Preparación De Andamios Renales Descelularizados En Ratas

Resumen

Este protocolo introduce un método para desarrollar un andamio usando riñones de rata descelularizados. El protocolo incluye procesos de descelularización y recelularización para confirmar la biodisponibilidad. La descelularización se realiza utilizando Tritón X-100 y dodecil sulfato de sodio.

Resumen

La ingeniería de tejidos es una disciplina de vanguardia en biomedicina. Las técnicas de cultivo celular se pueden aplicar para la regeneración de tejidos y órganos funcionales para reemplazar órganos enfermos o dañados. Se necesitan andamios para facilitar la generación de órganos o tejidos tridimensionales utilizando células madre diferenciadas in vivo. En este informe, describimos un método nuevo para desarrollar andamios vascularizados usando los riñones descelularizados de la rata. Las ratas ocho-semana-viejas de Sprague-Dawley fueron utilizadas en este estudio, y la heparina fue inyectada en el corazón para facilitar el flujo en los recipientes renales, permitiendo que la heparina perfunda en los recipientes renales. La cavidad abdominal fue abierta, y el riñón izquierdo fue recogido. Los riñones recogidos fueron perfundidos por 9 h usando los detergentes, tales como Triton X-100 y sulfato del dodecil del sodio, para descelularizar el tejido. Los andamios descelularizados del riñón entonces fueron lavados suavemente con la penicilina/la estreptomicina y la heparina del 1% para quitar la ruina celular y los residuos químicos. Se espera que el trasplante de células madre con los andamios vasculares descelularizados facilite la generación de nuevos órganos. Así, los andamios vascularizados pueden proporcionar una base para la ingeniería del tejido de los injertos del órgano en el futuro.

Introducción

Las técnicas de cultivo celular se aplican para la regeneración de tejidos y órganos funcionales para reemplazar órganos enfermos o dañados. El trasplante alogénico del órgano es actualmente el tratamiento más común para el daño irreversible del órgano; sin embargo, este acercamiento requiere el uso de la immunosupresión para prevenir el rechazamiento del órgano trasplantado. Por otra parte, a pesar de los avances en inmunología del trasplante, el 20% de los receptores de trasplantes pueden experimentar un rechazo agudo dentro de los 5 años, y dentro de los 10 años posteriores al trasplante, el 40% de los receptores pueden perder su injerto trasplantado o morir

Protocolo

Este estudio fue aprobado por la administración de la Universidad Nacional de Medicina de Pusan y se llevó a cabo de acuerdo con las directrices éticas para el uso y cuidado de los animales. (certificado nº 2017-119). Antes de cualquier estudio en animales, se debe obtener la aprobación institucional.
NOTA: Todos los instrumentos/equipos quirúrgicos y anestésicos y reactivos recomendados para la presentación quirúrgica exitosa y la obtención de imágenes de órganos abdominales se detallan en la Tabla 1.

1. Procedimientos de preparación para la cosecha de riñones de rata

1. En preparación para la cirugía, coloque ra....

Resultados

La morfología gruesa de los riñones de rata fue de color rojo oscuro (Figura 1A). Después de la descelularización, el riñón se volvió pálido y translúcido (Figura 1D). El ADN genómico residual se evaluó con un kit comercial de acuerdo con las instrucciones del fabricante, en andamios renales descelularizados y en comparación con el de los riñones nativos (control). El análisis cuantitativo confirmó que la DNA genomic del tejido casi fue eliminada después de la d.......

Discusión

Se han utilizado varios protocolos para la descelularización de órganos y otros tejidos. El protocolo óptimo de descelularización debe preservar la arquitectura tridimensional de la matriz extracelular (ECM). En general, tales protocolos consisten en lisear la membrana celular mediante procesamiento físico o soluciones iónicas, disociar el citoplasma y el núcleo de la ECM mediante procesamiento enzimático o detergentes, y luego eliminar los desechos celulares del tejido^3. Los procesos físicos incl.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Jeringa de 1 cc (inyectar sondas y soluciones para vehículos	Becton Dickinson	305217
10-0 ethilon para anastomosis de vasos	Ethicon	9032G
Aguja guía de 25 pulgadas de calibre (para catéteres vasculares)	Becton Dickinson	305145
3-0 PDS rata de cierre de incisión	Ethicon	Z316H
3-0 Prolene rata	de cierre de incisiónEthicon	8832H
3-0 bobina de seda acceso/ligadura vascular en rata	Braintree Scientific	SUT-S 110
4-0 PDS cierre de incisión ratón	Ethicon	Z773D
4-0 Prolene cierre de incisión ratón	Ethicon	8831H
5-0 bobina de seda acceso/ligadura vascular en ratón	Braintree Scientific	SUT-S 106
Tijeras finas para cortar la fascia/tejido conectivo	Fine Science Tools	14058-09
Portaagujas Halsey	Fine Science Tools	12001-13
Kelly Hemostat para ratas: pinza muscular para minimizar el sangrado cuando se corta	Fine Science Tools	13018-14
Tubo de polietileno 50, tubo de catéter de 100 pies	Braintree	Scientific.023" y tiempos; .038"
Pinzas vasculares Schwartz microserrefine	Fine Science Tools	18052-01 (recta)
		18052-03 (curvada)
Tijeras quirúrgicas para cortar la piel	Fine Science Tools	14002-12
Vannas-Tubingen Tijeras de resorte para arteriotomía	Fine Science Tools	15003-08