Artículo de método
Células madre se investigan continuamente como tratamientos potenciales para individuos con daño miocárdico, sin embargo, su disminución de la viabilidad y retención dentro del tejido lesionado puede afectar su eficacia a largo plazo. En este manuscrito describimos un método alternativo para la entrega de células madre en un modelo murino de lesión por reperfusión de isquemia.
Existe un interés significativo en el uso de células madre (SCs) para la recuperación de la función cardíaca en individuos con lesiones miocárdicas. Más comúnmente, la terapia con células madre cardíacas se estudia mediante la administración de SCs simultáneamente con la inducción de la lesión miocárdica. Sin embargo, este enfoque presenta dos limitaciones significativas: el entorno isquémico proinflamatorio temprano puede afectar la supervivencia de las CC trasplantadas, y no representa el escenario de infarto subagudo donde es probable que se utilicen los CC. Aquí describimos una serie de procedimientos quirúrgicos de dos partes para la inducción de la lesión de isquemia-reperfusión y la administración de células madre mesenquimales (MSC). Este método de administración de células madre puede permitir la viabilidad más larga y la retención alrededor del tejido dañado al eludir la respuesta inmunitaria inicial. Un modelo de lesión por reperfusión de isquemia fue inducido en ratones acompañado de la administración de células madre mesenquimales (3,0 x 105), expresando establemente el gen reportero de la luciérnqueasa luciferasa bajo el promotor de CMV expresado constitutivamente, intramiicciardialmente 7 días después. Los animales fueron objeto de imágenes por ultrasonido e imágenes bioluminiscentes para la confirmación de lesiones e inyección de células, respectivamente. Es importante destacar que no hubo una tasa de complicaciones adicional al realizar este enfoque de dos procedimientos para la entrega de SC. Este método de administración de células madre, colectivamente con la utilización de genes reporteros de última generación, puede permitir el estudio in vivo de viabilidad y retención de CC trasplantados en una situación de isquemia crónica comúnmente vista clínicamente, al tiempo que se elude la respuesta proinflamatoria inicial. En resumen, establecimos un protocolo para la entrega retardada de células madre en el miocardio, que puede ser utilizado como un nuevo enfoque potencial en la promoción de la regeneración del tejido dañado.
Las enfermedades cardiovasculares siguen siendo la causa más común de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Se ha encontrado que los eventos isquémicos cardíacos son perjudiciales para la función general del miocardio y las células circundantes1. Sólo ̴0,45-1,0% de los cardiomiocitos se regenerarán cada año después de que se produzca daño miocárdico2. A pesar de la creciente demanda y el enfoque inherente en el desarrollo de tratamientos, las terapias que ayudan en la regeneración del tejido lesionado han sido difíciles de establecer y todavía requieren una mayor optimización3,,
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Los experimentos se realizaron en ratones hembra C57BL/6, edad 10-12 semanas y 20-25 g de peso corporal. Todos los procedimientos con animales cumplieron con las normas establecidas en la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (Instituto de Recursos Animales de Laboratorio, Academia Nacional de Ciencias, Bethesda, MD, EE. UU.) y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales Institucionales (IACUC) de mayo Clinic College of Medicine.
1. Preparación e intubación
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La lesión por reperfusión de isquemia se indujo en ratones el día 0, seguida de un ecocardiograma postoperatorio y un electrocardiograma el día anterior a la implantación de células madre. El análisis de ultrasonido y electrocardiograma confirmó el infarto y disminuyó la función contráctil ventricular(Figura 1A-D). Un examen adicional de los datos mostró que la fracción de eyección y el acortamiento fraccionado disminuyeron en ratones que recibieron lesiones isquémicas, mien.......
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Más de 85 millones de personas en todo el mundo están afectadas por enfermedades cardiovasculares3. La alta prevalencia de estos eventos isquémicos garantiza un mayor desarrollo y expansión de terapias alternativas para promover la regeneración del tejido dañado. Los métodos tradicionales utilizan el procedimiento de reperfusión de isquemia en un entorno agudo con posterior administración de las terapias1. Las reacciones inflamatorias están en su apogeo entre 3-4 días despu.......
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Los autores no tienen nada que revelar.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Irrigación con NaCl al 0,9%, USP | Baxter | 0338-0048-04 | |
| 11x12" Paño quirúrgico Press n' Seal, esterilizable en autoclave | SAI Infusion Technologies | PSS-SD | |
| 24G Tubo de catéter intravenoso de 3/4" | Jelco | 4053 | |
| 28G x 1/2" 1mL jeringa para alergias | BD | 305500 | Inyección de analgésico |
| Jeringa de insulina de 30G x 1/2" 3/10cc | Ulticare | 08222.0933.56 | Inyección de células madre |
| 6-0 S-29, 12" Sutura de Vicryl | Ethicon | J556G | Intercostal, músculo superficial y capa de piel Cierre de incisión |
| 9-0 BV100-4, 5" Sutura de Ethilon | Ethicon | 2829G | Ligadura de la arteria LAD |
| Almohadilla absorbente | Thermo Fischer Scientific | 14-206-64 | Para debajo del animal |
| Almohadillas de preparación con alcohol, 2 capas, mediana | Coviden | 6818 | |
| Mascarilla antivaho | Halyard | 49235 | |
| Bonn Tijeras de estrabismo, curvas, romas | Fine Science Tools | 14085-09 | |
| Buprenorfina HCL SR LAB 1 mg/ml, 5 ml | Farmacia | ZooPharm Buprenorfina analgésico narcótico formulado en un polímero que ralentiza la absorción prolongando la duración de la acción (72 horas de duración de actividad). | |
| Portaagujas Castroviejo, curvo | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Curity esponjas de gasa estériles | Coviden | 397310 | |
| Pinzas de atado de suturas delicadas, dobladas en 45 ángulos | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| Maquinilla de afeitar eléctrica | Wahl | Eliminación de pelo | |
| Isoflurano 100 ml | Cardinal Health | PI23238 | Anestésico |
| Bata | |||
| Monoject 1 mL jeringa hipodérmica | Coviden | 8881501400 | |
| Pinzas de iris de Moria, curvas, dentadas (x2) | Fine Science Tools | 11370-31 | |
| Retractor de espéculo Moria | Fine Science Tools | 17370-53 | |
| Kit de intubación endotraqueal para ratones | Kent Scientific | ||
| Nair crema depilatoria | Johnson & Johnson | Eliminación de pieles | |
| Optixcare eye lube plus | Aventix | Lubricante ocular estéril | |
| Physiosuite Ventilador | Kent Scientific | ||
| PolyE Tubo de polietileno | Harvard Apparatus | 72-0191 | Compresión temporal de la arteria LAD |
| Hisopos de povidona yodado | PDI | S41125 | |
| Bisturí, 10 cuchillas | Bard-Parker | 371610 | |
| Aplicadores estériles de 3" con punta de algodón | Cardinal Health | C15055-003 | |
| Aplicadores estériles de punta de algodón cónico de 6" | Puritan | 25-826-5WC | |
| Guantes estériles | Cardinal Health | N8830 | |
| Bolsas de esterilización | Medline | MPP100525GS | |
| Gorro | quirúrgico | ||
| Microscopio quirúrgico | Leica | M125 | |
| Pinza de atado de suturas, recta (x2) | Fine Science Tools | 10825-10 | |
| Cinta quirúrgica Transpore | 3M | 1527-1 | |
| Pomada antibiótica triple | G& W Laboratories | 11-2683ILNC2 | Aplicación tópica para prevenir la infección |
| Vannas-Tü bingen Tijeras de resorte, curvadas | Fine Science Tools | 15004-08 | |
| Vaporizador Vetflo | Kent Scientific |
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