Espectrometría de masas en tándem de alta resolución para el estudio de los constituyentes químicos de Gynura bicolor DC

Resumen

Describimos un protocolo general que integra el análisis de espectrometría de masas de alta resolución y el acoplamiento molecular en la investigación de la medicina tradicional china.

Resumen

La separación y el análisis de los componentes químicos deseados son temas importantes para la investigación fundamental de la medicina tradicional china (MTC). La cromatografía líquida de ultra alta resolución, espectrometría de masas en tándem con tiempo de vuelo cuadrupolar (UPLC-Q-TOF-MS/MS) se ha convertido gradualmente en una tecnología líder para la identificación de ingredientes de la MTC. Gynura bicolor DC. (BFH), una hierba perenne sin tallo utilizada para la medicina y la comida en China, tiene efectos medicinales como eliminar el calor, humedecer el pulmón, aliviar la tos, dispersar la estasis y aliviar la hinchazón. Los polifenoles y flavonoides contienen numerosos isómeros, que dificultan la identificación de los compuestos complejos en BFH. Este artículo presenta un protocolo sistemático para el estudio de los constituyentes químicos de BFH basado en la extracción con solventes y datos integrados a través de UPLC-Q-TOF-MS.

El método descrito aquí incluye protocolos sistemáticos para el pretratamiento de muestras, la calibración de MS, la adquisición de MS, el procesamiento de datos y el análisis de resultados. El pretratamiento de muestras incluye la recolección, la limpieza, el secado, la trituración y la extracción. La calibración MS consiste en corrección multipunto y de un solo punto. El procesamiento de datos incluye la importación de datos, el establecimiento de métodos, el procesamiento de análisis y la presentación de resultados. En este artículo se presentan resultados representativos del patrón de fragmentación típico de ácidos fenólicos, ésteres y glucósidos en Gynura bicolor DC (BFH). Además, se analizan en detalle la selección de disolventes orgánicos, la extracción, la integración de datos, la selección de energía de colisión y la mejora del método. Este protocolo universal puede ser ampliamente utilizado para identificar compuestos complejos en la medicina tradicional china.

Introducción

La medicina tradicional china (MTC) se ha practicado clínicamente en China durante miles de años y desempeña un papel vital en el mantenimiento de la salud del pueblo chino^. La composición de la MTC es diversa y compleja, y la MTC ha sido ampliamente reportada en muchos estudios cualitativos centrados en la composición química². Los componentes químicos de la medicina tradicional china se pueden dividir aproximadamente en las siguientes categorías, como alcaloides, ácidos orgánicos, fenilpropanoides, cumarinas, lignanos, quinonas, flavonoides, terpenoides, saponinas triterpenoides, sapon....

Protocolo

1. Pretratamiento de la muestra

1. Lave toda la hierba de BFH en agua pura hasta que no haya depósitos ni impurezas visibles. Coloque el BFH limpio en un plato y luego colóquelo en el horno (Figura 1B). Pon el horno a 50 °C durante 24 h.
   NOTA: Toda la planta de BFH se recolectó en la provincia de Sichuan, China.
2. Triture BFH seco en una trituradora multifuncional de alta velocidad. Transfiera el polvo grueso a un colador de malla 50 (Figura 1C). Recoja el polvo fino en una bolsa hermética y guárdelo en una torre de secado.
3. Pese co....

Resultados

La identificación de la composición química de BFH se utilizó como modelo para mostrar los resultados representativos. Cromatogramas de picos de base de Gynura bicolor DC extraído con disolvente. se muestran en el Archivo Suplementario 1-Figura Suplementaria S1-S6, y el tiempo de retención observado (RT), el nombre del componente, la fórmula, la relación masa-carga (m/z) y el error de masa se enumeran en las Tablas S1-S6. En el ZBTK, se identificaron los 35 tipos de compuestos a partir de picos .......

Discusión

Además de la decocción en agua¹², la extracción con solventes orgánicos es otro método común de pretratamiento de la MTC¹³. De acuerdo con el principio de disolución en fase similar, se han extraído numerosos componentes mediante la combinación de varios solventes orgánicos¹⁴. La extracción asistida por ultrasonidos es uno de los principales métodos utilizados para obtener componentes en TCM¹⁵.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
cloroformo	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
etanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
acetato de etilo	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
cromatógrafo de líquidos	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS software
de controlalcohol n-butílico	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
éter de petróleo	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Espectrometría de masas de tiempo de vuelo cuadrupolar	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Software de análisis de datos