El presente protocolo establece un modelo de ratón de diálisis peritoneal (DP) de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG). El modelo actual es simple y fácil de usar en comparación con otros modelos animales de EP.
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Artículo de método
Un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La fibrosis peritoneal es una complicación importante de la diálisis peritoneal (DP). Para investigar y abordar este problema, se requiere un modelo animal apropiado de EP. El presente protocolo establece un modelo de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG) que imita la condición de un paciente con EP. La fibrosis peritoneal se indujo mediante inyección intraperitoneal de 0,1% de CG en etanol al 15% durante 3 semanas (administrada cada dos días), para un total de nueve veces en ratones machos C57BL/6. Las pruebas funcionales peritoneales se realizaron el día 22. Después de sacrificar los ratones, se recolectaron el peritoneo parietal de la pared abdominal y el peritoneo visceral del hígado. Eran más gruesos y fibróticos cuando se analizaron microscópicamente después de la tinción tricrómica de Masson. La tasa de ultrafiltración disminuyó, y el transporte de masa de glucosa indicó un aumento inducido por CG en la permeabilidad peritoneal. El modelo de DP así establecido puede tener aplicaciones para mejorar la tecnología de DP, la eficacia de la diálisis y prolongar la supervivencia del paciente.
Introducción
La diálisis peritoneal (DP) es un tipo de terapia de reemplazo renal. Sin embargo, la EP tiene problemas que no se pueden resolver. Por ejemplo, el tratamiento a largo plazo de la EP puede causar daño peritoneal, lo que eventualmente conduce al fracaso de la ultrafiltración y al retiro del tratamiento 1,2,3,4,5,6. La fibrosis peritoneal es una de las complicaciones más graves 7,8. La fibrosis peritoneal se caracter....
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Protocolo
Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el Centro de Animales de Laboratorio del Hospital E-DA / Universidad I-Shou y se manejaron de acuerdo con la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" (NRC, EE. UU. 2011). Para el presente estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6, de 7-8 semanas de edad.
1. Preparación química
- Prepare el irritante químico diluyendo el gluconato de clorhexidina al 0,1% (CG, consulte la Tabla de materiales) en etanol al 15%.
2. Tratamiento de los animales
- Asigne tres ratones como gru....
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Resultados
En la Figura 1A,B, el peritoneo parietal de la pared abdominal era marcadamente más grueso y fibrótico bajo la tinción tricrómica de Masson17, indicando que en el grupo expuesto a CG, la fibrosis peritoneal es más grave que en el grupo control salino (SN). En la Figura 2A,B, el peritoneo visceral de las superficies hepáticas también era marcadamente más grueso y fibrótico, lo que demuestra que en el grupo expuesto a CG, l.......
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Discusión
En este estudio, un modelo de DP de ratón se presenta por inyección i.p. de GC, y los resultados mostraron fibrosis peritoneal y deterioro funcional en este modelo, que imitó la condición del paciente con EP.
Hay varios pasos críticos en el protocolo. Primero, para realizar una inyección i.p. de CG o NS, la piel de la pared abdominal del ratón debe recogerse con fórceps para evitar el daño intraperitoneal inducido por punción. En segundo lugar, al recoger el peritoneo de la pared abdominal par.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos sinceramente a Shin-Han Tseng por la discusión crítica y la ejecución parcial del estudio. Este estudio fue apoyado por EDAHP110003 y NCKUEDA110002 de la Fundación de Investigación del Hospital E-DA y la Universidad Nacional Cheng Kung, Taiwán.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0.9% Solución salina normal | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwán-10 | ||
| % formalina tamponada neutra | Taiwán Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwán | 00002A | |
| Analizador bioquímico automático | Hitachi Ltd., Tokio, Japón | Labospect Series 008 | para determinar la concentración de glucosa |
| Solución de digluconato de clorhexidina, 20% en H2O | Sigma-Aldrich, MO, EE. UU. | C9394 | diluido al 0,1 % con etanol al 15 % para inyección |
| Etanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, EE. UU. | BAKR8006-05 | diluido al 15 % con solución salina normal para la concentración de trabajo |
| Glucosa (Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, EE. UU | . FNB9896 | Solución de diálisis comercial (4,25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | Software GraphPad, Inc., CA, EE. UU. | ||
| Ensayo Glu 2 tipo L | FUJIFILM WAKO, Japón | 461-32403 | |
| Xilacina 20 | de julio Pharmaceutical Co., Ltd., Ciudad de New Taipei, Taiwán-Zoletil | ||
| 50 | Laboratorios Virbac, Carros, Francia | - |
Referencias
- Han, S. H., et al. Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center. Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).
- Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T.
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Reimpresiones y permisos
