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Artículo de método

Inyección única prequiasmática de sangre autóloga para inducir hemorragia subaracnoidea experimental en un modelo de rata

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DOI:

10.3791/62567

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18 de junio de 2021

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En este artículo

Resumen

La hemorragia subaracnoidea sigue conllevando una alta carga de mortalidad y morbilidad en el hombre. Para facilitar la investigación adicional sobre la condición y su fisiopatología, se presenta un modelo pre-quiasmático de inyección única.

Resumen

A pesar de los avances en el tratamiento en las últimas décadas, la hemorragia subaracnoidea (HSA) sigue conllevando una alta carga de morbilidad y mortalidad, afectando en gran medida a una población bastante joven. Se han desarrollado varios modelos animales de HSA para investigar los mecanismos fisiopatológicos detrás de la HSA y para probar intervenciones farmacológicas. El modelo de inyección única pre-quiasmático en la rata presentado en este artículo es un modelo experimental de HSA con un volumen sanguíneo predeterminado. Brevemente, el animal es anestesiado, intubado y mantenido bajo ventilación mecánica. La temperatura se regula con una almohadilla térmica. Se coloca un catéter en la arteria caudal, lo que permite la medición continua de la presión arterial, así como la toma de muestras de sangre. La membrana atlantooccipital se incide y se coloca un catéter para el registro de presión en la cisterna magna para permitir la medición de la presión intracerebral. Este catéter también se puede utilizar para intervenciones terapéuticas intratecales. La rata se coloca en un marco estereotáxico, se perfora un orificio de rebabas anteriormente al bregma, y se inserta un catéter a través del orificio de rebaba y se coloca justo antes del quiasma óptico. La sangre autóloga (0,3 ml) se extrae del catéter de la cola y se inyecta manualmente. Esto resulta en un aumento de la presión intracerebral y una disminución del flujo sanguíneo cerebral. El animal se mantiene sedado durante 30 min y se le administra solución salina subcutánea y analgésicos. El animal es extubado y devuelto a su jaula. El modelo prequiasmático tiene una alta tasa de reproducibilidad y una variación limitada entre animales debido al volumen sanguíneo predeterminado. Imita la HSA en humanos, lo que la convierte en un modelo relevante para la investigación de la HAS.

Introducción

La hemorragia subaracnoidea no traumática (HSA) es una forma de accidente cerebrovascular, que representa alrededor del 5% de todos los casos. La causa más común de HSA no traumática es la ruptura repentina de un aneurisma (HASA), que representa el 85% de los HSA. Otras causas incluyen la ruptura de una malformación arterio-venosa, coagulopatías y ruptura de venas en hemorragia perimesencefálica1. La tasa de incidencia es de 9 por 100.000 años-persona, con una mortalidad de alrededor de uno de cada tres y otro tercio que requiere el apoyo de la vida diaria después de la HAS 2,3.

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Protocolo

Este procedimiento se realiza de acuerdo con la Directiva 2010/63/UE de la Unión Europea relativa a la protección de los animales utilizados con fines científicos y aprobado por la Inspección Danesa de Experimentación Animal (licencia no. 2016-15-0201-00940). La cirugía se realiza utilizando una técnica aséptica en la mayor medida posible, incluyendo instrumentos estériles, guantes, catéteres y suturas. El estudio utilizó ratas Sprague-Dawley macho y hembra con un peso de 230-350 g, agrupadas en ciclo de luz/oscuridad de 12 h, con temperatura constante de 22 °C (± 2 °C) y humedad del 55% (± 10%). Los animales están provistos de comida estándar y agua ad libitum. Los a....

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Resultados

Las mujeres tienen un mayor riesgo de aSAH en comparación con los hombres. A pesar de esto, los roedores machos se utilizan principalmente en experimentos debido al posible sesgo de la heterogeneidad del ciclo del estro en las hembras. Los resultados representativos presentados aquí provienen de una publicación reciente que compara ratas hembras y machos, lo que confirma que el modelo produce resultados similares en animales hembras en comparación con machos21. El estudio incluyó 34 ratas Sprague-.......

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Discusión

El modelo de inyección única prequiasmática de la HSA imita varios elementos importantes de la HSA humana, incluido el aumento de la PIC, la reducción de la CBF, la isquemia global transitoria, la regulación positiva de los marcadores neuroinflamatorios y la MVC 14,15,16,18,19,20. La sonda ICP también se utilizó como puerto p.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen intereses contradictorios que declarar.

Agradecimientos

El trabajo fue apoyado por la Fundación Lundbeck y la Beca de Excelencia Lundbeck (no. R59-A5404). Los financiadores no tuvieron ningún papel en ninguna parte del manuscrito.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Catéter de vena periférica de 16 GBD Venflon393229Aguja acortada, distal curvada 1 cm. Alas
retiradas Campana/cámara de anestesiaDesconocido
Analizador de gases en sangreRadiómetroABL80
Monitor de presión arterial (PA)AdinstrumentsML117Se conecta a Powerlab
Pinzas curvas, 12 cm x 3F.S.T11001-12Para anestesia
Almohada cilíndrica, 28 cm x 4 cmHechoen casa toallas quirúrgicas Hardware de
adquisición de datosAdinstrumentsML870 Powerlab
Software de adquisición de datosAdinstrumentsLabChart 6.0
DrillKMD1189
Controlador de perforaciónSilfradent300 IN
Luz flexibleSchottKL200
Almohadilla térmicaMinco1135
Aguja hipodérmica, 20 GKD Medical301300marco estereotáxico
AdinstrumentsML117Se conecta al
vaporizador de isofluranoOhmedaTEC3
LaptopLenovoT410
Monitor láser dopplerAdinstrumentsML191
Sonda láser dopplerOxford Optronics MSF100XPSe conecta al monitor láser Doppler
Portaagujas, 13 cmF.S.T12001-13Para anestesia
Jeringa de precisión, 0,025 mLHamilton547407
Marco estereotáxicoKopf InstrumentsM900
Microscopio quirúrgicoCarl ZeissF170
Sutura agujaAllgaier1245Para anestesia
Controlador de temperaturaCWE,INC.TC-1000
Transductor x 2AdinstrumentsMLT0699Se conecta al monitor BP e ICP
VentiladorUgo Basile7025
Cortaúñasveterinaria AesculapGT421
Retractor Blair de 3 puntas, 13,5 cmAgnthos17022--13
Retractor romo AlmF.S.T17008-07
Pinza curva, 12 cm x 2F.S.T11001-12
Portaagujas, 13 cmF.S.T12001-13
Pinza Dumont recta, 11 cmF.S.T11252-00
Hemostático recto Halsted-Mosquito x 2F.S.T13008-12
Tijera de iris recta, 9 cmF.S.T14090-09
Tijera Vannas recta, 10,5 cmF.S.T15018-10
Hisopos absorbiblesKettenbach31603
Hilo de seda negro, 4-0, 5 x 15 cmVö mel14757
Cera de huesoAesculap1029754
Gel de ojos de carbómero 2 mg/gParanova
Hisopo de algodónHeinz HerenzWA-1
Aplicador con punta de algodón x 4Selefa120788
Aguja hipodérmica, 23 G x2KD Medical900284Se conecta a la llave de paso. Retire el extremo distal
Aguja hipodérmica, 23 G x3KD Medical900284 Retire el extremo distal. 2 se conecta a la llave de paso, 1 a la jeringa Sonda
ICP:Hecho ende lo siguiente:Tubo de
polietileno, 20 mmSmiths medical800/100/200Diámetro interior (ID): 0,58 mm, Diámetro exterior (OD): 0,96 mm.
Tubo de silicona, 10 mmFisher15202710ID: 0,76 mm, OD: 2,4 mm.
Tubo de silicona, 2 mmFisher11716513ID: 1,0 mm, OD: 3,0 mm.
Tubos de micro hematocritoMarca7493 11
OP-toalla, 45 cm x75 cmMö lnlycke800430
Adaptador PinPort, 22 GInstechPNP3F22
Inyector PinPortInstechPNP3M
Tubo de polietileno, 2 x 20 cmSmiths medical800/100/200Se conecta a la jeringa. Diámetro interior: 0,58 mm, diámetro exterior: 0,96 mm.
Gomaelástica Desconocido
Bisturí, 10 hojasKiato23110
Spinalneedle, 25 G x 3.5''Braun5405905-01
Sistema de llave de paso, Discofix x 2Braun16494CSe conecta al transductor
Sutura, 4-0, monofila, no reabsorbible x 3Jeringa de EH7145H
, 1 mLBD Plastipak1710023
Jeringa, luer-lock, 10 mL x 4BD Plastipak305959Se conecta al transductor
Pegamento adhesivo para tejidos3M1469SB
0,5% Alcohol de clorhexidinaFaaborg Pharma210918
Carprofeno 50 mg/mLScanVet43715Diluido 1:10
IsofluranoBaxter
Suero fisiológico isotónicoAmgros16404
Lidocaína-Adrenalina 10 mg/5 y micro; g/mLAmgros16318
Se conecta al monitor ICP del Powerlab casa Ethicon

Referencias

  1. van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369 (9558), London, England. 306-318 (2007).
  2. de Rooij, N. K., Linn, F. H. H., vander Plas, J. A., Algra, A., Rinkel, G. J. E. Incidence of subarachnoid haemorrhage: ....

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