El protocolo describe un modelo de donación de animales grandes (porcinos) después de la muerte circulatoria, seguido de perfusión regional normotérmica toracoabdominal que simula de cerca el escenario clínico en el trasplante cardíaco y tiene el potencial de facilitar estudios y estrategias terapéuticas.
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Artículo de método
Modelo animal grande de donación después de la muerte circulatoria y perfusión regional norterámica para la evaluación cardíaca
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En este artículo
Resumen
Resumen
El aumento en la demanda de trasplante cardíaco a lo largo de los años ha alimentado el interés en la donación después de la muerte circulatoria (DCD) para ampliar el grupo de donantes de órganos. Sin embargo, el proceso DCD se asocia con el riesgo de lesión del tejido cardíaco debido al inevitable período de isquemia caliente. La perfusión regional norterámica (NRP) permite una evaluación de órganos in situ , lo que permite la obtención de corazones que se determina que son viables. Aquí, describimos un modelo de animal grande clínicamente relevante de DCD seguido de NRP. La muerte circulatoria se establece en cerdos anestesiados al detener la ventilación mecánica. Después de un período de isquemia caliente preestablecido, se utiliza un oxigenador de membrana extracorpórea (OMEC) durante un período de PRN que dura al menos 30 minutos. Durante este período de reperfusión, el modelo permite la recolección de varias biopsias de miocardio y muestras de sangre para la evaluación cardíaca inicial. Una vez que se destete la NRP, se pueden realizar evaluaciones bioquímicas, hemodinámicas y ecocardiográficas de la función cardíaca y el metabolismo antes de la obtención de órganos. Este protocolo simula de cerca el escenario clínico descrito previamente para DCD y NRP en el trasplante de corazón y tiene el potencial de facilitar estudios dirigidos a disminuir la lesión por isquemia-reperfusión y mejorar la preservación y recuperación funcional cardíaca.
Introducción
Más de 300,000 personas mueren en América del Norte cada año de insuficiencia cardíaca (IC); El trasplante cardíaco sigue siendo la única opción de tratamiento para algunos de estos pacientes con enfermedad terminal1. Históricamente, la fuente exclusiva para el trasplante de corazón fueron los corazones de donantes obtenidos después de la determinación neurológica de muerte (NDD), pero incluso entonces, solo alrededor del 40% eran adecuados para el trasplante2. Entre el 15% y el 20% de los pacientes mueren mientras esperan una donación de corazón, siendo la escasez de corazones de donantes una de las razones que crea una....
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Protocolo
El comité institucional de cuidado y uso de animales del Centre de Recherche du Centre Hospitalier de l'Université de Montréal (CRCHUM) aprobó todos los protocolos experimentales, y los animales fueron tratados de acuerdo con la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Para este protocolo, se utilizaron cerdos machos o hembras grandes blancos de 3-4 meses de edad que pesan 50-60 kg. El tamaño del animal puede variar de acuerdo con los objetivos experimentales de los investigadores.
1. Preparación animal e inducción anestésica
- Premedicar al animal usando una inyección intramuscular de atropina (0,04 m....
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Resultados
Este modelo preclínico ha sido utilizado con éxito en nuestra institución para múltiples experimentos. Primero, demostramos que los corazones DCD, inicialmente reperfundidos con NRP, demostraron una recuperación funcional similar después del trasplante en comparación con la donación convencional de corazón latido preservada con almacenamiento en frío. Además, hemos utilizado este protocolo para mostrar que la evaluación funcional cardíaca después de la NRP fue predictiva de la recuperación posterior al trasplante. Finalm.......
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Discusión
Este manuscrito describe una donación de modelo de animales grandes después de la muerte circulatoria (DCD) seguida de perfusión regional normotérmica toracoabdominal. En este experimento, el corazón se reperfunde durante un mínimo de 30 minutos y un máximo de 3 h antes de que se retire del circuito ECMO. El corazón funciona por sí solo durante 2 horas, lo que permite una valiosa evaluación cardíaca a corto plazo. Por lo tanto, la principal limitación de este protocolo es el seguimiento a corto plazo; sin embargo, una ev.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría agradecer a Melanie Borie, Caroline Landry, Henry Aceros y Ahmed Menaouar por su valiosa ayuda y apoyo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Amiodarona | Tal como está disponible en la institución | ||
| Angiocath 20G | BD | 381704 | |
| Atropina 0,4 mg/mL | Como está disponible en la institución | ||
| Biomedicus Bomba centrífuga | Medtronic | ||
| Solución para cardioplejia (Del Nido) | de fabricación | Otra solución se puede utilizar a discreción del investigador | |
| Lápiz de cauterización | Covidien | E2515H | |
| Catéter venoso central de doble luz | Cook Medical | C-UDLM-501J-LSC | |
| Introductor de vaina venosa central 7 Fr | |||
| Catéter | |||
| CPB pack | Medtronic | ||
| DLP cánula de raíz aórtica | Medtronic | 12218 | |
| Cánula venosa de doble etapa DLP (29 o 37 F) | Medtronic | ||
| Dobutamina | Según esté disponible en la institución | ||
| Dopamina | Según esté disponible en la institución | ||
| Electrodo polihesivo | Covidien | E7507 | |
| EOPA Cánula arterial (17 o 21 F) | |||
| Epinefrina | Disponible en la institución | ||
| Mascarilla O2 Disponible | en la institución | ||
| Guantes, Nitrilo, Medio | Fischer | 27-058-52 | |
| Heparina 1000 UI/mL | Disponible en la institución | ||
| Isofurano | Proporcionado por el animalario de la institución | ||
| Catéter Jelco de 16 o 18 G | |||
| Ketamina inj. vial de 50 mL (100 mg/mL) | Health Canada | Se requiere la aprobación de Health Canada | |
| Lidocaína/xilocaína 1% | Disponible en la institución | ||
| Sulfato de magnesio 5 g/10 mL | Según esté disponible en la institución | ||
| Midazolam inj. vial de 10 mL (5 mg/mL) | Health Canada | Se requiere la aprobación de Health Canada | |
| MPS Quest entrega paquete desechable | Quest Medical | 5001102-AS | |
| Norepinefrina | Disponible en la institución | ||
| Solución salina normal (NaCl 0.9%) bolsa de 1L | Baxter | JB1324 | |
| Puntas de pipeta 1 mL | Fisherbrand | 02-707-405 | |
| Propofol 1 mg/mL | Según esté disponible en la institución | ||
| Rocuronio | Según esté disponible en la institución | ||
| Set Admin Prim NF PB W/ Válvula de retención | Smith Medical | 21-0442-25 | |
| Bicarbonato de sodio (NaOH) 8.4% | Como disponible en la institución | ||
| Sofsil 0 recubierto de cera | Covidien | S316 | |
| Solumedrol 500 mg/5 mL | Según esté disponible en la institución | ||
| Punta de succión | Covidien | 8888501023 | |
| Tubo de succión 1/4'' x 120' | 'Med-Rx | 70-8120 | |
| Sutura 3.0 Prolene Blu M SH | Ethicon | 8523H | |
| Sutura 5.0 Prolene BB | Ethicon | 8580H | |
| Sutura Prolene Blum 4-0 SH 36 | Ethicon | 8521H | |
| Sutura BB 4.0 Prolene | Ethicon | 8881H | |
| Tubo Traqueal, 6,5 mm | Mallinckrodt | 86449 | |
| Vasopresina | Disponible en la institución |
Referencias
- Yusen, R. D., et al. The Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-third adult heart transplantation report-2016; focus theme: primary diagnostic indications for transplant. The Journal of Heart and Lung Tr....
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Reimpresiones y permisos
