Cosecha y desagregación: un paso pasado por alto en la investigación de métodos de biopelícula

Resumen

Este documento detalla los métodos que demuestran tres técnicas comunes de recolección y desagregación de biopelículas en dos tipos de superficie, pruebas de robustez de un método de cosecha e información mínima a considerar al elegir y optimizar las técnicas de cosecha y desagregación para aumentar la reproducibilidad.

Resumen

Los métodos de biopelícula consisten en cuatro pasos distintos: cultivar la biopelícula en un modelo relevante, tratar la biopelícula madura, cosechar la biopelícula de la superficie y desagregar los grupos, y analizar la muestra. De los cuatro pasos, la recolección y la desagregación son los menos estudiados, pero sin embargo críticos cuando se considera el potencial de sesgo de la prueba. Este artículo demuestra las técnicas de cosecha y desagregación comúnmente utilizadas para biopelículas cultivadas en tres superficies diferentes. Las tres técnicas de recolección y desagregación de biopelículas, obtenidas de una extensa revisión de la literatura, incluyen vórtice y sonicación, raspado y homogeneización, y raspado, vórtice y sonicación. Se consideran dos tipos de superficie: dura no porosa (policarbonato y vidrio de borosilicato) y porosa (silicona). Además, proporcionamos recomendaciones para la información mínima que debe incluirse al informar la técnica de cosecha seguida y un método acompañante para verificar el sesgo.

Introducción

La definición de biofilm ha evolucionado en las últimas décadas y abarca la asociación microbiana con una variedad de superficies biológicas y/o no biológicas, la inclusión de componentes no ^celulares1 que muestran un crecimiento diferente y la expresión ^genética2 dentro de una matriz. La biopelícula proporciona protección contra las tensiones ambientales, como el secado, y puede hacer que la acción de los desinfectantes químicos sea menos efectiva, lo que resulta en la supervivencia de los microbios. Los sobrevivientes dentro de una biopelícula pueden potencialmente proporcionar una fuente de microorganismos patógenos q....

Protocolo

1. Vórtice y sonicación

1. Cultive una biopelícula madura de P. aeruginosa ATCC 15442 cultivada de acuerdo con la norma ASTM E25622.
2. Al final del período de crecimiento de 48 h, prepárese para tratar la biopelícula y los cupones de muestra de acuerdo con la norma ASTM E28718
3. Inserte asépticamente protectores contra salpicaduras en autoclave en tubos cónicos estériles de 50 ml utilizando pinzas esterilizadas por llama. Repita la repetición para todos los tubos que recibirán tratamiento. Los tubos para cupones de control no necesitan un protector contra salpicaduras.

Resultados

Validación/Confirmación de un Método de Cosecha
Varios estudios que se llevaron a cabo en nuestro laboratorio examinaron la capacidad del vórtice y la sonicación para cosechar eficazmente la biopelícula cultivada en el reactor de biopelícula (ASTM E2562)² utilizando el método de tubo único (ASTM E2871)⁸.

Una biopelícula atcc 15442 de P. aeruginosa se cultivó de acuerdo con ASTM E25622 en cupone.......

Discusión

Información mínima para los métodos de recolección y desagregación
Para crear datos de biopelícula reproducibles en toda la comunidad científica, es imperativo que los autores incluyan tantos detalles como sea posible con respecto a cada uno de los pasos de crecimiento, tratamiento, muestreo y análisis de un método de biopelícula. La estandarización de los métodos de biopelícula ha ayudado en este esfuerzo, ya que permite al investigador hacer referencia a un método específico y cualquier modificación.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Viales cónicos de 50 mL	Thermo Scientific	339652
vasos de precipitados de vidrio de 100 mL	Fisher Scientific	FB102100
pipetas serológicas de 5	mL Fisher Scientific	13-678-12D	Para añadir tratamiento a viales que contienen cupones.
Pipetas serológicas de 50 mL	Fisher Scientific	13-678-14C	Para añadir neutralizador a los viales al final del tratamiento, tiempo de contacto.
Barras aplicadoras	Puritan	807
Hemostáticos	Fisher Scientific	16-100-115
Espátula	Fisher Scientific	14-373
PTFE policías	Saint-Gobain	06369-04
S 10 N - 10 G - ST Herramienta de dispersión	IKA	4446700	Para la homogeneización de muestras de biopelícula.
Tijeras	Fisher Scientific	08-951-20
Catéter Foley de silicona, tamaño 16 Francés	Medline Industries	DYND11502
Tubo de silicona, tamaño 16	Cole-Parmer	EW96400-16
Protectores contra salpicaduras BioSurface	Technologies, Inc.	CBR 2232
T 10 basic ULTRA-TURRAX Dispersor	IKA 3737001		Para la homogeneización de muestras de biofilm.
Conectores para tubos	Cole-Parmer	EW02023-86
Limpiador ultrasónico	Elma	TI-H15
Vortex-Genie 2	Scientific Industries	SI-0236
Vortex-Genie 2 Vertical 50 mL Soporte de tubo	Scientific Industries	SI-V506

metálica