Artículo de método
La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.
La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria autoinmune crónica que afecta al sistema nervioso central (SNC). Se caracteriza por una prevalencia diferente en los sexos, afectando más a las mujeres que a los hombres, y diferentes resultados, mostrando formas más agresivas en los hombres que en las mujeres. Además, la EM es muy heterogénea en cuanto a aspectos clínicos, características radiológicas y patológicas. Por lo tanto, es necesario aprovechar los modelos animales experimentales que permiten investigar la mayor cantidad posible de aspectos de la patología. La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) representa uno de los modelos de EM más utilizados en ratones, modelando diferentes características de la enfermedad, desde la activación del sistema inmune hasta el daño en el SNC. En este trabajo describimos un protocolo para la inducción de EAE en ratones C57BL/6J machos y hembras mediante inmunización con el péptido glicoproteico de oligodendrocitos de mielina 35-55 (MOG35-55), que conduce al desarrollo de una forma crónica de la enfermedad. También informamos de la evaluación de la puntuación clínica diaria y el rendimiento motor de estos ratones durante 28 días después de la inmunización (28 dpi). Por último, ilustramos algunos análisis histológicos básicos a nivel del SNC, centrándonos en la médula espinal como el sitio primario de daño inducido por la enfermedad.
La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria autoinmune crónica que afecta al sistema nervioso central (SNC). Muestra la presencia de infiltración perivascular de células inflamatorias, desmielinización, pérdida axonal y gliosis1. Su etiología sigue siendo desconocida y sus aspectos clínicos, radiográficos y patológicos sugieren una notable heterogeneidad en la enfermedad2.
Debido a su etiología y complejidad desconocidas, en la actualidad, ningún modelo animal recapitula todas las características clínicas y radiológicas mostradas en la EM humana 3,4<....
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El cuidado y manejo de los animales en el presente trabajo se realizó de acuerdo con la Directiva del Consejo de la Unión Europea de 22de septiembre de 2010 (2010/63/UE); todos los procedimientos relatados en el presente estudio fueron aprobados por el Ministerio de Salud italiano (407/2018-PR) y por el Comité de Ética de la Universidad de Turín (Proyecto n° 360384). Sugerimos ajustar el diseño experimental a las guías ARRIVE, publicadas originalmente por Kilkenny et al. en 201020. Antes de comenzar, asegúrese de que los materiales necesarios estén disponibles (consulte la tabla de materiales). Esterilizar toda la cr....
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Seguimiento de EAE tras la inmunización
Esto se evaluó como se describe a continuación.
Peso corporal e ingesta de alimentos
El análisis de varianza de dos vías (ANOVA) (sexo y tiempo como variables independientes) muestra una disminución del peso corporal de los animales EAE de ambos sexos, especialmente dentro de la segunda semana post inducción (F(1,57) = 4,952, p < 0,001; Figura 2A). Sin e.......
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El protocolo EAE inducido por MOG35-55 que describimos condujo al desarrollo de una forma crónica de EM en ratones C57BL/6J 7,8,13. En estos resultados representativos, reportamos que los animales de ambos sexos que se sometieron al procedimiento de inmunización desarrollaron una forma crónica de la enfermedad (es decir, no se recuperan completamente después del inicio de la enfermedad, acumulan déficits y mantienen u.......
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Ninguno de los autores tiene ningún conflicto de intereses que declarar con respecto a la investigación, autoría y/o publicación de este artículo.
Este trabajo ha sido apoyado por el Ministero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca - MIUR proyecto Dipartimenti di Eccellenza 2018-2022 y 2023-2027 al Departamento de Neurociencia Rita Levi Montalcini; Fundación Cavalieri-Ottolenghi, Orbassano, Italia. BB fue becario de INFRA-P, Región de Piamonte (n.378-35) (2022-2023) y PRIN 2020 - 20203AMKTW. Agradecemos a la Fondazione per la Ricerca Biomedica Onlus (FORB) por el apoyo. Las cuotas de publicación han sido financiadas por la amable donación del Distretto Rotaract 2031 y, en particular, del Club Rotaract Torino Nord-Est. Agradecemos a Elaine Miller por la revisión de nuestro manuscrito.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 18 G x 1 y frac12; “ Aguja de 1,2 x 40 mm para la jeringa de vidrio | Terumo | TER-HYP-18G-112-PIN | |
| Cámara digital conectada al microscopio óptico | Cámara digital NIKON DS-U1 | ||
| precisión | Merck Mod. Kern-440-47N, resolución 0.1 g | ||
| Eosin Y | Sigma-Aldrich | HT110216 | |
| Pipeta de jeringa de vidrio" ultra asept" 10 ml | Sacco System | ||
| Cristalería (es decir, para preparar la emulsión) | VWR | 213-1170, 213-1172 | |
| Hematoxilina (Mayer' s) | Sigma-Aldrich | MHS32 | antes de usarlo. |
| Software de análisis de imágenes | Fiji | ||
| Freund incompleto s adyuvante (IFA) | Sigma-Aldrich | F5506 | Tienda en +4 °C. |
| Isoflurano | Wellona Pharma | Este medicamento se utiliza como anestésico inhalatorio. | |
| Ratones machos y hembras C57BL/6J | Jackson Laboratory, Envigo | Edad 8-10 semanas, peso corporal óptimo de ~20 g. | |
| Microtomo | Leica HistoCore BIOCUT R | ||
| Medio de montaje | Merck | 107961 | |
| Ratón Rotarod | Ugo Basile | #47600 | |
| Mycobacterium tuberculosis (MT), cepa H37Ra | Laboratorios Difco Inc. | 231141 | Tienda a +4 °C. |
| Péptido de glicoproteína de oligodendrocitos de mielina 35-55 (MOG35-55) | Espikem | EPK1 | Almacene a -80 ° C diluido (2 mg/mL) en solución fisiológica; Prepáralo el día de la inmunización para evitar, en la medida de lo posible, alteraciones o contaminaciones. |
| Microscopio óptico | NIKON eclipse 90i | ||
| Paraformaldehído (PFA) | Sigma-Aldrich | 158127 | Tienda en +4 ° C una vez diluido (4%) en tampón de fosfato. |
| Toxina de la tos ferina (PT) | Duotech | Tienda PT.181 | a -80 grados; C diluido (concentración 5 y micro; g/mL) en solución fisiológica |
| Solución fisiológica (solución de cloruro sódico al 0,9%) | B. Eurospital | A 032182038 | Almacenar a +4 ° C una vez abierto. |
| Tampón de fosfato salino (PBS) | Thermo Scientific | J61196. | |
| Software AP para la adquisición de imágenes | Jeringas NIS-Element AR 2.10 | ||
| U-100 0,5 mL con 30 G x 5/16" (0,30 x 8 mm) en aguja fija | ; Jeringas Nipro | SYMS-0.5U100-3008B-EC | |
| U-100 1 mL con 26G x ½ ” (0,45 x 12,7 mm) en aguja | PIC | 20,71,26,03,00,354 | |
| Pomada veterinaria para los ojos | Lacrilube, Lacrigel Europhta | ||
| Xilacina | Rompun | Esta mezcla de fármaco se utiliza como anestésico inyectable y sedante. | |
| Zolazepam y tiletamina | Zoletil 100 | Este medicamento se utiliza como anestésico inyectable, sedante, relajante muscular y analgésico |
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Solicitar permisoAn erratum was issued for: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. The Authors section was updated. An additional affiliation (School of Pharmacy, Pharmacology Unit, University of Camerino) was added for author Antonino Casile.