Este manuscrito presenta un protocolo para la preparación histológica de láminas a partir de globos oculares de roedores. Con el método propuesto, la retina interna puede visualizarse y evaluarse fácilmente bajo un microscopio óptico. El procedimiento se presenta para los globos oculares de ratones y ratas.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Preparación y análisis de láminas histológicas de globos oculares de rata y ratón para evaluar la retina
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Un globo ocular de roedor es una herramienta poderosa para investigar los mecanismos patológicos de muchas enfermedades oftálmicas, como el glaucoma, la retinopatía hipertensiva y muchas más. Los experimentos preclínicos permiten a los investigadores examinar la eficacia de nuevos fármacos, desarrollar nuevos métodos de tratamiento o buscar nuevos mecanismos patológicos implicados en la aparición o progresión de la enfermedad. Un examen histológico proporciona mucha información necesaria para evaluar los efectos de los experimentos realizados y puede revelar degeneración, remodelación de tejidos, infiltración y muchas otras patologías. En la investigación clínica, rara vez hay posibilidades de obtener tejido ocular adecuado para un examen histológico, por lo que los investigadores deben aprovechar la oportunidad que ofrece el examen de los globos oculares de los roedores. Este manuscrito presenta un protocolo para la preparación histológica de secciones de globos oculares de roedores. El procedimiento se presenta para los globos oculares de ratones y ratas y consta de los siguientes pasos: (i) recolección del globo ocular, (ii) preservación del globo ocular para su posterior análisis, (iii) procesamiento del tejido en parafina, (iv) preparación de portaobjetos, (v) tinción con hematoxilina y eosina, (vi) evaluación del tejido bajo un microscopio óptico. Con el método propuesto, la retina puede visualizarse fácilmente y evaluarse en detalle.
Introducción
El globo ocular es una estructura en forma de globo que constituye el órgano de la vista. El interior del globo ocular se puede dividir en dos segmentos: el segmento anterior, que incluye la córnea, el iris, el cuerpo ciliar, el cristalino, la cámara anterior y la cámara posterior, y el segmento posterior, que incluye el cuerpo vítreo, la retina, la coroides, la esclerótica y la cabeza del nervio óptico. La cámara anterior se encuentra entre la córnea y el iris 1,2. El iris es una estructura circular con una abertura en el centro llamada pupila. En la unión de la córnea y el i....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
La investigación se realizó de acuerdo con los lineamientos institucionales. Los globos oculares utilizados en este estudio se obtuvieron de animales incluidos en un experimento realizado sobre la base del número de aprobación del estudio WAW2/122/2020 emitido por el2º Comité de Ética Local de la Universidad de Ciencias de la Vida de Varsovia en Varsovia, Polonia. Nuestro protocolo se desarrolló examinando ratones de 11 y 44 semanas y ratas de 6, 12 y 16 semanas.
1. Preparación de los globos oculares del ratón
NOTA: Este protocolo presenta el método de p....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Con el uso del protocolo presentado, se puede evaluar en detalle la anatomía y morfología de estructuras específicas del globo ocular. Nuestro equipo se centra en investigar los mecanismos patológicos de la neurodegeneración en los trastornos de la retina, como el glaucoma, la retinopatía diabética y la retinopatía hipertensiva. Para evaluar las características de la neurodegeneración en la retina, evaluamos el RT (globo ocular de ratón -Figura 2, globo ocular de rata -F.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Un examen histológico del globo ocular de ratón y rata es una herramienta poderosa en el campo de la oftalmología experimental. Puede proporcionar nueva información relacionada con los cambios en las estructuras oculares en el curso de enfermedades oftálmicas, que de otro modo no se observarían en entornos clínicos. Los protocolos descritos presentan un método sencillo para realizar un análisis histológico de la retina. Las sutilezas del procedimiento necesario para procesar los tejidos .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Agradecimientos
El trabajo, que incluyó ratas, fue financiado como parte del proyecto TIME 2 MUW - excelencia docente como oportunidad para el desarrollo de la Universidad Médica de Varsovia cofinanciado por el Fondo Social Europeo en el marco del Programa Operativo Desarrollo de la Educación del Conocimiento para 2014-2020, el número del acuerdo de cofinanciación: POWR.03.05.00-00-Z040/18-00. El trabajo, que incluyó ratones, se llevó a cabo como parte de un proyecto implementado en los años 2020 a 2022, financiado por una subvención para la ciencia obtenida por la Universidad Médica de Varsovia.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Acetona | Chempur | ||
| Pinzas Dumont #5, 11 cm, 0,05 x 0,01 mm Puntas | World Precision Instruments | 14095 | pequeño, pinza microquirúrgica |
| Eosin | Mar-Four | 4P.05.2001/L | Solución acuosa |
| Alcohol etílico 96 % | Chempur | CH.ET. AL.96%CZDA. | |
| Alcohol etílico 99,9 % | Chempur | Ch. ETYL. ALK.99,9%BW | Úselo para preparar soluciones al 70% y 80% del |
| glaciar EtOH - 86 ° C Congelador de temperatura ultrabaja NU-9483E | NuAire | 13027D0034 | Temperatura de congelación - 80 & grados; C |
| Portaobjetos de cristal | Mar-Four | MI.15.01673 | Portaobjetos de vidrio esmerilado con un campo mate de doble cara para la descripción |
| Leica CV5030 Cubreobjetos de vidrio totalmente automatizados | Leica Biosystems | 14,04,78,80,101 | Sellador de portaobjetos automatizado |
| Hematoxilina de Mayer | Chempur | ||
| Moldes con base metálica 15 mm x 15 mm | Leica Biosystems | ||
| Microme HM 340 E | Thermo Scientific | 90-519-0 | Microtomo |
| Hojas de afeitar Microtomo | Mar-Four | HI. N.35 | Ángulo de corte 35&grados; |
| Casete de biopsia Micro-Twin | Mar-Four | LN.13874550 | |
| Procesador de tejidos híbrido por microondas | Milestone | ||
| Multistainer Leica ST5020 | Leica Biosystems | Tinción de portaobjetos automatizada | |
| Escáner de portaobjetos NanoZoomer 2.0-HT | Hamamatsu | C9600 | Escáner de portaobjetos histopatológico |
| NDP.view2 Software de visualización de imágenes | Hamamatsu | U12388-01 Software de visualización de | imágenes |
| Paraffin Pathowax Plus | Mar-Four | 4P. PWP.010 | Temperatura de fusión 56 &° C - 58 ° C |
| Paraformaldehído | Sigma - Aldrich | 441244-1KG | Prepare una solución al 4% en PBS |
| PBS Tabletas Merck | Millipore | 524650-1EA | Úselo para preparar una solución de solución salina tampón de fosfato, según las instrucciones del fabricante Tubos de |
| microcentrífuga Pierce, 1,5 mL | Thermo Scientific | 69715 | |
| Frigorífico-congelador EN14000AW | Electrolux | 925032562-00 | Refrigeración 4 ° C |
| Hoja de bisturí | Swann-Morton | T.OST. SKAL00.024 | |
| Sacarosa | Chempur | ||
| Tijeras de resorte SuperCut, 12,5 cm, curvo | World Precision Instruments | 501925 | tijeras microquirúrgicas curvas, pequeñas |
| Cinta adhesiva para selladoras automáticas | Mar-Four | KP-3020/SMRH001 | |
| Xylene | Chempur | Ch. KSYL.5l.METAL.OP |
Referencias
- Kels, B. D., Grzybowski, A., Grant-Kels, J. M. Human ocular anatomy. Clin Dermatol. 33 (2), 140-146 (2015).
- Gupta, M. P., Herzlich, A. A., Sauer, T., Chan, C. C. Retinal anatomy and pathology. Dev Ophthalmol. 55, 7-17 (2016).
- Masland, R. H.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
