El pez cebra ha sido explotado recientemente como modelo para validar posibles modificadores de radiación. El presente protocolo describe los pasos detallados para utilizar embriones de pez cebra para experimentos de detección basados en radiación y algunos enfoques observacionales para evaluar el efecto de diferentes tratamientos y radiación.
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Artículo de método
Larvas de pez cebra como modelo para evaluar posibles radiosensibilizadores o protectores
* These authors contributed equally
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Resumen
Resumen
El pez cebra se utiliza ampliamente en varios tipos de investigación porque es uno de los modelos de vertebrados de fácil mantenimiento y exhibe varias características de un sistema de modelos único y conveniente. Dado que las células altamente proliferativas son más susceptibles al daño del ADN inducido por la radiación, los embriones de pez cebra son un modelo in vivo de primera línea en la investigación de la radiación. Además, este modelo proyecta el efecto de la radiación y de diferentes fármacos en poco tiempo, junto con los principales eventos biológicos y las respuestas asociadas. En varios estudios oncológicos se ha utilizado el pez cebra, y este protocolo se basa en el uso de modificadores de radiación en el contexto de la radioterapia y el cáncer. Este método se puede utilizar fácilmente para validar los efectos de diferentes fármacos en embriones irradiados y de control (no irradiados), identificando así los fármacos como fármacos radiosensibilizantes o protectores. Aunque esta metodología se utiliza en la mayoría de los experimentos de detección de fármacos, los detalles del experimento y la evaluación de la toxicidad con el trasfondo de la exposición a la radiación de rayos X son limitados o sólo se abordan brevemente, lo que dificulta su realización. Este protocolo aborda este problema y analiza el procedimiento y la evaluación de la toxicidad con una ilustración detallada. El procedimiento describe un enfoque simple para el uso de embriones de pez cebra para estudios de radiación y detección de fármacos basados en radiación con mucha confiabilidad y reproducibilidad.
Introducción
El pez cebra (Danio rerio) es un modelo animal muy conocido que ha sido ampliamente utilizado en la investigación durante las últimas 3 décadas. Es un pequeño pez de agua dulce que es fácil de criar y criar en condiciones de laboratorio. El pez cebra ha sido ampliamente utilizado para diversos estudios toxicológicos y de desarrollo 1,2,3,4,5,6,7,8. El pez cebra tiene alta fecundidad y corta gene....
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Protocolo
El presente estudio se llevó a cabo con la aprobación previa del Comité Institucional de Ética Animal del Instituto de Ciencias de la Vida de Bhubaneswar y siguiendo las directrices. Todo el mantenimiento y la cría del pez cebra se llevaron a cabo en una instalación de cultivo de peces a temperatura ambiente a 28,5 °C, y los embriones se mantuvieron en una incubadora de demanda biológica de oxígeno (DBO) a una temperatura de 28,5 °C. En este caso, se utilizó la cepa AB de pez cebra y la estadificación se llevó a cabo de acuerdo con Kimmel et al.54. Se administró radiación de rayos X a 6 hpf (estadio de escudo) y se observaron diferentes fenoti....
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Resultados
El diseño general del protocolo se muestra en la Figura 2. El efecto de la radiación y la caracterización de manera dosis-dependiente se evaluó con los siguientes análisis.
Evaluación de las toxicidades inducidas por rayos X
Utilizando un microscopio estereoscópico, se evaluaron y caracterizaron las siguientes anomalías después del tratamiento farmacológico y/o la radiación. De acuerdo con las directrices 61 de la OCDE, para l.......
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Discusión
El pez cebra se utiliza como modelos valiosos en muchos estudios, incluidos varios tipos de investigación sobre el cáncer. Este modelo proporciona una plataforma útil para el cribado de drogas a gran escala67,68. Al igual que cualquier otro método de evaluación de la toxicidad, la evaluación cuantitativa de los principales cambios biológicos tras el tratamiento con radiación y/o fármacos es la parte más crucial de este protocolo. En este tipo de estudios, la supe.......
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Divulgaciones
Los autores han declarado que no hay intereses contrapuestos.
Agradecimientos
El laboratorio de SS y el laboratorio de RKS están financiados por subvenciones de DBT y SERB, India. APM es beneficiaria de la beca ICMR del Gobierno de la India. El PD ha recibido la beca CSIR del Gobierno de la India. La ONU ha recibido la beca DST-Inspire del Gobierno de la India. La Figura 2 se generó utilizando Biorender (https://biorender.com).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Placas de 6 pocillos | Corning | CLS3335 | Poliestireno |
| B.O.D Incubadora | Oswald | JRIC-10 | |
| Cloruro de calcio | Fisher Scientific | 10101-41-4 | |
| Microscopio de disección | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Tanque externo para el tanque de cría de 1,0 L | Tecniplast | ZB10BTE | Policarbonato |
| Placas de Petri de vidrio | Borosil | 3165A75 | |
| GraphpadPrisma | GraphPad Software, Inc. | Versión 5.01 | |
| Portaobjetos de concavidad Kline | Himedia | GW092-1PK | Vidrio |
| Cloruro de magnesio | Sigma-Aldrich | M8266 | |
| Hidrato de azul de metileno | Sigma-Aldrich | 66720-100G | |
| Parafilm | Tarsons | 380020 | Película de parafina |
| Pipetas Pasteur Himedia | PW1212-1X500NO | Polietileno | |
| Plástico Tanque interno perforado para el tanque de cría de 1.0 L | Tecniplast | ZB10BTI | Policarbonato |
| Divisor de policarbonato para el tanque de cría de 1.0 L | Tecniplast | ZB10BTD | Policarbonato |
| Tapa de policarbonato para el tanque de cría de 1.0 L | Tecniplast | ZB10BTL | Policarbonato |
| Cloruro de potasio | Sigma-Aldrich | P5655 | |
| Cloruro de sodio | Sigma-Aldrich | S7653-5KG | |
| Pellet de hidróxido de sodio | SRL 1949181 | ||
| Microscopio estereoscópico Leica M205FA | Leica | Model/PN MDG35/10 450 125 | |
| X-RAD 225 Rayos X de precisión | Rayos X de precisión | X-RAD 225XL |
Referencias
- Teame, T., et al. The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models. Animal Frontiers. 9 (3), 68-77 (2019).
- Ye, M., Chen, Y. Zebrafish as an emerging model to study gonad development. Computational and Structural Biotechnology Journal
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Reimpresiones y permisos
