Habilidades microquirúrgicas para establecer la canulación permanente de la vena yugular en ratas para el muestreo de sangre en serie del medicamento administrado por vía oral

Resumen

Se han demostrado técnicas microquirúrgicas detalladas para establecer un modelo de rata de canulación de vena yugular a largo plazo para la recolección secuencial de sangre en el mismo animal. Los parámetros fisiológicos y hematológicos han sido monitoreados durante la fase de recuperación de la rata. Este modelo se ha aplicado para estudiar la farmacocinética del polifenol administrado por vía oral sin inducir estrés animal.

Resumen

El muestreo de sangre en pequeños animales de laboratorio es necesario para la optimización del plomo farmacéutico, pero puede causar un gran daño y estrés a los animales de experimentación, lo que podría afectar los resultados. La canulación de la vena yugular (JVC) en ratas es un modelo ampliamente utilizado para la recolección repetida de sangre, pero requiere un entrenamiento adecuado de las habilidades quirúrgicas y el cuidado de los animales. Este artículo detalla los procedimientos microquirúrgicos para establecer y mantener un modelo permanente de rata JVC con un enfoque específico en la colocación y sellado de la cánula yugular. Se destacó la importancia de monitorear los parámetros fisiológicos (por ejemplo, peso corporal, ingesta de alimentos y agua) y hematológicos, con resultados presentados durante 6 días después de la cirugía durante la recuperación de la rata. El perfil fármaco-concentración plasmática-tiempo del ácido elágico fenol natural administrado por vía oral se determinó en el modelo de rata JVC.

Introducción

La adquisición repetida de muestras de sangre de pequeños animales de laboratorio, como roedores, cobayas y conejos, es un aspecto importante para la optimización del plomo farmacéutico y también para reducir el número de animales utilizados en la investigación ^1,2. La cartera para desarrollar nuevas herramientas de diagnóstico y formulación de medicamentos (por ejemplo, vacunas) requiere acceso a diferentes volúmenes de sangre para evaluar su robustez y rendimiento in vivo, como la farmacocinética (PK), la toxicidad y la sensibilidad ^3,4,5

Protocolo

Los procedimientos que se describen a continuación se realizaron como parte de un protocolo aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Politécnica del Noroeste (No. 202101117).

1. Preparación preoperatoria (el día antes de la cirugía)

NOTA: Soluciones requeridas: solución salina normal (cloruro de sodio al 0,9% p/v), solución salina heparinizada (1% p/v heparina sódica), solución de bloqueo del catéter, fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), como solución de meloxicam (2 mg/ml).

1. Preparación de la solución
   1. Alícuota de 200 μL de sol....

Resultados

Este protocolo ha demostrado a fondo cómo establecer un modelo JVC a largo plazo utilizando habilidades microquirúrgicas para la recolección de sangre en serie. La Figura 1A muestra los instrumentos y materiales quirúrgicos esenciales utilizados para llevar a cabo la cirugía. También se ilustra la especificación del catéter de PU con tres marcas azules, lo que es útil para guiar al investigador a colocar la cánula venosa en el paso 3.3., cómo usar las marcas en el catéter de PU para.......

Discusión

Dominar la técnica de canulación de vasos requiere una práctica significativa y aprender la lección de cada operación. Christakis et al. utilizando el análisis de suma acumulativa (CUSUM), encontraron que un investigador necesita practicar 200 ratas durante un período de un año antes de estar listo para la evaluación pk de los candidatos a fármacos²⁰. Sin embargo, el tiempo de operación requerido para la canulación de la vena puede reducirse significativamente por el número de ratas realizadas

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de ensayo de 0,5 mL que contiene anticoagulante EDTA	Xinkang	N/A	Recogida de muestras de sangre para pruebas de hematología
0,5*20 mm Jeringa de 1,0 mL	KLMEDICAL	N/A	lavado o sustitución del líquido por solución salina
0,6*28,5 mm Jeringa de 5,0 mL	HD	N/A	Inyección subcutánea
de 1,0 mL Jeringa de punta roma (22G)	skillsmodel	S4-PKT22G	Inyecte la solución salina y recoja muestras de sangre a través del catéter
1,5 mL tubo de microcentrífuga estéril	Axygen	MCT-150-C-S	Almacene la solución de bloqueo de catéter estéril solución salina heparinizada y meloxicam
1.5  mL tubos de microcentrífuga Biosharp		BS-15-M extracción de	sangre
1/2  corte circular 5*12 mm aguja de sutura	skillsmodelo	S4-FHZ	Enhebrar la capa muscular para fijar el catéter
corte circular 3/8 7*17 mm aguja de sutura	habilidadesmodelo	S5-FHZ	Sutura la incisión de la corteza de rata
6-0 estéril hilo de sutura de seda no absorbible	JUNSHENG	N/A
75% de alcohol medicinal	HONGSONG	N/A	Desinfección
Cinta	adhesiva LIUTAI	N/A	posicionamiento de la rata
Cinta de esterilización en autoclave	Biosharp	BS-QT-028	Marcar artículos esterilizados
Contador de células sanguíneas automatizado	Sysmex	XN-550 Prueba de	hematología
Castroviejo micro tijeras	habilidadesmodelo	WA1010	Cortar la abertura en el vaso sanguíneo
Centrífuga	Thermo Fisher Scientific	75002402	Preparación de plasma
Cojín limpio	Qingjie	N/A	Preparar el área de operación
Bolas	de algodón HC	N/A	Desinfección y esterilización de heridas
Bastoncillos de algodón	BEITAGOGO	N/A	Desinfección
Hemostático	curvoskillsmodel	N/A	ligadura
DN50 Restricción de ratas de acero inoxidable	skillsmodel	S4-RGDQ1	Restrinja el movimiento de las ratas para facilitar la operación
Ácido elágico	Aladdin	E102710-25g	fenol natural para administración oral
Pinzas semicurvadas	skillsmodel	53072	Levante la capa muscular y el tejido, aísle la vena yugular y ate la sutura
Almohadilla térmica	Warm mate	N/A	evitando la pérdida de calor de los animales
Heparina sódica	Solarbio	H8060	anticoagulante
Yodoforo	Xidebao	N/A	Limpiar la herida
Tijeras de iris	habilidadesmodelo	54002	Bluent separación de la capa muscular
Isoflurano	RWD	R510-22-16	anestesia
lámpara	LEDEMPERORFEEL	N/A	sugery
Cromatografía líquida-espectroscopia de masas	Thermo Fisher Scientific	VQF01-20001/ TSQ02-10002	detección de la concentración de fármaco en plasma
Meloxicam	Hongqiang	N/A	Analgésico
Solución salina normal	KL	N/A	Prepare la solución y proteja los vasos sanguíneos de la desecación
Maquinilla de afeitar para mascotas	Codos	3180	Afeitar el pelaje
Solución salina tamponada con fosfato	ZHHC	PW012	Preparación de solución de ácido elágico
Catéter de PU	skillsmodel	RJVC-PU	Canulación de la vena yugular Operación
animales pequeños consola de anestesia	RWD	68620	Estación de trabajo de operación
Botella de spray	Otro	N/A	estación de trabajo aséptica
Tapón de acero inoxidable (22G)	skillsmodel	S4-PKD22G	Tapar el catéter para asegurar su sellado
Trochar de acero inoxidable	habilidadesmodelo	S$-PKDGZ	Guía la exteriorización del catéter
Habilidades de solución de bloqueo estérilmodelo		SK-FB	bloquear el catéter para garantizar su esterilidad
Habilidades de aguja de alimentación rectamodelo		N/A	Sondógama bucal
Bolsa quirúrgica	BKMAM	N/A	Contenedor para la esterilización de instrumental quirúrgico
Tijeras quirúrgicas	habilidadesmodelo	J21070	Incisión de corte en piel
rata Dilatador de vasos fórceps equilibrado	habilidadesmodelo	WA3020	Expanda el vaso sanguíneo y guíe la cánula para que se deslice en
ZS-MV Máquina de anestesia para animales pequeños	ZSLab	1057003	inducir y mantener la anestesia

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