En este informe presentamos un protocolo que permite al investigador generar un modelo murino de uveítis intraocular. Más comúnmente conocida como uveítis autoinmune experimental (EAU), este modelo establecido captura muchos aspectos de la enfermedad humana. Aquí, describiremos cómo inducir y monitorear la progresión de la enfermedad utilizando varias lecturas.
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Artículo de método
Uveítis autoinmune experimental: un modelo de ratón inflamatorio intraocular
En este artículo
Resumen
Resumen
La uveítis autoinmune experimental (EAU) es impulsada por células inmunes que responden a los autoantígenos. Muchas características de este modelo de enfermedad inflamatoria intraocular no infecciosa recapitulan el fenotipo clínico de la uveítis posterior que afecta a los humanos. EAU se ha utilizado de manera confiable para estudiar la eficacia de nuevas terapias inflamatorias, su modo de acción y para investigar más a fondo los mecanismos que sustentan la progresión de la enfermedad de los trastornos intraoculares. Aquí, proporcionamos un protocolo detallado sobre la inducción de EAU en el ratón C57BL / 6J, el organismo modelo más utilizado con susceptibilidad a esta enfermedad. La evaluación clínica de la gravedad y progresión de la enfermedad se demostrará mediante fundoscopia, examen histológico y angiografía con fluoresceína. El procedimiento de inducción consiste en la inyección subcutánea de una emulsión que contiene un péptido (IRBP1-20) de la proteína ocular interfotorreceptora de la proteína de unión retinoide (también conocida como proteína de unión al retinol 3), adyuvante completo de Freund (CFA) y suplementado con Mycobacterium tuberculosis muerta. La inyección de esta emulsión viscosa en la parte posterior del cuello es seguida por una sola inyección intraperitoneal de toxina Bordetella pertussis . Al inicio de los síntomas (día 12-14) y bajo anestesia general, se toman imágenes fundoscópicas para evaluar la progresión de la enfermedad a través del examen clínico. Estos datos se pueden comparar directamente con los de los puntos temporales posteriores y el pico de la enfermedad (día 20-22) con las diferencias analizadas. Al mismo tiempo, este protocolo permite al investigador evaluar las posibles diferencias en la permeabilidad y el daño de los vasos mediante angiografía con fluoresceína. La EAU puede ser inducida en otras cepas de ratón, tanto de tipo salvaje como genéticamente modificadas, y combinada con nuevas terapias que ofrecen flexibilidad para estudiar la eficacia de los medicamentos y / o los mecanismos de la enfermedad.
Introducción
Este protocolo demostrará cómo inducir Uveítis Autoinmune Experimental (EAU) en el ratón C57BL / 6J mediante una sola inyección subcutánea de un antígeno retiniano en un adyuvante emulsionado. Los métodos para monitorear y evaluar la progresión de la enfermedad se detallarán a través de imágenes fundoscópicas y examen histológico, con parámetros de medición descritos dentro. Además, se discutirá la angiografía con fluoresceína, una técnica para examinar la estructura y permeabilidad de los vasos sanguíneos de la retina.
Este modelo EAU recapitula las características centrales de la uveítis posterior no infecciosa en humanos con respecto a l....
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Protocolo
Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con la Ley de Animales (Procedimientos Científicos) del Reino Unido de 1986 y las directrices institucionales del Organismo de Revisión Ética y de Bienestar Animal (AWERB).
1. Carcasa de ratones C57BL/6J
- Alojar ratones en un ambiente específico libre de patógenos, en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas y alimentos y agua disponibles ad libitum.
- Realizar todos los experimentos en mujeres adultas C57BL / 6J (las mujeres son elegidas preferentemente ya que hay una incidencia de mujeres a hombres de 1.4 a 1 en pacientes con uveítis). Aleatorizar ratones hembra C57BL/....
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Resultados
En este protocolo, describimos un método paso a paso para inducir un modelo de uveítis autoinmune experimental (EAU) mediante la inmunización de ratones con un péptido retiniano uveitogénico derivado del IRBP. La evaluación de la enfermedad empleando enfoques ampliamente utilizados y de fácil acceso están cubiertos, aunque estos no son exclusivos y pueden ser añadidos o reemplazados parcialmente por otras técnicas de imagen. Los primeros signos de EAU en ratones C57BL / 6J se pueden detectar dos semanas después de la inm.......
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Discusión
Los modelos animales experimentales son herramientas necesarias para estudiar la patogénesis de la enfermedad y las pruebas preclínicas de nuevos paradigmas terapéuticos. En el protocolo actual, hemos discutido una metodología para inducir, monitorear y puntuar EAU, un modelo experimental de uveítis inflamatoria intraocular. Este modelo EAU tiene más del 95% de incidencia de enfermedad cuando todos los procedimientos se realizan de acuerdo con el protocolo descrito en este documento, y da como resultado el desarrollo de .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar con este trabajo.
Agradecimientos
JG recibió una beca UCL Impact Studentship y fondos de Rosetrees Trust para apoyar a CB. VC recibió una subvención de colaboración en investigación de Akari Therapeutics Inc. Nos gustaría agradecer al Instituto de Oftalmología de UCL, Unidad de Servicio Biológico, especialmente a la Sra. Alison O'Hara y su equipo por su apoyo técnico.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| antisedan | ZOETIS, EE.UU | para despertar | |
| Complete Freund' s Coadyuvante; CFA | Sigma, Reino Unido | F5881 | para inmunización |
| Domitor | Orion Pharma, Finlandia | para anestesia | |
| Flourescein | Sigma, Reino Unido | F2456 | para angiografía |
| IRBP1-20 | Chamberidge péptido, péptido del Reino Unido | ; antígeno | |
| Ketamina | Orion Pharma, Finlandia | para anestesia | |
| Micron III | Phoenix Research, EE. UU | para fundoscopia | |
| Suero de ratón | Sigma, Reino Unido | M5905 | para inmunización |
| Mycobacterium terberculosis | Sigma, Reino Unido | 344289 | para la inmunización |
| Toxina | Sigma para | P2980 | para inmunización |
| clorhidrato de fenilefrina 2.5% | Bausch & Lomb Reino Unido | PHEN25 | para la dilatación |
| Tropicamida 1% | SANDOZ | para la dilatación | |
| Viscotears | WELDRICKS Pharmacy, Reino Unido | 2082642 | para la lubricación ocular |
Referencias
- Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
- Klaska, I. P., Forrester, J. V.
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Reimpresiones y permisos
