Este protocolo describe un modelo de ratón de fibrosis intestinal impulsada por Salmonella que se asemeja a las principales señas de identidad patológicas de la enfermedad de Crohn, incluida la inflamación transmural y la fibrosis. Este método se puede utilizar para evaluar los factores de huésped que alteran los resultados fibroticos utilizando ratones mutantes mantenidos en un fondo genético C57Bl/6.
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Artículo de método
Infección crónica por salmonela fibrosis intestinal inducida
En este artículo
Resumen
Resumen
La fibrosis tisular caracterizada por la acumulación patológica de la matriz extracelular como el colágeno es el resultado de la inflamación persistente y la reparación desregulada. En la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), la fibrosis conduce a formaciones recurrentes de estenosis para las que no hay una terapia eficaz que no sea la resección quirúrgica. Debido a su inicio tardío, los procesos que impulsan la fibrosis son menos estudiados y en gran medida desconocidos. Por lo tanto, las complicaciones fibrosas representan un desafío importante en la EII. En este protocolo, se describe un modelo robusto in vivo de fibrosis intestinal donde el pretratamiento de estreptomicina de ratones C57Bl/6 seguido de gavage oral con el grado de vacuna Salmonella Typhimurium AaroA mutante conduce a la colonización persistente de patógenos y fibrosis del cecum. Metodologías para la preparación de S. Se explica Typhimurium -AroA para la inoculación, la cuantificación de las cargas de patógenos en el cecum y el bazo, y la evaluación de la deposición de colágeno en los tejidos intestinales. Este modelo de enfermedad experimental es útil para examinar factores de huésped que mejoran o exacerban la fibrosis intestinal similar a la CD.
Introducción
La colitis ulcerosa (UC) y la enfermedad de Crohn (CD) son las dos formas principales de EII y se caracterizan como trastornos inflamatorios crónicos y recurrentes del tracto gastrointestinal 1,2. Estos trastornos tienen un impacto importante en la calidad de vida de los pacientes. Los síntomas de la EII incluyen dolor abdominal, diarrea, náuseas, pérdida de peso, fiebre y fatiga3. Estudios recientes han identificado factores genéticos y ambientales que contribuyen a la patogénesis de la enfermedad; se cree que tales factores de riesgo contribuyen a la interrupción de la barrera epiteli....
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Protocolo
Todos los protocolos de los animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado de Animales de la Universidad de Columbia Británica.
1. Preparación de salmonella Typhimurium -AroA cultivos para el gavage oral de ratones
- De un stock de glicerol congelado de S. Typhimurium -AroA, prepare una placa de rayas con agar LB que contenga 100 g/ml de estreptomicina con un bucle inoculante estéril. Incubar durante la noche a 37oC. Las placas de rayas se pueden almacenar hasta una semana a 4 oC.
- Un día antes de la infección, preparar el antibiótico disolviendo 0,5 g de estreptomicina en 2,5 ml de agua. Después de fi....
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Resultados
Tratamiento con estreptomicina seguido de infección oral con S. Typhimurium -AroA conduce a inflamación intestinal robusta y fibrosis especialmente en el cecum (Figura 1). Las cargas patógenas típicas de 108 a 109 UFC por 1 g de cecum y 104 UFC por 1 g de bazo se pueden recuperar de animales infectados(Figura 2). La evaluación de la fibrosis en las secciones cecales manchadas de color rojo picrosirius indica fibrosis máx.......
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Discusión
Nuestra comprensión de la patogénesis de la EII se ha visto reforzada en gran medida por los modelos de ratón de inflamación intestinal. Aunque estos modelos individuales no recapitulan todas las características de la enfermedad humana compleja y multifactorial, han sido útiles para identificar las características clave de la progresión de la enfermedad. Las estenosis fibrosas asociadas con la EII siguen siendo una necesidad clínica importante no satisfecha, ya que los tratamientos actuales son ineficaces para revertir e.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos financieros de interés que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Ingrid Barta por los servicios de histología.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubos de cierre de caja fuerte de fondo redondo de 2 ml | Eppendorf | 22363344 | |
| Perlas de acero inoxidable | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| Puntas de pipeta de orificio grande | Fisher | 2707134 | |
| 2 mL placas megablock | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Agujas de sonda nasogástrica | FST | 18061-22 | |
| Sulfato de estreptomicina | Sigma | S9137 | |
| Molino mezclador | Retsch | MM |
Referencias
- Danese, S., Fiocchi, C. Ulcerative colitis. New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).
- Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. Crohn's disease. The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).
- Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J.
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Reimpresiones y permisos
