Taurocolato de sodio inducido pancreatitis aguda grave en ratones C57BL/6

Resumen

Los modelos animales para la pancreatitis aguda grave permiten el estudio de los cambios fisiopatológicos en la etapa inicial, facilitando la observación de la evolución de los eventos inflamatorios. Aquí proporcionamos un protocolo para la inducción de pancreatitis biliar aguda grave por infusión retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto pancreático de ratones C57BL/ 6 anestesiados.

Resumen

La inducción de la pancreatitis aguda biliar por infusión de taurocolato de sodio ha sido ampliamente utilizada por la comunidad científica debido a la representación de la condición clínica humana y la reproducción de eventos inflamatorios correspondientes a la aparición de pancreatitis biliar clínica. La gravedad del daño pancreático se puede evaluar midiendo la concentración, la velocidad y el volumen del ácido biliar infundido. Este estudio proporciona una lista de verificación actualizada de los materiales y métodos utilizados en la reproducción del protocolo y muestra los principales resultados de este modelo de pancreatitis aguda (AP). La mayoría de las publicaciones anteriores se han limitado a reproducir este modelo en ratas. Hemos aplicado este método en ratones, lo que proporciona ventajas adicionales (es decir, la disponibilidad de un arsenal de reactivos y anticuerpos para estos animales junto con la posibilidad de trabajar con cepas de ratones modificadas genéticamente) que pueden ser relevantes para el estudio. Para la inducción de pancreatitis aguda en ratones, presentamos un protocolo sistemático, con una dosis definida de taurocolato de sodio al 2,5% a una velocidad de infusión de 10 μL/min durante 3 min en ratones C57BL/6 que alcanza su nivel máximo de gravedad dentro de las 12 h de la inducción y destaca los resultados con resultados que validan el método. Con la práctica y la técnica, el tiempo total estimado, desde la inducción de la anestesia hasta la finalización de la infusión, es de 25 min por animal.

Introducción

En humanos, la presencia de cálculos biliares es la causa más frecuente de pancreatitis debido a la obstrucción de la porción terminal del coledocal, interrumpiendo el flujo de secreciones pancreáticas y provocando un intenso proceso inflamatorio en el páncreas, con un aumento de la concentración de enzimas digestivas en el suero y mediadores ^{inflamatorios1,2}.

Se han propuesto dos teorías diferentes para explicar el desarrollo de la pancreatitis aguda (PA). La teoría del "canal común" sugiere que los cálculos presentes en la vesícula biliar obstruyen el sistema de conductos biliares....

Protocolo

Este protocolo fue aprobado por el Comité de Ética para el uso de animales de la Facultad de Medicina de la USP, Num. Proyecto: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Para este protocolo se utilizaron ratones C57BL/6, de 6 semanas de edad, con un peso de 20 ± 2 g (n = 9/grupo).

1. Laparotomía

1. Anestesiar a los animales con xilazina (10 mg/kg) y solución de ketamina (80 mg/kg), por vía subcutánea (0,1 ml/10 g de peso corporal) utilizando una jeringa de 1 ml y una aguja de 13x0,45 mm 26G 1/2. Compruebe si hay suficiente profundidad de anestesia pellizcando el dedo del pie. Controle la temperatura corporal con almohadillas térmicas. Asegúrese de que ....

Resultados

La gravedad de la pancreatitis se puntuó entre 0-3 según la escala de ^Schmidt21 donde cero corresponde a la ausencia, 1 corresponde a una presencia leve (<25%), 2 corresponde a una presencia moderada (entre 25 y 50%) y 3 corresponde a una presencia intensa (> 50%) (Tabla 1). Las mediciones realizadas fueron actividad plasmática de la amilasa, edema pancreático, célula acinar, lesión/necrosis, inflamación pancreática (por análisis histológico .......

Discusión

El método de inducción de la pancreatitis aguda por infusión retrógrada de taurocolato de sodio ya se ha demostrado en ^{ratas22,23,24}. Tres trabajos similares, publicados en 2008, 2010 y 2015, sirvieron de referencia para el protocolo3,14,15. En este trabajo, enumeramos todos los pasos críticos para reproducir este método en ratones C57B.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
aguja de 0,4 mm	INTRAG MEDICAL TECH		30G
Tubo de polietileno de 0,54 mm	Tygon	730010-Bloque	de
espuma de poliestireno	-	--
cinta de enmascarar para montar el ratón	Missner	1236-Bomba	de
infusión programada para 10µ L/min.	Havard aparatus-Bomba peristáltica serie	MA1 55-7766	Modelo 66 Tijeras y
pinzas
pequeñas Providina yodada antiséptica Pfizer		12086OR	antisepsia
70% etanol	SIGMA	459836	Mix 700 mL 100% etanol con 300 mL dH2O
Cuchilla de afeitar	Lord	bdk9a1ghk6	Para tricotomía
Taurocolato de sodio	Sigma-Aldrich	86339- 1G	NÚMERO CAS- 345909-26-4
pinza para microvasos	Medicon Surgical	56.87.35	Aproximador, apertura 4,0 mm, presión de cierre 30 -  40 g
6-0 prolene	Bioline	5162	Línea de sutura
Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL	Cristá lia
Xilazine 2%	Syntec
Solución salina estéril (0,9% (wt/vol) solución salina)	Farmace	105851
Azul de metilo	Sigma-Aldrich Chemicals	M5528
MILLIPLEX  MAPA  Panel de perlas magnéticas de citocinas/quimiocinas de ratón - Ensayo multiplexado de inmunología	MERCK	MCYTOMAG-70K	Analice simultáneamente múltiples biomarcadores de citocinas y quimiocinas con ensayos Multiplex basados en perlas utilizando la tecnología Luminex, en muestras de suero, plasma y cultivos celulares de ratón.
Ensayo de amilasa	Labtest	11
Retractor Desmarres 13-mm ancho	ROBOZ	RS-6672

90183210 peristálticas