La prueba de activación basófila es una prueba diagnóstica in vitro complementaria para la evaluación de reacciones alérgicas mediadas por IgE basada en la detección de la activación basófila en presencia de un estímulo específico mediante la medida de marcadores de activación mediante citometría de flujo.
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Artículo de método
Prueba de activación de basófilos para el diagnóstico de alergia
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Resumen
Resumen
La prueba de activación de basófilos (BAT) es una prueba diagnóstica in vitro complementaria que se puede utilizar además de la historia clínica, la prueba cutánea (ST) y la determinación específica de IgE (sIgE) en la evaluación de reacciones alérgicas mediadas por IgE a alimentos, veneno de insectos, medicamentos, así como algunas formas de urticaria crónica. Sin embargo, el papel de esta técnica en los algoritmos de diagnóstico es muy variable y no está bien determinado.
Las MTD se basan en la determinación de la respuesta basófila a la activación de IgE de reticulación alérgeno/fármaco mediante la medición de marcadores de activación (como CD63, CD203c) mediante citometría de flujo. Esta prueba puede ser una herramienta útil y complementaria para evitar las pruebas de provocación controladas para confirmar el diagnóstico de alergia, especialmente en sujetos que experimentan reacciones graves potencialmente mortales. En general, se debe considerar el rendimiento de las MTD si: i) el alérgeno/fármaco produce resultados falsos positivos en el ST; ii) no hay ninguna fuente de alérgenos/medicamentos para la determinación de ST o sIgE; iii) existe discordancia entre la historia del paciente y la determinación del ST o la sIgE; iv) los síntomas sugieren que el ST puede dar lugar a una respuesta sistémica; v) antes de considerar un CCT para confirmar el alérgeno / medicamento culpable. Las principales limitaciones de la prueba están relacionadas con la sensibilidad no óptima, especialmente en la alergia a medicamentos, la necesidad de realizar la prueba no más de 24 h después de la extracción de la muestra y la falta de estandarización entre laboratorios en términos de procedimientos, concentraciones y marcadores celulares.
Introducción
El diagnóstico de alergia mediada por IgE se basa en la historia clínica, las pruebas cutáneas (ST), la cuantificación de la IgE específica sérica (sIgE) y, si es necesario e indicado, las pruebas de provocación controlada (ECC)1,2,3,4,5,6. Sin embargo, la historia clínica puede ser poco confiable ya que puede haber una falta de información precisa, y los ST y CCT no son procedimientos libres de riesgo que pueden estar contraindicados en sujetos que experimentan reacciones....
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Protocolo
El cumplimiento del protocolo se llevó a cabo de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki y aprobado por el Comité de Ética para la Investigación Provincial de Málaga, España. Todos los sujetos fueron informados oralmente sobre el estudio de investigación y firmaron el correspondiente término de consentimiento informado.
NOTA: El presente protocolo detalla el procedimiento de MTD que los autores utilizan diariamente. Sin embargo, este no es un método estandarizado y existen diferencias con los procedimientos publicados por otros autores. Las principales modificaciones del protocolo están relacionadas con el uso de I....
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Resultados
Las MTD realizadas con alérgenos o fármacos permiten investigar las reacciones de hipersensibilidad dependientes de IgE. La reactividad basófila debe medirse en al menos dos concentraciones óptimas para obtener los mejores resultados34 y la activación se visualiza mediante la regulación positiva de CD63 en la superficie celular. En el caso de los alérgenos, además, para confirmar la reactividad basófila, la sensibilidad basófila debe analizarse midiendo la reactividad a múltiples concentraciones d.......
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Discusión
BAT es una prueba diagnóstica in vitro complementaria para la evaluación de reacciones alérgicas mediadas por IgE que ha demostrado ser útil en el diagnóstico de reacciones inducidas por diferentes desencadenantes como medicamentos, alimentos o inhalantes, así como en algunas formas de urticaria crónica. En general, se debe considerar el rendimiento de las MTD si: i) el alérgeno/fármaco produce resultados falsos positivos en el ST; ii) el alérgeno/fármaco no está disponible para ser utilizado para la cuantificac.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Claudia Corazza por su invaluable apoyo en el idioma inglés. Este trabajo ha contado con el apoyo del Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) del MINECO (subvención cofinanciada por FEDER: "Una manera de hacer Europa"; Subvenciones Nº PI20/01715; PI18/00095; PI17/01410; PI17/01318; PI17/01237 y RETIC ARADYAL RD16/0006/0001; Consejería de Sanidad de la Junta de Andalucía (Subvención Nº PI-0127-2020, PIO-0176-2018; PE-0172-2018; PE-0039-2018; PC-0098-2017; PI-0075-2017; PI-0241-2016). ID es Investigador Clínico (B-0001-2017) y AA es titular de un Contrato Postdoctoral Senior (RH-0099-2020), ambos apoyados por la Consejería de Sanidad de la Junta de Andalucí....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo de ensayo de poliestireno de fondo redondo de 5 mL, sin tapón, no estéril | Anticuerpo | ||
| APC | BioLegend | 310708 | |
| BD FACSCalibur Citómetro de flujo | BD Biosciences | ||
| Cloruro de calcio | Sigma-Aldrich | C1016 | |
| FITC anti-humano CD63 Anticuerpo | BioLegend | 353006 | |
| HEPES (1 M) | Thermo-Fisher | 15630106 | |
| Solución de lisis 10x concentrado | BD Biosciences | 349202 | |
| Cloruro de magnesio | Sigma-Aldrich | M8266 | |
| N-Formyl-Met-Leu-Phe | Sigma-Aldrich | F3506 | |
| PE anti-humano CD203c (E-NPP3) Anticuerpo | BioLegend | 324606 | |
| Cloruro de potasio | Sigma-Aldrich | P9541 | |
| Ratón purificado Anti-IgE | BD Biosciences | 555857 | |
| IL-3 humano recombinante | R& D Systems | 203-IL | |
| Fluido de vaina | BD Biosciences | 342003 | |
| Cloruro de sodio | Sigma-Aldrich | S3014 | |
| TUBO 9 mL LH Heparina de litio | Greiner Bio-One 455084 | ||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 |
Referencias
- Mayorga, C., et al. In vitro tests for drug hypersensitivity reactions: an ENDA/EAACI Drug Allergy Interest Group position paper. Allergy. 71 (8), 1103-1134 (2016).
- Romano, A., et al. Towards a more prec....
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Reimpresiones y permisos
