Presentamos un protocolo para el uso de la punción subcutánea de Fu en un modelo de lesión por constricción crónica para inducir dolor del nervio ciático en ratas.
Artículo de método
* These authors contributed equally
Presentamos un protocolo para el uso de la punción subcutánea de Fu en un modelo de lesión por constricción crónica para inducir dolor del nervio ciático en ratas.
La punción subcutánea (FSN) de Fu, una técnica de acupuntura inventada de la medicina tradicional china, se utiliza en todo el mundo para aliviar el dolor. Sin embargo, los mecanismos de acción aún no se comprenden completamente. Durante el tratamiento con FSN, la aguja FSN se inserta y se retiene en los tejidos subcutáneos durante un largo período de tiempo con un movimiento de balanceo. Sin embargo, los investigadores plantean desafíos al mantener una postura mientras se manipula la FSN en modelos animales (por ejemplo, ratas). Un tratamiento incómodo puede provocar miedo y resistencia a las agujas FSN, lo que aumenta el riesgo de lesiones e incluso puede afectar a los datos de la investigación. La anestesia también puede afectar los resultados del estudio. Por lo tanto, existe la necesidad de estrategias en la terapia de FSN en animales que minimicen las lesiones durante la intervención. Este estudio emplea un modelo de lesión por constricción crónica en ratas Sprague-Dawley para inducir dolor neuropático. Este modelo replica el dolor inducido por la lesión nerviosa observada en humanos a través de la constricción quirúrgica de un nervio periférico, imitando la compresión o atrapamiento que se observa en afecciones como los síndromes de compresión nerviosa y las neuropatías periféricas. Introducimos una manipulación apropiada para insertar fácilmente una aguja FSN en la capa subcutánea del cuerpo del animal, incluida la inserción y dirección de la aguja, la retención de la aguja y el movimiento de balanceo. Minimizar la incomodidad de la rata evita que la rata esté tensa, lo que hace que el músculo se contraiga y dificulte la entrada de la aguja y mejora la eficiencia del estudio.
Se estima que el dolor neuropático, definido como el dolor causado por daño nervioso, afecta al 6,9%-10% de la población mundial, y la prevalencia a lo largo de la vida es del 49%-70%1,2. También se considera uno de los síndromes de dolor más difíciles de manejar. El uso de agentes farmacológicos para el manejo del dolor neuropático ha tenido un éxito limitado, ya que los analgésicos comúnmente prescritos, como los antiinflamatorios no esteroideos y los opioides, han mostrado poca eficacia para aliviar este tipo de dolor 3,4. Por lo tanto, existe una gran necesidad de explorar nuevas opciones de tratamiento, especialmente tratamientos no farmacológicos. La acupuntura, como intervención no farmacológica, puede aliviar el dolor neuropático al ejercer efectos analgésicos sobre el sistema somatosensorial. Tanto los estudios clínicos como los preclínicos han indicado que la acupuntura es eficaz para aliviar los síntomas del dolor neuropático sin efectos secundarios significativos 5,6,7. Sin embargo, el mecanismo central del tratamiento con acupuntura para el alivio del dolor en el dolor neuropático aún no se ha investigado más a fondo.
En los últimos años, la punción subcutánea de Fu (FSN) ha ganado popularidad para el tratamiento de trastornos neurológicos relacionados con eldolor. La NSF se originó a partir de la acupuntura tradicional china y fue descrita por primera vez por el médico tradicional chino Zhonghua Fu en 1996 9,10. Si bien se originó en la acupuntura tradicional, la FSN difiere significativamente en sus técnicas y teorías de la acupuntura basada en meridianos, los principios del yin y el yang y los conceptos de puntos de acupuntura. La FSN pone mayor énfasis en los abordajes neurofisiológicos y anatómicos para abordar eficazmente el dolor miofascial11. La terapia FSN se aplica en la práctica clínica para abordar diversos trastornos musculares dolorosos, dirigiéndose a los tejidos conectivos estrechamente asociados con los músculos, centrándose especialmente en el tratamiento de los músculos tensos (MT)12. Como terapia complementaria para el alivio del dolor, también existe evidencia clínica de que la FSN es efectiva en el tratamiento de lesiones de tejidos blandos, además de proporcionar un rápido manejo del dolor y una mejoría significativa en los espasmos de los tejidos blandos13,14. La terapia con FSN implica técnicas específicas diseñadas para abordar los puntos gatillo miofasciales (MTrP) subyacentes asociados con la afección. La posición de inserción de la aguja FSN se elige cuidadosamente en función de la ubicación de estos puntos gatillo, lo que permite apuntar con precisión a las áreas afectadas. Durante el procedimiento, la aguja FSN se inserta en la capa subcutánea, donde se detiene intencionalmente para optimizar los efectos terapéuticos. A continuación, se emplea una técnica distintiva conocida como movimiento de balanceo, que implica un suave movimiento oscilante de la aguja para estimular los tejidos y promover las respuestas terapéuticas10. El desarrollo de MTrP se asocia con la teoría de la crisis energética, que explica que factores como la sobrecarga muscular crónica, el ejercicio excesivo, las posturas de esfuerzo inadecuadas, la atrofia muscular y la degeneración pueden contribuir a la aparición de isquemia e hipoxia del tejido muscular. Se cree que esta deficiencia de oxígeno y energía dentro del tejido muscular juega un papel clave en la formación de MTrPs15,16. Estudios previos en animales han encontrado que el tratamiento con FSN para el dolor crónico en ratas mejora la estructura morfológica y la función de las mitocondrias en las MT hasta cierto punto, validando el potencial de la terapia con FSN para promover la recuperación de los nervios y músculos dañados17.
La ciática ha sido clasificada como dolor neuropático18. Se cree que el origen del dolor neuropático se encuentra en cualquier lugar entre la placa terminal motora y la capa fibrosa externa del músculo, involucrando el sistema microvascular y los neurotransmisores a nivel celular. La pérdida de inervación muscular y la apoptosis de las células nerviosas inervadas se produce cuando se produce un daño nervioso19, lo que lleva a una marcha relacionada con el dolor en la extremidad afectada. Además, la compresión crónica o la irritación del nervio pueden conducir a una variedad de cambios en la forma de las funciones nerviosas, lo que puede exacerbar aún más los síntomas de la ciática. Sin embargo, la complejidad del sistema nervioso dificulta su replicación in vitro, por lo que es necesario el uso de modelos animales para este tipo de estudios. En la investigación de los trastornos de dolor neuropático, los organismos modelo se emplean comúnmente, involucrando varios métodos de lesión directa de los nervios periféricos, como la ligadura del nervio ciático, la transección o la compresión21,22. El modelo de lesión por constricción crónica (CCI) en ratas Sprague-Dawley se ha utilizado para inducir dolor neuropático. Este modelo replica el dolor inducido por la lesión nerviosa observada en humanos a través de la constricción quirúrgica de un nervio periférico, imitando la compresión o atrapamiento que se observa en afecciones como los síndromes de compresión nerviosa y las neuropatías periféricas.
En este estudio, evaluamos los efectos analgésicos de la terapia con FSN y la electroterapia de baja frecuencia (estimulador nervioso eléctrico transcutáneo, TENS) en ratas con lesión crónica por constricción y dolor neuropático. Como la anestesia ralentiza o bloquea los impulsos nerviosos y afecta la transmisión sináptica y la función neuronal23, los animales no pueden ser anestesiados bajo todos los procedimientos de punción y movimientos de balanceo. Por lo tanto, se requiere una técnica de aguja adecuada para reducir las molestias en ratas. Se describen en detalle los pasos para establecer un modelo de CCI en ratas, la forma en que las ratas fueron tratadas con FSN combinando el movimiento de balanceo sin anestesia, las pruebas factibles de patrones de comportamiento animal y las investigaciones electrofisiológicas.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Todos los procedimientos que involucran a sujetos animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) del Chang Bing Show Chwan Memorial Hospital, Changhua, Taiwán (111031) en octubre de 2022 (Figura 1).
1. Preparación de los animales
2. Agrupación de animales
3. Establecimiento de un modelo de rata CCI
NOTA: El modelo de cirugía CCI en ratas fue modificado de acuerdo con Bennett y Xie realizado en 198825.
4. Administración de la manipulación de FSN
5. Administración de la manipulación de TENS
6. Mediciones fisiológicas realizando la prueba de comportamiento animal
NOTA: El índice de función ciática (SFI)30 es un índice ampliamente utilizado por los investigadores que estudian la patología y el tratamiento potencial de las lesiones nerviosas, determinado comparando la geometría de la pata trasera afectada en ratas lesionadas con la de la pata contralateral y comparándola con la pata opuesta.

7. Evaluación neurofisiológica por medición electrofisiológica33
NOTA: Se utilizó electromiografía para registrar la actividad electrofisiológica en este estudio. El potencial de acción muscular compuesto (CMAP) es causado por la activación de las fibras musculares en el músculo objetivo irrigado por el nervio. Se investigan la amplitud y la latencia de CMAP. La amplitud del CMAP se mide desde el inicio hasta el pico negativo. La latencia de los CMAP se determina midiendo el tiempo entre la aplicación del estímulo y el inicio del potencial de acción compuesto, que está influenciado por la distancia entre el sitio de estimulación y el sitio de registro. La electrofisiología proporciona una evaluación objetiva de la función de los nervios periféricos en ratas.
8. Estadísticas:
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Huellas y determinación del SFI
Examinamos el desarrollo de SFI en los grupos CCI solo, CCI+FSN y CCI+TENS (Figura 7). Después de 4 sesiones de tratamientos con FSN y TENS en el día 7 para la cirugía de CCI, el SFI en los grupos CCI+FSN (-15,85 ± 3,46) y CCI+TENS (-29,58 ± 9,19) mejoró significativamente en comparación con el grupo de CCI solo (-87,40 ± 14,22). La mejoría fue significativa en el grupo CCI+FSN en comparación con el grupo CCI+TENS (Figu...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Este estudio observa el efecto del tratamiento con FSN sobre el dolor neuropático en modelos de ICC de rata. En este estudio se presenta un protocolo de SFI y pruebas electrofisiológicas para evaluar los efectos terapéuticos después del tratamiento con FSN o TENS. Además, ilustra cómo evaluar la recuperación funcional del nervio lesionado mediante pruebas conductuales no invasivas y mediciones fisiológicas. Los resultados mostraron que el tratamiento con FSN después del dolor del nervio ciático inducido por ICC mostró un...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Los autores declaran que no existen conflictos de intereses contrapuestos.
Este estudio fue financiado por una subvención del centro de animales del Chang Bing Show Chwan Memorial Hospital, Changhua, Taiwán. Los autores desean agradecer al Show Chwan Memorial Hospital IRCAD TAIWAN por su inestimable apoyo y asistencia a lo largo de este proyecto de investigación.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pinzas | World Precision Instruments | 14098 | |
| Fu' s punción subcutánea | Nanjing Paifu Medical Science and Technology Co. | Las agujas FSN están diseñadas para un solo uso. La aguja FSN se compone de tres partes: un núcleo de aguja de acero sólido (parte inferior), un tubo de carcasa blanda (centro) y una funda protectora (parte superior). | |
| Electromiografía Medelec Synergy | Oxford Instrument Medical Ltd. | 034W003 | Los electromiogramas (EMG) se utilizan para ayudar en el diagnóstico y tratamiento de trastornos como las neuropatías. Contiene un sistema portátil de velocidad de electromiografía/conducción nerviosa de dos canales. |
| Solución salina normal (0,9%) 20 mL | Taiwan Biotech Co.,Ltd. | 4711916010323 | Lote: 1TKB2022 |
| POLYSORB 4-0 VIOLETA 30" CV-25 | ESTADOS UNIDOS QUIRÚRGICO, UNA DIVISIÓN DE TYCO HEALTHC | RETRACTOR GL-181 | |
| COOPERSURGICAL, INC. (EE. UU.) | 3311-8G | ||
| Rompun | Elanco Animal Health Korea Co. Ltd. | 27668 | |
| TIJERAS CVD 90MM | BBRUAN | XG-LBB-BC101R | |
| Estimulación nerviosa eléctrica transcutánea | Well-Life Healthcare Co. | Número de modelo 2205A | Unidad digital que ofrece TENS. Se suministra completo con cables para el paciente, electrodos autoadhesivos, 3 pilas AAA e instrucciones en una bolsa de transporte blanda. Intervalo de tiempo de encendido 1– 30 s. Intervalo de tiempo de apagado 1– 30 s. |
| Zoletil | VIRRBAC | 8V8HA |
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE
Solicitar permiso