El presente protocolo desarrolló un método para estimar el rendimiento de compuestos en la placa TLC utilizando la técnica de iluminación azul-LED. Las ventajas de este enfoque son que es seguro, efectivo, económico y permite al investigador medir múltiples muestras simultáneamente.
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Artículo de método
Estimación del rendimiento de compuestos en la placa TLC mediante la técnica de iluminación Blue-LED
En este artículo
Resumen
Resumen
La cromatografía en capa fina (TLC) es una técnica analítica accesible que se ha utilizado ampliamente en la investigación de química orgánica para cuantificar el rendimiento de muestras desconocidas. El presente estudio desarrolló un método efectivo, barato y seguro para estimar el rendimiento de las muestras en una placa TLC utilizando el iluminador LED azul. La lovastatina extraída de Aspergillus terreus fue el compuesto de ejemplo utilizado en el presente estudio. Se utilizaron modelos de regresión basados en el estándar de lovastatina para evaluar el rendimiento de lovastatina. Se compararon tres métodos: bioensayo, detección UV e iluminación LED azul. El resultado mostró que el método de iluminación LED-azul es significativamente más efectivo en el tiempo que los métodos de detección UV y bioensayo. Además, la iluminación LED azul fue una opción relativamente segura debido a la preocupación por los peligros biológicos en el método de bioensayo (por ejemplo, infección microbiana) y la exposición ultravioleta en el método de detección UV. En comparación con los métodos costosos que requieren instrumentos especializados y capacitación a largo plazo antes de trabajar de forma independiente, como GC, HPLC y HPTLC, el uso del iluminador LED azul fue una opción económica para estimar el rendimiento de las muestras de una placa TLC.
Introducción
La cromatografía en capa fina (TLC) es ampliamente utilizada como técnica cualitativa y cuantitativa en el campo de la química orgánica 1,2,3. Las principales ventajas de TLC son que proporciona una detección rápida, requisitos de muestra flexibles y no requiere equipos especializados4. Hasta la fecha, a pesar de que se han establecido muchos enfoques avanzados, TLC sigue siendo el método principal para identificar muestras desconocidas en una mezcla. Sin embargo, el desafío de este enfoque es la falta de equipos seguros y económicos para cuantificar e....
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Protocolo
El presente protocolo se describe utilizando lovastatina como ejemplo. La lovastatina se extrajo de Aspergillus terreus de una semana de edad.
1. Extracción de compuestos
NOTA: Para obtener detalles sobre la extracción de compuestos, consulte la Figura 1.
- Cultivo de Aspergillus terreus en el medio de agar dextrosa de patata (PDA, ver Tabla de materiales) a 30 °C.
- Secar el cultivo a 40 °C durante 24 h. Transfiera el cultivo seco a un tubo de 50 ml con pinzas esterilizadas y agregue 15 ml de acetato de etilo. ....
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Resultados
Este estudio presentó el método de iluminación azul-LED para estimar el rendimiento de los compuestos, y este método fue validado y comparado con los métodos de bioensayo y detección UV (Tabla 1). Los modelos de regresión se desarrollaron en base a las dimensiones de las bandas y la concentración de patrones para tres métodos, respectivamente, para predecir el rendimiento de las muestras. En primer lugar, en los resultados del método de bioensayo, el R-cuadrado entre las dimensiones de la zona de inhibic.......
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Discusión
El presente estudio describió un nuevo enfoque, el iluminador azul-LED, para cuantificar compuestos sin utilizar equipos costosos y especializados, como HPTLC, HPLC y GC, y el método se comparó con los métodos de bioensayo y UV detectados para evaluar el rendimiento de cuantificación. Como resultado, se concluyó que el método de iluminación blue-LED es un protocolo relativamente seguro y efectivo utilizado para cuantificar el rendimiento de compuestos específicos en la placa TLC.
Estudios prev.......
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Divulgaciones
Todos los autores declaran que no tienen conflictos de intereses.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología de Taiwán (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Agar bacteriológico americano | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus | ATCC 20542 | ||
| Iluminador Blue-LED | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrífuga | Thermo Scientific | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Lámpara UV compacta | UVP | UVGL-25 | |
| Acetato de etilo | MACRON | MA-H078-10 | |
| Papel de filtro 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatin standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexano | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Caldo de patata dextrosa H | STBIO MEDIA | ||
| Evaporador rotativo | EYELA | SB-1000 | |
| Ácido sulfúrico | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC gel de sílice 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Ácido trifluoroacético | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Máquina de vibración ultrasónica | DELTA | DC600 |
Referencias
- Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078(2014).
- Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and qua....
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Reimpresiones y permisos
