Inducir la Periodontitis Apical en Ratones

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para inducir localmente la periodontitis apical en ratones. Mostramos cómo perforar un agujero en el diente del ratón y exponer su pulpa, con el fin de causar inflamación local. También se demuestran métodos de análisis para investigar la naturaleza de esta inflamación, como la microtomografía y la histología.

Resumen

Los mecanismos involucrados en la inflamación inducida local se pueden estudiar utilizando varios modelos animales disponibles. Una de ellas es la inducción de la periodontitis apical (AP). La periodontitis apical es una patología común de naturaleza inflamatoria en los tejidos periodontales que rodean la raíz dental. Para entender mejor la naturaleza y el mecanismo de esta patología es ventajoso realizar el procedimiento en ratones. La inducción de esta inflamación odontogénica se logra perforando en el diente del ratón hasta que la pulpa dental esté expuesta. A continuación, la pulpa dental permanece expuesta a ser contaminada por la flora oral natural con el tiempo, causando periodontitis apical. Después de este período de tiempo, el animal es sacrificado, y el diente y el hueso de la mandíbula se pueden analizar de varias maneras. Los análisis típicos incluyen imágenes de micro-CT (para evaluar la resorción ósea), tinción histológica, inmunohistoquímica y expresión de ARN. Este protocolo es útil para la investigación en el campo de la biología oral para entender mejor este proceso inflamatorio en un entorno experimental in vivo con condiciones uniformes. El procedimiento requiere un manejo cuidadoso de los ratones y la mandíbula aislada, y una demostración visual de la técnica es útil. Se demuestran todos los aspectos técnicos de los procedimientos que conducen a la periodontitis apical inducida y su caracterización en un modelo de ratón.

Introducción

El objetivo de este método es inducir la periodontitis apical en un ratón contaminando el ápice con la microflora natural, y luego estudiar varias características de este proceso patológico.

La periodontitis apical (AP) es una patología común de naturaleza inflamatoria en los tejidos periodontales que rodean la raíz dental. Esta enfermedad dental puede causar dolor intenso y debe ser tratada por un dentista. Las opciones de tratamiento incluyen tratamiento de conducto radicular (primario o secundario), cirugía de endodoncia, extracción dental o seguimiento dependiendo de los hallazgos clínicos y radiográficos, y la opinión del médico. El me....

Protocolo

Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad Hebrea (Ethics no. MD-17-15093-5).

1. Anestesia animal y posicionamiento

1. Prepare soluciones estériles como se describe a continuación.
   1. Preparar 5 ml de 7 mg/ml de ketamina y 0,09 mg/ml de medetomidina diluida en solución tampón de fosfato (PBS)/Saline.
   2. Preparar una solución estéril de Atipamezol (0,4 mg/ml) diluida en PBS/Saline (recomendado para preparar una cantidad de 5 ml).
   3. Preparar una solución estéril de Mepivacaína (7,5 mg/ml) diluida en PBS/Saline para anestesi....

Resultados

En la Figura 1se presenta un diagrama de flujo de los pasos experimentales. Como se menciona en el protocolo, los ratones son anestesiados, y su primer molar mandibular en un lado se perfora hasta la exposición de la pulpa, mientras que el diente contralateral se deja como un control. A continuación, los dientes se dejan contaminar por la flora oral durante 42 días, durante los cuales son monitoreados y reciben analgésicos. Después de 42 días, los ratones son.......

Discusión

Aquí se introduce un método para la inducción de la periodontitis apical en ratones. El objetivo del método es explotar la condición de periodontitis apical para el estudio de los mecanismos y consecuencias de este proceso inflamatorio. La periodontitis apical fue inducida en ratones de 6-8 semanas de edad, una edad en la que las raíces están completamente desarrolladas^24. Con el fin de causar periodontitis apical en este modelo, la pulpa dental de los molares mandibulares del ratón s.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Clorhidrato de atipamezol	Eurovet Animal Health	CAS 104075-48-1
ATR	dentsply	tecnika
máquina de bloqueo	Leica	EG1150H
buprenorfina	vetmarket	163451
microscopio clínico/binocular	Olympus	Sz61
fresa dental	Komet dental	ZR8801L 315 008
espátula dental	Premier	1003737
EDTA	J.T Baker	8993
entelan	mercury	1.07961
solución de eosina Y, solución alcohólica	de SIGMA	HT110116
hematoxilina, Mayer's	SIGMA	MHS 16
Clorhidrato de	ketaminaVetoquinol	CAS 1867-669
Clorhidrato de mesetomidina (cepetor)	CP-pharma GmbH	CAS 86347-15-1
Mepivacaína HCl 3%	Teva	CAS 96-88-8
microcepillos- aplicadores de precisión ajustables	PARKELL	S379
escáner micro-ct	scanco	uCT 40
parafin	Leica	39602004
PBS	SIGMA	D8537
PFA	EMS	15710
Pomada oftalmológica de cloranfenicol (5%)	Pinzas Rekah pharmaceutical	CAS 56-75-7
	WAM	Ref-CT
xilacina	Eurovet Animal Health	CAS 7361-61-7
xileno	Gadot	CAS 1330-20-7