Waiting
Procesando inicio de sesión ...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Rose Bengal-medieret fotodynamisk terapi til at hæmme Candida albicans

Published: March 24, 2022 doi: 10.3791/63558
Automatic Translation
*1,2, *3,4, 5, 3,6, 7, 7, 3, 3,8,9
1Institute of Clinical Medicine, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 5Department of Dermatology, Fu Jen Catholic University Hospital, Fu Jen Catholic University, 6Institute of Clinical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7School of Medicine, National Cheng Kung University, 8Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 9Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University
* These authors contributed equally

Summary

Den stigende forekomst af lægemiddelresistente Candida albicans er et alvorligt sundhedsproblem på verdensplan. Antimikrobiel fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilbyde en strategi til bekæmpelse af lægemiddelresistente svampeinfektioner. Den nuværende protokol beskriver Rose bengal-medieret aPDT-effekt på en multiresistent C. albicans-stamme in vitro.

Abstract

Invasiv Candida albicans infektion er en signifikant opportunistisk svampeinfektion hos mennesker, fordi det er en af de mest almindelige kolonisatorer i tarmen, munden, vagina og huden. På trods af tilgængeligheden af svampedræbende medicin forbliver dødeligheden af invasiv candidiasis ~ 50%. Desværre er forekomsten af lægemiddelresistente C. albicans stigende globalt. Antimikrobiel fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilbyde en alternativ eller adjuverende behandling for at hæmme C. albicans biofilmdannelse og overvinde lægemiddelresistens. Rose bengal (RB)-medieret aPDT har vist effektiv celledrab af bakterier og C. albicans. I denne undersøgelse beskrives effekten af RB-aPDT på multiresistente C. albicans . En hjemmelavet grøn lysemitterende diode (LED) lyskilde er designet til at justere med midten af en brønd på en 96-brønds plade. Gærene blev inkuberet i brøndene med forskellige koncentrationer af RB og belyst med varierende strøm af grønt lys. De dræbende virkninger blev analyseret ved hjælp af pladefortyndingsmetoden. Med en optimal kombination af lys og RB blev der opnået 3-log væksthæmning. Det blev konkluderet, at RB-aPDT potentielt kan hæmme lægemiddelresistente C. albicans.

Introduction

C. albicans koloniserer i mave-tarmkanalen og kønsorganerne hos raske individer og kan påvises som normal mikrobiota hos omkring 50 procent afindividerne 1. Hvis der skabes en ubalance mellem værten og patogenet, er C. albicans i stand til at invadere og forårsage sygdom. Infektionen kan variere fra lokale slimhindeinfektioner til multipel organsvigt2. I et multicenterovervågningsstudie i USA er omkring halvdelen af isolaterne fra patienter med invasiv candidiasis mellem 2009 og 2017 C. albicans3. Candidæmi kan være forbundet med høje sygelighedsrater, dødelighed, længerevarende hospitalsophold4. Amerikanske centre for sygdomsbekæmpelse og forebyggelse rapporterede, at omkring 7% af alle candida blodprøver testet er resistente over for svampedræbende lægemiddel fluconazol5. Fremkomsten af lægemiddelresistente Candida-arter rejser bekymringen for at udvikle en alternativ eller adjuvansbehandling til antimykotiske midler.

Antimikrobiel fotodynamisk terapi (aPDT) indebærer aktivering af en specifik fotosensitizer (PS) med lys vedPS6's maksimale absorptionsbølgelængde. Efter excitation overfører den ophidsede PS sin energi eller elektroner til de nærliggende iltmolekyler og vender tilbage til jordtilstanden. Under denne proces dannes reaktive iltarter og singlet oxygen og forårsager celleskader. aPDT har været meget udbredt til at dræbe mikroorganismer siden 1990'erne7. En af fordelene ved aPDT er, at flere organeller beskadiges i en celle af singlet oxygen og / eller reaktive iltarter (ROS) under bestråling; således er resistens over for aPDT ikke fundet indtil i dag. Desuden rapporterede en nylig undersøgelse, at de bakterier, der overlevede efter aPDT, blev mere følsomme over for antibiotika8.

De lyskilder, der anvendes i aPDT, omfatter lasere, metalhalogenlamper med filtre, nær-infrarødt lys, og lysemitterende diode (LED) 9,10,11,12. Laseren giver en høj lyseffekt, normalt større end 0,5 W /cm2, der gør det muligt at levere en høj lysdosis på meget kort tid. Det har været meget udbredt i tilfælde, hvor en længere behandlingstid er ubelejligt, såsom aPDT til orale infektioner. Ulempen ved en laser er, at dens spotstørrelse af belysning er lille, lige fra et par hundrede mikrometer til 10 mm med en diffusor. Desuden er laserudstyr dyrt og har brug for specifik træning for at fungere. På den anden side er bestrålingsområdet for en metalhalogenlampe med filtre relativt større13. Lampen er dog for heftig og dyr. LED-lyskilder er blevet mainstream af aPDT på det dermatologiske område, fordi det er lille og billigere. Bestrålingsområdet kan være relativt stort med et array-arrangement af LED-pæren. Hele ansigtet kan belyses på samme tid9. Ikke desto mindre, de fleste, hvis ikke alle, LED-lyskilder, der er tilgængelige i dag, er designet til klinisk brug. Det er muligvis ikke egnet til eksperimenter i et laboratorium, fordi det er pladsbesættende og dyrt. Vi udviklede et billigt LED-array, der er meget lille og kan skæres og samles fra en LED-strimmel. LED'erne kan monteres i forskellige arrangementer til forskellige eksperimentelle designs. Forskellige betingelser for aPDT kan udfyldes i en 96-brønds plade eller endda en 384-brønds plade i et eksperiment.

Rose bengal (RB) er et farvet farvestof, der i vid udstrækning bruges til at forbedre visualiseringen af hornhindeskader i menneskelige øjne14. RB-medieret aPDT har vist dræbende virkninger på Staphylococcus aureus, Escherichia coli og C. albicans med nogenlunde sammenlignelig effektivitet som Toluidin blå O15. Denne undersøgelse viser en metode til at validere effekten af RB-aPDT på multiresistente C. albicans.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Forberedelse af aPDT-system

  1. Skær fire grønne lysdioder (LED'er) fra en LED-strimmel (se Materialetabel) og juster dem med fire brønde på en plade med 96 brønde (figur 1).
    BEMÆRK: LED'erne blev arrangeret i et 4 x 3 array. Bagsiden af LED'en blev klæbet til en køleplade for at sprede varmen under bestråling.
  2. Mål LED'ens fluenshastighed11 ved 540 nm med en lyseffektmåler (se materialetabel). Se supplerende figur 1 for at sikre, at LED'ens fluenshastighed er mellem 510-560 nm.
  3. Sæt en elektrisk ventilator langs pladen under bestråling for at opretholde den konstante temperatur (25 ± 1 °C)11. Se supplerende figur 2 for at sikre, at mediets konstante temperatur opretholdes under bestråling.

2. Dyrkning af gærformen af C. albicans

BEMÆRK: En multiresistent C. albicans (BCRC 21538/ATCC 10231), der er resistent over for de fleste svampedræbende midler, herunder fluconazol, anvendes til forsøgene16.

  1. Bestem følsomheden af det antimykotiske lægemiddel med en diskdiffusionsmetode efter tidligere offentliggjort rapport17.
  2. Dyrk C. albicans i gær-, hyfer- og pseudohyphaeformer afhængigt af de mikroøkologiske miljøer18.
    BEMÆRK: Hyfer- og pseudohyphaeformerne er vanskelige for en nøjagtig beregning. Gærformen kan beregnes præcist under et mikroskop eller med flowcytometri. Temperaturen under cellevækst bestemmer dens morfologi. Ved stuetemperatur (25 °C) er næsten alle celler gærformede. En 4 timers kort inkubation af C. albicans ved 30 °C påvirkede ikke gærmorfologien.

3. aPDT på planktoniske C. albicans

  1. Isoler en enkelt koloni af C. albicans fra en agarplade med en steril sløjfe og tilsæt den til et 3 ml gærekstrakt peptone dextrose (YPD) medium (se tabel over materialer) i et steriliseret glasrør.
    1. Inkubere røret ved 25 ± 1 °C natten over (14-16 timer) i en inkubator med en rotationshastighed på 155 o / min for at udvide C. albicans og opretholde svampen i gærform for nøjagtig kvantificering.
  2. Fortynd natten over-kulturen med medium til en OD600-værdi på ca. 0,5 ved 30 ° C og drej med en hastighed på 155 o / min i 4 timer for at opnå en logvækstfase af C. albicans.
  3. Fortynd logfasekulturen igen med frisk YPD-medium til en OD600-værdi på 0,65 (ca. 1 x 107 kolonidannende enheder, CFU/ml). Den endelige koncentration bekræftes ved seriel fortyndingsmetode på en agarplade8.
  4. Forbered en stamopløsning (4%) Rose bengal (RB) ved at opløse pulveret i 1x PBS. Filtrer og steriliser det med et 0,22 μm filter og opbevar det ved 4 °C i mørke. Den endelige arbejdskoncentration af RB er 0, 2%.
  5. Tilsæt 111 μL 2 % RB til 1 ml logfase C. albicaner i et 1,5 ml mikrocentrifugerør og samdyrkning på forskellige tidspunkter (0, 15 og 30 minutter) ved stuetemperatur for at forstå absorptionen af RB i cellerne (figur 2).
  6. Samkulturen vaskes tre gange med 1 ml 1x PBS med centrifugering ved 16.100 x g i 2,5 min ved stuetemperatur.
    BEMÆRK: aPDT indeholder fire forskellige betingelser: absolut kontrol (ingen lyseksponering, ingen RB), mørk kontrol (intet lys, men inkuberer med RB), lysstyring (udsættes for lys uden RB), aPDT (udsætter for lys i nærværelse af RB).
  7. Resuspend C. albicans i 1 ml 1x PBS og fordel dem i tre forskellige brønde i en 96 brøndplade for hver tilstand. Juster brøndene med LED-arrayet efter vask.
  8. Tænd for den elektriske ventilator og lyset i lyseksponerede grupper.
    BEMÆRK: En anden fluens (J/cm2) kan opnås ved at udsætte brøndene for forskellige tidsperioder. For eksempel kommer en 16,7 minutters lyseksponering til 10 J /cm2 med en 10 mW / cm2 LED-pære.
  9. Efter bestråling tilsættes 20 μL af cokulturopløsningen fra en brønd til et 1,5 ml centrifugerør indeholdende 180 μL 1x PBS til fremstilling af en 10x fortynding. Fortynd endvidere ti gange, derefter efter samme metode.
  10. Slip tre dråber på 20 μL af hver seriel fortynding på en kvadrant af en YPD-agarplade for at opnå tællelige kolonier pladen. Beregn CFU/ml ved at gange kolonierne med fortyndingsfaktorerne3.

4. Statistisk analyse

  1. Analyser de indsamlede data ved hjælp af en graf- og statistiksoftware (se Tabel over materialer).
  2. Afbild data ved hjælp af ± standardfejl i middelværdien. Udfør en tovejs ANOVA-analyse af varians8 for at evaluere signifikante forskelle mellem de forskellige testbetingelser.
  3. Udfør Tukeys flere sammenligningstest for parvise sammenligninger8. For hver anden behandling skal du udføre mindst tre uafhængige eksperimenter. Overvej p-værdi < 0,05 statistisk signifikant.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figur 1 viser det aPDT-system, der anvendes i nærværende undersøgelse. Da høje temperaturer kan forårsage betydelig celledød, LED-arrayet afkøles af en elektrisk ventilator, og en køleplade bruges under bestråling for at opretholde en konstant temperatur ved 25 ± 1 ° C. Varmeeffekten kan diskonteres. At have en jævn lysfordeling er også en vigtig afgørende faktor for en vellykket aPDT; derfor, det er vigtigt at justere LED-pæren til brønden nøjagtigt under belysning. På grund af LED'ens lysstyrke skal solbriller udstyres, før lyset tændes.

C. albicans farves straks med RB som visualiseret ved rød fluorescens under fluorescerende mikroskopi (0 min i figur 2). Det kan ses, at RB kommer ind i cellerne på en tidsafhængig måde (figur 2). Undersøgelsen brugte en 15 minutters RB-inkubation, hvor de fleste celler efter 15 minutter blev farvet med RB. En højere koncentration af RB fører til en stærkere fluorescens, der producerer flere frie radikaler til at dræbe svampe. Alligevel kan det også forårsage betydelig celledød i normale celler; derfor anvendes 0,2% RB-koncentration almindeligvis i klinikker. Således blev den nøjagtige koncentration valgt i denne undersøgelse.

PDT indebærer aktivering af RB med lys. Når den aktiverede RB vender tilbage til sin grundtilstand, overfører den energi og elektroner til det nærliggende ilt for at generere frie radikaler og singlet oxygen, hvilket resulterer i celledød. Figur 3 viser ingen celledød under forudsætning af ingen bestråling eller fravær af RB. C. albicans blev hæmmet på en let dosisafhængig måde efter bestråling af grønt lys i nærvær af 0,2% RB (figur 3). Udsættelse af svampene for grønt lys med 30 J/cm2 resulterede i en 4-log (99,99%) hæmning af cellevæksten.

Figure 1
Figur 1: Det fotodynamiske system. (A) Et grønt LED-array blev klæbet til en metal køleplade for at sprede varmen under bestråling. En elektrisk ventilator blev sat ved siden af lyskilden for at holde temperaturen konstant ved 25 ± 1 ° C. (B) Lyset blev tændt. (C) Brøndene på en 96 brøndplade blev justeret med midten af LED'en. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 2
Figur 2: Den tidsafhængige undersøgelse af Rose bengal ind i C. albicans. Lysfelts- (A-D) og fluorescensbilleder (E-H) af C. albicans efter 0-30 min co-dyrket med 0,2% Rose bengal (RB). A) og E) Kontrol uden RB-dyrket i samarbejde. (B) og (F) Cellerne blev straks farvet med 0,2% RB. (C) og (G) Efter 15 minutters dyrkning viste de fleste celler rød fluorescens, hvilket indikerer RB inde i cellerne. (D) og (H) Stærkere fluorescens af RB blev noteret med en 30 minutters inkubation. Skalabjælke = 50 μm. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: Antimikrobielle fotodynamiske terapieffekter på multiresistente C. albicans. Væksthæmningen af celler afhænger af lysfluensen. Udsættelse af C. albicans for en fluens på 10 J/cm2 hæmmede cellevæksten med henholdsvis 1,5 logs, med 2 logs med20 J/cm2 og 4 logs med 30 J/cm2 i nærvær af 0,2% Rose bengal. -RB, uden Rose bengal inkubation; +RB, co-dyrket med Rose bengal i 15 min. Data er midler ± SEM af tre separate eksperimenter udført i to eksemplarer. p-værdier er angivet i figuren (Tukeys flere sammenligningstest, tovejs ANOVA). Klik her for at se en større version af denne figur.

Supplerende figur 1: LED-udgangsspektret. Fluenshastigheden blev målt hver 2 nm fra 510-560 nm med en effektmåler. Data samles fra to uafhængige eksperimenter med tredobbelte målinger. Klik her for at downloade denne fil.

Supplerende figur 2: Mediets temperatur under bestråling. Et termoelement blev indsat i hver brønd af en 96-brønds plade fyldt med 100 μL bouillon for at måle temperaturen. Temperaturen var konstant ved 25 ± 1 °C. Data samles fra duplikerede eksperimenter med tredobbelte brønde. Klik her for at downloade denne fil.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Opmuntrende resultater af kliniske anvendelser af RB-PDT til svampekeratitis er blevet rapporteret for nylig19. Absorptionstoppen af RB er ved 450-650 nm. Det er vigtigt at bestemme lyskildens fluenshastighed for en vellykket aPDT. En høj fluens (normalt >100 J /cm2) er nødvendig for at behandle kræftceller, mens en lavere fluens forventes at behandle inficerede læsioner6. En høj fluens betyder en lang eksponeringstid, som måske ikke er praktisk i kliniske omgivelser. Til behandling af mykotisk keratitis er der aftalt en 5,4 J/cm2 i det oftalmologiske samfund20. En lang inkubationstid for RB er også ubelejligt for en patient at modtage aPDT-behandling. Således blev der valgt en 15 minutters inkubationstid til yderligere eksperimenter.

Nogle trin er afgørende for et vellykket eksperiment. Agarpladerne, der blev brugt til svampekultur, blev tørret i 15-20 minutter i en lamellær strømningskabine med ventilatoren tændt for at reducere fugt på overfladen. En fugtig overflade ville gøre det muligt for strømmen af svampedråberne at blande sig, hvilket forhindrer dannelsen af en enkelt koloni.

Udførelse af alle eksperimenter i svagt lys er afgørende for at holde RB fra fotobleaching. Det elektriske kredsløb var i en parallel forbindelse, så hvis der skete en pause i et af kredsløbene, ville de resterende apparater ikke blive påvirket. Hvis der er resultater, der overgår andre, kan arrayet kontrolleres først for at sikre, at alle LED-pærer er i god funktion.

En begrænsning ved at bruge en LED-lyskilde er dens temperaturafhængighed. I en LED produceres varme ikke af selve LED-pæren, men genereres ved halvlederkrydset i enheden9. Da overdriving af lysdioder over deres nominelle strøm fremkalder stigningen i forbindelsestemperaturen, hvilket i sidste ende fører til for tidlig svigt i pæren, er det nødvendigt at udstyre enheden med en metalkøleplade for at give passende afkøling af krydset. En anden begrænsning af LED-arrayets nuværende design er det begrænsede område, der belyses af hver LED-pære, som kun rummer en enkelt brønd på en 96-brønds plade. Hvis der er behov for et større belysningsområde, er et andet arrangement af LED-pærer med passende tilsvarende afstande over eller under pladen nødvendigt for at opnå jævn belysning.

Fordelene ved dette undersøgelsesdesign er den lette og billige opsætning af det fotodynamiske system til aPDT-eksperimenter. Det kan bruges i forsøg vedrørende svampeinfektioner. Virus og bakterier kan også testes i samme system. LED-lysstrimlen kan vælges fra en anden lysfarve for at korrelere med absorptionstoppene for forskellige fotosensitisatorer, lige fra synligt til nær-infrarødt lysspektrum. De kan let købes fra markedet. Strimlen kan skæres og samles i forskellige arrays for at justere med en 96-brønds plade for et assay med høj gennemstrømning. Brugen af en plade med 96 brønde tillader forskellige testforhold på samme tid for at spare tid og plads i laboratoriet.

Afslutningsvis er det etablerede system i denne undersøgelse enkelt, let og alsidigt at undersøge forskellige fotodynamiske virkninger på forskellige mikroorganismer og celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt.

Acknowledgments

Dette arbejde har modtaget finansiering fra Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University fra Featured Areas Research Center Program inden for rammerne af Higher Education Sprout Project af Undervisningsministeriet (MOE) og Ministeriet for Videnskab og Teknologi, Taiwan [MOST 109-2327-B-006-005] til TW Wong. J.H. Hung anerkender finansiering fra National Cheng Kung University Hospital, Taiwan [NCKUH-11006018] og [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL microfuge tube Neptune, San Diego, USA #3745.x
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap Falcon, USA #352235
96-well plate Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan #16196
Aluminum foil sunmei, Tainan, Taiwan
Aluminum heat sink Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan BK-T220-0051-01 Disperses heat from the LED array.
Centrifuge Eppendorf, UK 5415R
Graph pad prism software GraphPad 8.0, San Diego, California, USA graphing and statistics software
Green light emitting diode (LED) strip Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan 2835 Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63
Incubator Yihder, Taipei, Taiwan LM-570D (R)
Light power meter Ophir, Jerusalem, Israel PD300-3W-V1-SENSOR,
Millex 0.22 μm filter Merck, NJ, USA SLGVR33RS
Multidrug-resistant Candida albicans Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan BCRC 21538/ATCC 10231 http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538
OD600 spectrophotometer Biochrom, London, UK Ultrospec 10
Rose Bengal Sigma-Aldrich, MO, USA 330000 stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium HIMEDIA, India M1363

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).
  2. Pappas, P. G., et al. Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).
  3. Ricotta, E. E., et al. Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017. Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).
  4. Koehler, P., et al. Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis. Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).
  5. Toda, M., et al. Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).
  6. Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. Daylight photodynamic therapy: an update. Molecules. 25 (21), 5195 (2020).
  7. Wainwright, M. Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT). Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).
  8. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance. Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).
  9. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  10. Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit. Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).
  11. Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
  12. Stasko, N., et al. Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue. Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).
  13. Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).
  14. Feenstra, R. P., Tseng, S. C. Comparison of fluorescein and rose bengal staining. Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).
  15. Demidova, T. N., Hamblin, M. R. Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).
  16. Shahid, H., et al. Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities. Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).
  17. Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).
  18. Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition. Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).
  19. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).
  20. Martinez, J. D., et al. Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study. Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).

Tags

Immunologi og infektion udgave 181
Rose Bengal-medieret fotodynamisk terapi til at hæmme <em>Candida albicans</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., … More

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., Lee, C. N., Chang, Y., Chang, R. Y., Huang, C. C., Wong, T. W. Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans. J. Vis. Exp. (181), e63558, doi:10.3791/63558 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter