La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad caracterizada por inflamación y fibrosis del páncreas, a menudo asociada con dolor abdominal intratable. Este artículo se centra en refinar la técnica para generar un modelo de ratón de CP mediante infusión de conductos biliares con ácido sulfónico trinitrobenceno 2,4,6 (TNBS).
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Artículo de método
Un modelo de ratón para la pancreatitis crónica a través de la infusión de TNBS del conducto biliar
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad compleja que involucra inflamación pancreática y fibrosis, atrofia glandular, dolor abdominal y otros síntomas. Se han desarrollado varios modelos de roedores para estudiar la CP, de los cuales el modelo de infusión de ácido sulfónico trinitrobenceno (TNBS) del conducto biliar 2,4,6 replica las características del dolor neuropático observado en la PC. Sin embargo, la infusión de medicamentos para las vías biliares en ratones es técnicamente desafiante. Este protocolo demuestra el procedimiento de infusión de TNBS de conducto biliar para la generación de un modelo de ratón CP. TNBS se infundió en el páncreas a través de la ampolla de Vater en el duodeno. Este protocolo optimizó el volumen de medicamentos, las técnicas quirúrgicas y el manejo de medicamentos durante el procedimiento. Los ratones tratados con TNBS mostraron características de PC reflejadas por las reducciones de peso corporal y páncreas, los cambios en los comportamientos asociados al dolor y la morfología pancreática anormal. Con estas mejoras, la mortalidad asociada con la inyección de TNBS fue mínima. Este procedimiento no solo es crítico en la generación de modelos de enfermedad pancreática, sino que también es útil en la administración local de medicamentos pancreáticos.
Introducción
La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad inflamatoria crónica caracterizada por la atrofia del páncreas, fibrosis, dolor abdominal y eventual pérdida de las funciones exocrina y endocrina1. Los tratamientos médicos y quirúrgicos actuales no son curativos, sino que se llevan a cabo para aliviar los síntomas que son la consecuencia de la enfermedad: dolor abdominal refractario, disfunción endocrina y exocrina. Por lo tanto, se necesitan urgentemente tratamientos más efectivos2. Los modelos animales proporcionan una herramienta esencial para desarrollar una mejor comprensión de la enfermedad e investigar posibles tera....
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Protocolo
Todos los procedimientos se llevaron a cabo con la aprobación de los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Carolina del Sur y el Centro Médico Ralph H. Johnson. En este estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6J entre 8-10 semanas de edad. Los ratones fueron alojados bajo un ciclo estándar de 12 luces / 12 oscuros con acceso ad libitum a los alimentos y al agua.
1. Preparación de TNBS solución inyectable
- Preparar etanol al 10% en solución salina al 0,9%. Disolver TNBS (ver Tabla de Materiales)en etanol al 10% a una concentración final de 7,5 mM añadiendo 7,5 μL de TNBS....
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Resultados
Los procedimientos de infusión de conductos biliares se optimizaron para reducir la mortalidad de ratones asociada con este procedimiento10. TNBS se administró por primera vez en un volumen total de 35 μL o 50 μL. La inyección de TNBS en un volumen de 50 μL podría llegar a todo el páncreas e inducir un fenotipo de enfermedad más homogéneo(Figura 1B). Además, la inyección de TNBS utilizando una jeringa de insulina con aguja 31G podría controlar mejor la velocidad de in.......
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Discusión
La infusión de TNBS en las vías biliares para inducir pancreatitis crónica es técnicamente un desafío en ratones, ya que hasta el 22,5% de los ratones pueden morir dentro de los 3-4 días posteriores a la infusión del medicamento10. Aquí, este informe refinó el procedimiento basado en estudios previos y redujo la mortalidad temprana de ratones a <10%. Por ejemplo, el aumento del volumen de medicamentos (de 35 μL a 50 μL) puede garantizar que los medicamentos lleguen a todo el páncreas. El uso de un.......
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Divulgaciones
Todos los autores declaran que no tienen conflicto de intereses.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por el Departamento de Asuntos de Veteranos (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536), y el Instituto Nacional de Salud otorga subvenciones # 1R01DK105183, DK120394 y DK118529 a HW. Agradecemos al Dr. Hongju Wu por compartir experiencias técnicas.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 10% Formalina tamponada neutra v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Almohadillas de preparación con alcohol, estériles | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Sistema de anestesia animal | VetEquip, Inc. | ||
| Clorhidrato de buprenorfina, inyección | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Tubos de centrífuga, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Etanol, absoluto (200 pruebas), grado de biología molecular | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Tijeras de microdisección extrafinas 4" rectas afiladas | Roboz Surgical Instrumento Co. | RS-5882 | |
| Pinzas Graefe 4" punta extra delicada | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Almohadilla térmica | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Portaagujas 5.25" | Roboz Instrumento Quirúrgico Co. | RS-7850 | |
| Jeringa de insulina con aguja de calibre 31 | BD | 324909 | |
| Almohadillas de preparación de yodo | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurano | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Micro clip de aplicación de pinzas 5.5" | Roboz Instrumento Quirúrgico Co. | RS-5410 | |
| Micro clip, recto fuerte curvo 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
| Micro clip, recto, ancho de clip de 0,75 mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
| Solución de ácido picrilsulfónico, TNBS, 1M en H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Sutura de polipropileno 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Sutura de polipropileno 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Cloruro de sodio, solución intravenosa al 0,9% | VWR | 2B1322Q | |
| Paño quirúrgico estéril | Med-Vet International | DR1826 | |
| Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Filamentos Von Frey | Bioseb | EB2-VFF |
Referencias
- Klauss, S., et al. Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison. The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).
- Liao, Y. H., et al.
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Reimpresiones y permisos
