Modelo de sangrado por transyección de la vena de la cola en ratones con hemofilia A totalmente anestesiada

Ariadna Carol Illa; Sarah Baumgarten; Dennis Danielsen; Karin Larsen; Torben Elm; Peter B. Johansen; Tom Knudsen; Brian Lauritzen; Mikael Tranholm; Carsten  D. Ley

doi:10.3791/62952

Artículo de método

Modelo de sangrado por transyección de la vena de la cola en ratones con hemofilia A totalmente anestesiada

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DOI:

10.3791/62952

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30 de septiembre de 2021

Ariadna Carol Illa¹^,² , Sarah Baumgarten¹ , Dennis Danielsen¹ , Karin Larsen³ , Torben Elm¹ , Peter B. Johansen⁴ , Tom Knudsen⁵ , Brian Lauritzen¹ , Mikael Tranholm⁶ , Carsten D. Ley¹

¹Global Drug Discovery, Novo Nordisk A/S, ²Department of Veterinary and Animal Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ³Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ⁴Independent consultant, ⁵Catalyst Biosciences, ⁶Værløse Dyreklinik

En este artículo

Resumen

El modelo de sangrado de transección refinada de la vena de la cola (TVT) en ratones anestesiados es un método sensible in vivo para la evaluación del sangrado hemofílico. Este modelo optimizado de sangrado TVT utiliza la pérdida de sangre y el tiempo de sangrado como puntos finales, refinando otros modelos y evitando la muerte como punto final.

Resumen

Los modelos de sangrado de cola son herramientas importantes en la investigación de la hemofilia, específicamente para la evaluación de los efectos procoagulantes. El modelo de supervivencia de la transección de la vena de la cola (TVT) se ha preferido en muchos entornos debido a la sensibilidad a las dosis clínicamente relevantes de FVIII, mientras que otros modelos establecidos, como el modelo de clip de la cola, requieren niveles más altos de compuestos procoagulantes. Para evitar el uso de la supervivencia como punto final, desarrollamos un modelo de TVT que establece la pérdida de sangre y el tiempo de sangrado como puntos finales y la anestesia completa durante todo el experimento. Brevemente, los ratones anestesiados se colocan con la cola sumergida en solución salina templada (37 ° C) y se dosifican con el compuesto de prueba en la vena lateral derecha de la cola. Después de 5 min, la vena de la cola lateral izquierda se transecta utilizando una guía de plantilla, la cola se devuelve a la solución salina y todos los episodios de sangrado se monitorean y registran durante 40 minutos mientras se recolecta la sangre. Si no se produce sangrado a los 10 minutos, 20 minutos o 30 minutos después de la lesión, el coágulo se desafía suavemente limpiando el corte dos veces con un hisopo de gasa húmeda. Después de 40 min, la pérdida de sangre se cuantifica por la cantidad de hemoglobina sangrada en la solución salina. Este procedimiento rápido y relativamente simple da como resultado hemorragias consistentes y reproducibles. En comparación con el modelo de supervivencia TVT, utiliza un procedimiento más humano sin comprometer la sensibilidad a la intervención farmacológica. Además, es posible utilizar ambos sexos, reduciendo el número total de animales que necesitan ser criados, en cumplimiento de los principios de las 3R. Una limitación potencial en los modelos de sangrado es la naturaleza estocástica de la hemostasia, que puede reducir la reproducibilidad del modelo. Para contrarrestar esto, la interrupción manual del coágulo asegura que el coágulo sea desafiado durante el monitoreo, evitando que la hemostasia primaria (plaquetaria) detenga el sangrado. Esta adición al catálogo de modelos de lesiones hemorrágicas proporciona una opción para caracterizar los efectos procoagulantes de una manera estandarizada y humana.

Introducción

Los modelos animales son esenciales para comprender la patogénesis de la hemofilia y desarrollar y probar regímenes de tratamiento y terapias. El ratón knock-out factor VIII (F8-KO) es un modelo ampliamente utilizado para el estudio de la hemofilia A ^1,2. Estos ratones recapitulan características clave de la enfermedad y han sido ampliamente utilizados para el desarrollo de tratamientos, como los productos FVIII recombinantes ^3,4,5 y las estrategias de terapia génica ^6,7.