La fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano (NIR-PIT) es una estrategia terapéutica emergente contra el cáncer que utiliza un conjugado anticuerpo-fotoabsorbente (IR700Dye) y luz NIR para destruir las células cancerosas. Aquí, presentamos un método para evaluar el efecto antitumoral de NIR-PIT en un modelo de ratón de cáncer de pulmón diseminado pleural y mesotelioma pleural maligno utilizando imágenes de bioluminiscencia.
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Artículo de método
Fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano para modelos de ratón de diseminación pleural
En este artículo
Resumen
Resumen
La eficacia de la fotoinmunoterapia se puede evaluar con mayor precisión con un modelo de ratón ortotópico que con uno subcutáneo. Se puede utilizar un modelo de diseminación pleural para la evaluación de métodos de tratamiento para enfermedades intratorácicas como el cáncer de pulmón o el mesotelioma pleural maligno.
La fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano (NIR-PIT) es una estrategia de tratamiento del cáncer desarrollada recientemente que combina la especificidad de los anticuerpos dirigidos al tumor con la toxicidad causada por un fotoabsorbente (IR700Dye) después de la exposición a la luz NIR. La eficacia de NIR-PIT se ha reportado usando varios anticuerpos; sin embargo, sólo unos pocos informes han demostrado el efecto terapéutico de esta estrategia en un modelo ortotópico. En el presente estudio, demostramos un ejemplo de evaluación de la eficacia del modelo de cáncer de pulmón diseminado pleural, que fue tratado con NIR-PIT.
Introducción
El cáncer sigue siendo una de las principales causas de mortalidad a pesar de décadas de investigación. Una razón es que la radioterapia y la quimioterapia son técnicas altamente invasivas, lo que puede limitar sus beneficios terapéuticos. Las terapias dirigidas celulares o moleculares, que son técnicas menos invasivas, están recibiendo una mayor atención. La fotoinmunoterapia es un método de tratamiento que mejora sinérgicamente el efecto terapéutico mediante la combinación de inmunoterapia y fototerapia. La inmunoterapia mejora la inmunidad tumoral al aumentar la inmunogenicidad del microambiente tumoral y reducir la supresión inmunorreguladora, lo que resulta en la....
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Protocolo
Todos los experimentos in vivo se realizaron de conformidad con la Guía para el cuidado y uso de los recursos de animales de laboratorio del Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Nagoya (aprobación # 2017-29438, # 2018-30096, # 2019-31234, # 2020-20104). Ratones desnudos homocigotos homocigotos de seis semanas de edad fueron comprados y mantenidos en el Centro de Animales de la Universidad de Nagoya. Al realizar el procedimiento en ratones, fueron anestesiados con isoflurano (introducción: 4-5%, mantenimiento 2-3%); la pata fue presionada con pinzas para confirmar la profundidad de la anestesia.
1.
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Resultados
El anticuerpo anti-podoplanina NZ-1 se conjudicó con IR700 para generar NZ-1-IR700. Confirmamos la unión de NZ-1 e IR700 en un SDS-PAGE (Figura 8). La expresión de luciferasa H2373 (H2373-luc) se preparó transfectando células malignas de mesotelioma (H2373) con un gen luciferasa10.
Anestesiamos ratones desnudos homocigómicos hembra de 8-12 semanas de edad e inyectamos 1 × 105 células H2373-luc en la cavidad torácica. El día de la.......
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Discusión
En este estudio, demostramos un método para medir el efecto terapéutico de NIR-PIT en el modelo de diseminación pleural de MPM. La muerte celular altamente selectiva se realizó con NIR-PIT; así, el tejido normal apenas se dañó23,24,25. Con este tipo de muerte celular selectiva, se demostró que NIR-PIT es seguro en los modelos diseminados9,26
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0.25w/v% Tripsina-1mmol/l EDTA 4Na Solución con Rojo de Fenol | Wako | 209-016941 | para cultivo celular |
| Jeringa de 1 ml | TERUMO | SS-01T | para experimento con ratones |
| Aguja 30G | Nipro | 1907613 | para ratón |
| experimento BALB/cSlc-nu/nu | Japan SLC | ||
| Collidal Blue Kit | Invitrogen | LC6025 | uso para tinción de proteínas en gel |
| Coomassie (Bradford) Plus | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, EE. UU.) | PI-23200 | para medir la concentración de APC |
| Dimetilsulfóxido (DMSO) | Wako | 043-07216 | uso para la conjugación de IR700 |
| D-luciferina (sal de potasio) | Cayman Chemical | 14681 | para imágenes de bioluminiscencia y DLIT |
| GraphPad Prism7 | Software GraphPad | para análisis estadístico | |
| imagen bioluminiscente y DLIT | |||
| Living Image | PerkinElmer | para el análisis de imágenes bioluminiscentes y DLIT | |
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, EE. UU.) | S9763 | uso para la conjugación de IR700 |
| Láser NIR | Changchun Tecnología de optoelectrónica de New Industries | MRL-III-690R | para irradiación NIR |
| Novex WedgeWell 4 a 20%, Tris-Glycine, 1,0 mm, Mini Gel de Proteínas, 12 pocillos | Invitrogen | XP04202BOX | uso para SDS-PAGE |
| NuPAGE LDS Sample Buffer (x4) | Invitrogen | NP0007 | uso para SDS-PAGE |
| Medidor de potencia óptica | Thorlabs (Newton, NJ, EE. UU.) | PM100 | para medir la salida del láser NIR |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | |
| Pearl Trilogy sistema de imagen | Li-Cor Biosciences | para la captura de imágenes fluorescentes | |
| Solución de penicilina-estreptomicina (x100) | Wako | 168-23191 | para cultivo celular |
| Clorhidrato de puromicina | ThermoFisher | A1113803 | para la transfección de luciferasa |
| RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral Prtículos | PerkinElmer | CLS960002 | para la transfección de luciferasa |
| RPMI-1640 con L-glutamina y Phenol Red | Wako | 189-02025 | para cultivo celular |
| Sephadex G25 columna (PD-10) | GE Healthcare (Piscataway, NJ, EE. UU.) | 17-0851-01 | uso para la conjugación de IR700 |
| UV-1900i | Shimadzu | para medir la concentración de APC |
Referencias
- Xu, X., Lu, H., Lee, R. Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
- Mitsunaga, M., et al. Cancer cell-selective in vivo near....
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Reimpresiones y permisos
