Este estudio describe el método de inyección intraarticular de monoyodoacetato en ratas y discute los comportamientos resultantes relacionados con el dolor y los cambios histopatológicos, que proporcionan referencias para futuras aplicaciones.
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Artículo de método
Modelo de dolor de osteoartritis inducido por inyección intraarticular de monoyodoacetato en ratas
En este artículo
Resumen
Resumen
Los modelos animales actuales de osteoartritis (OA) se pueden dividir en modelos espontáneos y modelos inducidos, los cuales tienen como objetivo simular los cambios fisiopatológicos de la OA humana. Sin embargo, como síntoma principal en la etapa tardía de la OA, el dolor afecta la vida diaria de los pacientes, y no hay muchos modelos disponibles. El modelo inducido por monoyodoacetato (MIA) es el modelo de dolor OA más utilizado, utilizado principalmente en roedores. MIA es un inhibidor de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, que causa la muerte de los condrocitos, la degeneración del cartílago, el osteofito y cambios medibles en el comportamiento animal. Además, los cambios en la expresión de la metaloproteinasa de matriz (MMP) y las citoquinas proinflamatorias (IL1 β y TNF α) se pueden detectar en el modelo inducido por MIA. Esos cambios son consistentes con las condiciones fisiopatológicas de OA en humanos, lo que indica que MIA puede inducir un modelo de dolor de OA medible y exitoso. Este estudio tiene como objetivo describir la metodología de inyección intraarticular de MIA en ratas y discutir los comportamientos relacionados con el dolor resultantes y los cambios histopatológicos.
Introducción
La osteoartritis (OA) es la enfermedad articular más común en el mundo, afectando a un estimado de 10-12% de las poblaciones en adultos1. La articulación más generalmente involucrada es la rodilla, y la OA tiene una mayor incidencia en adultos mayores, especialmente mujeres2. Como enfermedad crónica, la OA se desarrolla progresivamente durante décadas en insuficiencia articular con síntomas como pérdida de cartílago, inflamación sinovial, osteofitosis, disminución de la función y dolor crónico3. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la OA es la cuarta enfermedad más prevalente en las mu....
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Protocolo
Los procedimientos que involucran sujetos animales han sido aprobados por el Comité de Normas Médicas y Ética de la Universidad Médica China de Zhejiang y están de acuerdo con la legislación de China sobre el uso y cuidado de animales de laboratorio.
1. Inyección intraarticular de monoyodoacetato en la rodilla
- Después de una semana de aclimatación, divida aleatoria y equitativamente 40 ratas Sprague-Dawley macho que pesan 180-200 g (4-5 semanas de edad) en cuatro grupos (n = 10 ratas / grupo).
NOTA: Las ratas en el grupo control serán inyectadas intraarticularmente con 50 μL de solución salina, mientras que las ratas en los gru....
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Resultados
Con esta metodología, establecimos un modelo de dolor de OA en la rata y detectamos los cambios resultantes. MWT y TWL reflejaron alodinia mecánica e hiperalgesia térmica, respectivamente. Como se muestra en la Figura 1, MIA indujo alodinia mecánica e hiperalgesia térmica presente de manera dependiente de la dosis. Sorprendentemente, la disminución de MWT alcanzó un pico de 21 días a 28 días, y luego se recuperó, lo que sugiere que la reparación articular puede ocurrir en esta etapa, pero MW.......
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Discusión
El modelo de rata de OA inducida por MIA es un modelo bien establecido y ampliamente utilizado. La inyección intraarticular de MIA causa inicialmente inflamación severa y aguda, lo que da lugar a la fase más larga y degenerativa de OA17,18. En esta investigación, medimos la sensibilidad nociceptiva mediante MWT y TWL, y evaluamos las alteraciones de la marcha con un sistema de imagen. Informes anteriores encontraron que la inyección de MIA podría elevar la sensib.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este estudio fue financiado por la Fundación Provincial de Ciencias Naturales de Zhejiang de China (Nº de subvención: LY17H270016), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº de subvención: 81774331, 81873049 y 81673997) y el Proyecto Provincial de Ciencia y Tecnología de Zhejiang de Medicina Tradicional China de China (Grant No: 2013ZQ007 y 2016ZZ011).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Anticuerpo anti-Colágeno II | Abcam(UK) | 34712 | Anticuerpo primario para inmunohistoquímica (IHQ) |
| Anticuerpo anti-Colágeno X (Col10) | Abcam(UK) | 49945 | Anticuerpo primario para IHC |
| DigiGait Imaging System | Mouse Specifics (Boston, MA, USA) | Equipo para análisis de patrones de marcha | |
| Eosina | Sigma-Aldrich | 861006 | El tinte para la EH tinción |
| Fast Green FCF | Sigma-Aldrich | F7252 | El colorante para la tinción de SO |
| Anticuerpo anti-ratón de cabra | ZSGQ-BIO (Pekín, China) | PV-9002 | Anticuerpo secundario para IHC |
| Anticuerpo anti-conejo de cabra | ZSGQ-BIO (Pekín, China) | PV-9001 | Anticuerpo secundario para IHC |
| Hematoxilina | Sigma-Aldrich | H3163 | El colorante para la tinción de HE |
| MIA | Sigma-Aldrich | I4386-10G | polvo |
| MMP13 | Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, EE. UU.) | 69926 | Anticuerpo primario para IHC |
| Centro de inclusión de tejido modular | Thermo Fisher Scientific (EE. UU.) | EC 350 | Producir bloques de parafina. |
| Aparato de prueba plantar | UgoBasile (Italia) | 37370 | Equipo para el ensayo TWL |
| Kit de reactivos PrimeScript RT (Perfect Real Time) | TaKaRa Biotechnology Co. Ltd. (Dalian, China) | RR037A | Extraer ARN total de células cultivadas |
| Microtomos rotatorios y deslizantes | Thermo Fisher Scientific (USA) | HM325 | Secciones de parafina precisas. |
| Safranin-O | Sigma-Aldrich | S2255 | El colorante para la tinción de SO |
| Tissue-Tek VIP 5 Jr | Sakura (Japón) | Procesador de infiltración al vacío |
Referencias
- Hunter, D. J., Schofield, D., Callander, E. The individual and socioeconomic impact of osteoarthritis. Nature Reviews Rheumatology. 10 (7), 437-441 (2014).
- Neogi, T. The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis. Osteoarthritis and Cartilage. 21
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Reimpresiones y permisos
