Aprovechar la turbidez y la tromboelastografía para la caracterización complementaria del coágulo

Resumen

La fibrina es responsable de la formación de coágulos durante la hemostasia y la trombosis. Los ensayos de turbidez y tromboelastograhy (TEG) se pueden utilizar como herramientas sinérgicas que proporcionan una evaluación complementaria de un coágulo. Estas dos técnicas juntas pueden dar más información sobre cómo las condiciones de coagulación afectan la formación de coágulos fibrina.

Resumen

La trombosis es una de las principales causas de muerte en todo el mundo. La fibrina (génica) es la proteína principal responsable de la formación de coágulos o trombosis. Por lo tanto, caracterizar la formación de coágulos de fibrina es beneficioso para el estudio de la trombosis. La turbidez y la tromboelastografía (TEG) son ensayos in vitro ampliamente utilizados para monitorear la formación de coágulos. La turbidez mide dinámicamente la transmitancia de luz a través de una estructura de coágulo de fibrina a través de un espectrómetro y se utiliza a menudo en laboratorios de investigación. TEG es una técnica viscoelástica especializada que mide directamente la fuerza del coágulo sanguíneo y se utiliza principalmente en entornos clínicos para evaluar la hemostasia de los pacientes. Con la ayuda de estas dos herramientas, este estudio describe un método para caracterizar un coágulo de fibrina in vitro utilizando un modelo simplificado de coágulo de fibrinógeno/trombina. Las tendencias de datos en ambas técnicas se compararon en diversas condiciones de coagulación. Los coágulos de fibrina humana y bovina se formaron uno al lado del otro en este estudio, ya que los factores de coagulación bovina se utilizan a menudo como sustitutos de los factores de coagulación humanos en entornos clínicos y de investigación. Los resultados demuestran que el TEG y la formación de coágulos de la pista de turbidez a través de dos métodos distintos y cuando se utilizan juntos proporcionan resistencia complementaria al coágulo e información estructural de fibra a través de diversas condiciones de coagulación.

Introducción

La trombosis es la formación patológica de un coágulo de sangre en el cuerpo que bloquea la circulación sanguínea que conduce a una alta morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Hay de 1 a 2 casos de tromboembolismo venoso y de 2 a 3 casos de enfermedades vasculares inducidas por trombosis por cada 1000 personas anualmente^1,2. Aquí se presenta un método que aprovecha la tromboelastografía (TEG) y la turbidez para controlar la formación de coágulos bajo diversas condiciones de coagulación. La fibrina (ogen) es la proteína primaria que es responsable de la formación de coágulos en el cuerpo. En los últimos paso....

Protocolo

1. Preparación de la solución salina tampón de fosfato (PBS)

NOTA: PBS se utilizó a lo largo de este estudio, ya que los ensayos descritos no requerían la adición de calcio. Es importante tener en cuenta que al agregar calcio, a menudo utilizado para recalcificar los productos sanguíneos citrated, PBS debe evitarse como calcio se sabe que precipita en tampones de fosfato.

1. Haga un tampón de 0,01 M, pH 7,4 PBS mezclando cloruro sódico de 137 mM, fosfato de potasio monobásico de 1,8 mM, dibásico de fosfato sódico de 10 mM y cloruro de potasio de 2,7 mM en agua DI.
2. Verifique el pH tampón utilizando una sonda de pH y ajuste e....

Resultados

Los experimentos mostrados en la Figura 1 son curvas representativas de trazado de turbidez de coágulos de fibrina humana y bovina a diferentes niveles de fibrinógeno. En la Figura 2se muestran curvas representativas de trazado de TEG para la formación de coágulos de fibrina a diferentes niveles de fibrinógeno. Ambas curvas de trazado demuestran que después de un período de retraso después de la iniciación de la coagulación, la turbidez del coágulo o la amplitud.......

Discusión

Este protocolo demuestra la utilización de dos herramientas de caracterización de coágulos distintas que prueban un modelo simplificado de coágulos fibrinógenos/trombina utilizando componentes disponibles comercialmente. Tanto los ensayos de TEG como los de turbidez son fáciles de llevar a cabo. No sólo proporcionan exámenes de coágulos de punto final como la formación máxima de coágulos (Turb^Max y TEG^Max)y los tiempos de formación de coágulos^(Tiempo de turba y^TiempoTEG), sino .......

Materiales

Microplaca transparente UV de Bovina

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
fondo plano transparente de 96 pocillos	Corning	3635	Copolímero acrílico no tratado,
albúmina no estéril de suero humano	Millipore Sigma	A1653	≥ 96%, polvo liofilizado
Arium Mini Plus Sistema de agua ultrapura	Sartorius	NA	DI fuente de agua
Albúmina sérica bovina	Millipore Sigma	A2153	≥ 96%, polvo liofilizado
Vasos y clavijas desechables para TEG 5000 (Clear)	Haemonetics	REF 6211
Fibrinógeno, Plasma Bovino	Millipore Sigma	341573	contiene más del 95% de proteínas coagulables
Fibrinógeno, empobrecido en plasmingógeno, Plasma humano	Millipore Sigma	341578	Contiene ≥ 95% de proteínas coagulables.
Solución salina tamponada con fosfato	Millipore Sigma	P3813	Polvo, pH 7,4, para la preparación de soluciones de 1 L
Cloruro de potasio	Millipore Sigma	60130	≥ 99,5% de pureza
Fosfato de potasio monobásico	Millipore Sigma	P9791	≥ 98% de pureza
SevenEasy Medidor de pH	Mettler Toledo	S20
Cloruro de sodio	Millipore Sigma	71378	≥ 99,5% de pureza
Fosfato de sodio dibásico	Millipore Sigma	71636	≥ Pureza del 99,5%
Sistema lector de microplacas de detección múltiple SpectraMax M5	Molecular Devices	M5
TEG 5000 Thrombelastograph Sistema analizador de hemostasia	Haemonetics	07-022
Trombina,	Millipore Sigma	605157
Trombina, Plasma Humano, Alta Actividad	Millipore Sigma	605195