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Artículo de método

Una técnica quirúrgica modificada para el trasplante de riñón en ratones

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DOI:

10.3791/63434

22 de julio de 2022

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este protocolo presenta una nueva técnica quirúrgica de trasplante renal de ratón centrada en una estrategia de anastomosis arterial modificada. También se presenta una técnica de sutura vascular que incluye un método de anastomosis uréter-vejiga simple y seguro. Estas modificaciones acortan el tiempo de operación y mejoran la tasa de éxito del procedimiento de trasplante de riñón en ratones.

Resumen

El trasplante de riñón en ratones es un procedimiento quirúrgico complicado y desafiante. Hay muy pocas publicaciones que demuestren los pasos clave de esta operación. Por lo tanto, este artículo presenta la técnica y señala las advertencias quirúrgicas asociadas con esta operación. Además, se demuestran modificaciones importantes en comparación con el procedimiento convencional. En primer lugar, se corta y prepara un parche de la aorta abdominal para que las bifurcaciones proximales de la arteria renal, incluida la arteria ureteral, se transecten junto con el riñón del donante en bloque. Esto reduce el riesgo de una necrosis del uréter y evita el desarrollo de una oclusión del tracto urinario. En segundo lugar, se demuestra un nuevo método de anastomosis vascular que permite al operador aumentar o disminuir de manera flexible el tamaño de la anastomosis después de que ya se haya iniciado la reperfusión del trasplante renal. Esto evita el desarrollo de estenosis de los vasos y sangrado intraabdominal. En tercer lugar, se muestra una técnica que permite la anastomosis del delicado uréter donante y de la vejiga receptora que no causa un traumatismo. La adopción de este protocolo puede acortar el tiempo de operación y reducir el daño a la vejiga del receptor, lo que aumenta significativamente la tasa de éxito de la operación para los ratones receptores.

Introducción

Desde que Sakowitz et al. desarrollaron modelos de trasplante renal en 1973 por primera vez1, ha demostrado ser una importante herramienta experimental para estudiar los mecanismos de la lesión isquémica del trasplante y el rechazo aloinmune, así como para desarrollar nuevos tratamientos destinados a prolongar la supervivencia del aloinjerto y posiblemente lograr la tolerancia inmunológica. Sin embargo, la técnica quirúrgica ha demostrado ser compleja y muy exigente, a veces con complicaciones como estenosis anastomóticas vasculares que conducen a insuficiencia prerrenal no inmunológica del trasplante renal2, insuficienc....

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Protocolo

Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de la Directiva 2010/63/UE del Parlamento Europeo sobre la protección de los animales utilizados con fines científicos (Tarjeta de ética animal: Ministerio de Seguridad Alimentaria y Farmacéutica de Baja Sajonia, # 33.9-42502-04-11/0492). Realice procedimientos utilizando instrumentos quirúrgicos estériles y consumibles (autoclave) y trate de mantener el área de operación lo más estéril posible.

NOTA: Los ratones machos C57BL/6J sirvieron como donantes y receptores (modelo de trasplante singénico) mientras que los ratones Balb/c sirvieron como receptores d....

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Resultados

Cuatro semanas después del trasplante, tanto la técnica modificada como la técnica convencional mostraron signos moderados de atrofia tubular renal14,15 en comparación con los riñones contralaterales del receptor nativo (Figura 1). El grado de atrofia de los túbulos renales no demostró diferencias significativas entre las dos técnicas diferentes. La tinción tricrómica de Masson Goldneren 14,15

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Discusión

Si bien el modelo de trasplante de piel en ratones es simple y fácil de realizar para estudiar los eventos de rechazo aloinmune, las técnicas quirúrgicas para investigar más específicamente las alteraciones inflamatorias relacionadas con aloinmuno después del corazón16 y el trasplante de riñón10 han demostrado ser complejas y muy exigentes. Desde el punto de vista del nefrólogo de trasplantes, el establecimiento de un modelo de trasplante renal de ratón estable y efectivo a.......

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Agradecimientos

Agradecemos al equipo del Dr. Tiantian Bai por su ayuda con la voz en off, a la señorita Mian Pao por su ayuda en la ilustración médica. Este trabajo fue apoyado en parte por la Fundación Alemana de Investigación (DFG) para promover colaboraciones internacionales (HO2581/4-1 a AH) y la Fundación Nacional de Ciencias de China (NSFC; # 81760291 a FJ).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Agujas 30GBraun456300-acepromazina
CP PharmaTranquisol
P-Bepanthen ungüento oftálmicoHaus-ApothekePZN01578675-Bonn
Micro PinzasFST11083-07-Caja
para aislante y dispositivo de suministro de oxígenoRUSKINNINVIV-C57BL
/6J  ratonesRío Charles. Alemaniasin númerode catálogo-Carprofeno
ZoetisRimadyl 50 mg/
26GTERUMOSurflo-W-Clip
Pinza aplicadora EstiloFST18057-14-Pinza
curvaWPI14114-G-Cutasept
desinfección de la pielVWRBODL980365-
DeshidratadorDIAPATHBolígrafo
electroquirúrgicoDonatello BovieCHANGE-A-TIP-Máquina
de incrustaciónWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5-Ethanol
Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtDPlataforma100092683-Frozen
Wuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5-almohadillasde
gasa, bastoncillos de algodónLohmann-Rauscher13353-Portaobjetosde
vidrioServicebioG6004-HE
juego de soluciones de tinteServicebioG1003-Esterilla
calefactoraTHERMO MAT PRO 30WHTP-30-esponja
hemostáticaCuraSponJ1276A-solución-heparina
Haus-ApothekePZN 03029820-
caja de hieloPETZNo hay número de catálogodisponible-Sistema de
imagenNikonNikon DS-U3-Dispositivo de
anestesia inhalatoriaGROPPLERBKGM 0616-isoflurano
CP PharmaIsofluran CP 1 ml/ml-ketamina
Zoetissin catálogonumer-Masson
juegode soluciones de coloranteServicebioG1006-metamizole
WDTsin catálogonumer-Micro
tijerasFST15000-00,15000-10-Micro
Serrefine ( Abrazadera ) Angulado / 16 mmFST18055-06-Microscopio
Leica
LEICAMZ6-Microscopioligero SCHOTTKL2500LED-Goma
neutraSCRC10004160-Horno
Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., LtdGFL-230-Cortadorade
patologíaShanghai Leica Instrument Co., LtdRM2016-Solución
salina (NaCl 0.9 %)Haus-ApothekePZN 06178437
tijerasPeha Instruments991083/4-Slides
Servicebio-
placa de Petri pequeñaSarstedt8,33,900-pinzas
rectasWPI14113-G-cinta
quirúrgicaBSN4120-Pinzas
de atado de suturas - 10 cmFST18025-10-Suturas
(10-0)MedtronicN2540-Suturas
(4-0)ETHILONV4940H-
Suturas(7-0)ETHILON1647H-Jeringa
(0,3 mL)BD
324826-Jeringa (1 mL)BD
320801-Esparcidor de tejidosZhejiang Kehua Instrument Co., LtdKD-P-Microscopio
óptico verticalNikonNikon Eclipse E100-xilacina
BayerRompun-
XilenoSinopharm Group Reactivo Químico Co. LtD10023418-
ml-CATHETER-FEP

Referencias

  1. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
  2. Jiang, K., et al.

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Etiquetas

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