Observación de la función de los islotes y las interacciones entre los islotes y las células inmunes en rodajas de tejido pancreático vivo

Mollie K. Huber; Denise M. Drotar; Helmut Hiller; Maria L. Beery; Paul Joseph; Irina Kusmartseva; Stephan Speier; Mark A. Atkinson; Clayton E. Mathews; Edward A. Phelps

doi:10.3791/62207

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Observación de la función de los islotes y las interacciones entre los islotes y las células inmunes en rodajas de tejido pancreático vivo

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DOI:

10.3791/62207

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12 de abril de 2021

Mollie K. Huber¹ , Denise M. Drotar²^,³^,⁴ , Helmut Hiller¹ , Maria L. Beery¹ , Paul Joseph¹ , Irina Kusmartseva¹ , Stephan Speier²^,³^,⁴ , Mark A. Atkinson¹ , Clayton E. Mathews¹ , Edward A. Phelps⁵

¹Department of Pathology, Immunology, and Laboratory Medicine, University of Florida, ²Paul Langerhans Institute Dresden (PLID) of the Helmholtz Zentrum München at the University Clinic Carl Gustav Carus of Technische Universität Dresden, ³Institute of Physiology, Faculty of Medicine, Technische Universität Dresden, ⁴German Center for Diabetes Research (DZD), ⁵J. Crayton Pruitt Family Department of Biomedical Engineering, University of Florida

En este artículo

Resumen

Este estudio presenta la aplicación de rodajas de tejido pancreático vivo al estudio de la fisiología de los islotes y las interacciones entre los islotes y las células inmunes.

Resumen

Las rodajas de tejido pancreático vivo permiten el estudio de la fisiología y la función de los islotes en el contexto de un microambiente intacto de los islotes. Las rodajas se preparan a partir de tejido pancreático humano y de ratón vivo incrustado en agarosa y se cortan con un vibratomo. Este método permite que el tejido mantenga la viabilidad y la función, además de preservar patologías subyacentes como la diabetes tipo 1 (DT1) y la diabetes tipo 2 (DT2). El método de corte permite nuevas direcciones en el estudio del páncreas a través del mantenimiento de las estructuras complejas y diversas interacciones intercelulares que comprenden los tejidos endocrinos y exocrinos del páncreas. Este protocolo demuestra cómo realizar la tinción y la microscopía de lapso de tiempo de células inmunes endógenas vivas dentro de cortes pancreáticos junto con evaluaciones de la fisiología de los islotes. Además, este enfoque se puede refinar para discernir las poblaciones de células inmunes específicas para los antígenos de células de los islotes utilizando los principales reactivos complejos multimer de histocompatibilidad.

Introducción

La afectación del páncreas es patognomónica a enfermedades como la pancreatitis, la DT1 y la DT21,2,3. El estudio de la función en islotes aislados suele implicar la retirada de los islotes de su ^{entornovológico4}. El método de rebanada de tejido pancreático vivo se desarrolló para permitir el estudio del tejido pancreático manteniendo intactos los microambientes de los islotes y evitando el uso de procedimientos estresantes de aislamiento de islotes5,6,7. Las ....