriormente1,2,3. Sin embargo, este enfoque no es selectivo, afectando ambos pulmones de una manera no objetivo y a menudo asimétrica. El modelado experimental de la lesión pulmonar puede beneficiarse de la capacidad de apuntar selectivamente a un pulmón específi....
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Protocolo
Todos los protocolos de animales han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC, por sus) de la Universidad de Colorado denver. Todos los procedimientos descritos a continuación (secciones 4–7) se han optimizado utilizando ratones C57BL/6 masculinos y femeninos. Este enfoque ha sido validado utilizando ratones que van de 19-40 g en peso corporal.
1. Creación de una plataforma para la administración del IB
- Doblar el extremo del libro desde el ángulo original de 90o entre el ala basal y el ala de pie a 70o (Figura2A).
- Taladre un agujero en la parte superior ....
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Resultados
La intubación selectiva del IB se dirige a lóbulos específicos (pulmón derecho) o segmentos basilares (pulmón izquierdo).
La administración del IB de EBD al pulmón derecho se realizó como se describe en la sección 5.1. Después de la finalización del experimento, a los ratones se les administró una dosis letal de ketamina/xilazina intraperitoneal, y los pulmones fueron cosechados para la demostración de la distri.......
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Discusión
La lesión pulmonar se ha modelado clásicamente en roedores queutilizan la administración de TI de agentes perjudiciales como BLM 6. Sin embargo, esta administración de TI sólo conduce a lesiones irregulares, lo que refleja la naturaleza no específica del parto pulmonar con este enfoque7. Estas limitaciones de modelar lesiones pulmonares son desafíos instructivos que se enfrentan al intentar la entrega de TI de agentes experimentales no lesivos, como medicamentos, siRNA o te.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por la subvención de NHLBI HL125371 a E.P.S. y por el DEPARTAMENTO de Dinada (CDMRP) a La concesión W81XWH-17-1-0051 a Y.Y.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Catéter IV blindado de 22 G | BD 381423 | ||
| Bleomicina | Enzo ciencias de la vida | BML-AP302-0010 | |
| Mini máquina de anestesia compacta para roedores | DRE Veterinary | 9280 | |
| Evans tinte azul | Sigma-Aldrich | E2129 | |
| FITC-dextrano | Sigma-Aldrich | FD150 | |
| Isoflurano | Piramal Cuidados Críticos | NDC | |
| LED-30W Fibra Óptica Luces de Cuello de Cisne Duales Iluminador de Microscopio | AmScope | LED-30W | |
| Cauterio a baja temperatura con punta fina | Aguja Bovie | AA02 | |
| Precisionglide, 18G x 1" | BD | 305195 | Punta biselada, 12 mm de longitud |
| Xilacina | AKORN | NDC 59399-110-20 | |
| Zatamina | VetOne | NDC 13985-702-10 | ketamina |
Referencias
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. Journal of Applied Physiology. 106 (3), 984-987 (2009).
- Thomas, J. L., et al. Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope....
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Reimpresiones y permisos
