Este artículo presenta un protocolo detallado para recolectar muestras de cáncer de mama, diseñado para optimizar su utilidad para biobancos, medicina personalizada y otras aplicaciones de investigación. El flujo de trabajo para la recolección de muestras, incluidos los procedimientos de biopsia de mama y mastectomía, se describe en detalle, centrándose en minimizar el daño tisular y maximizar la calidad de la muestra.
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Artículo de método
Optimización de los procedimientos de recolección de muestras de biopsia de mama y mastectomía para biobancos, medicina personalizada y aplicaciones de investigación
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Resumen
Resumen
El cáncer de mama es el cáncer más prevalente que afecta a las mujeres, particularmente en Asia, con la mayor incidencia en Filipinas. A pesar de los esfuerzos en curso, la comprensión de la biología del cáncer de mama sigue siendo inadecuada, agravada por la falta de programas de detección efectivos y tratamientos oportunos. Al abordar estos problemas, los biobancos y otros repositorios de especímenes biológicos han cobrado impulso global. La Universidad de Filipinas-Hospital General de Filipinas (UP-PGH) ha establecido un biobanco de cáncer, lo que demuestra la viabilidad de una iniciativa apoyada por el gobierno para la investigación del cáncer en Filipinas. El estudio implica una observación prospectiva de 100 pacientes filipinas con cáncer de mama en diversas etapas de la enfermedad, aprovechando la experiencia de UP-PGH, el Centro del Genoma de Filipinas (PGC) y el Instituto de Biología Diliman de la Universidad de Filipinas (UPD-IB). Integra la recolección, el procesamiento y el almacenamiento de muestras biológicas junto con datos completos de pacientes. Los procedimientos incluyen extracción de ARN, preparación de bibliotecas y secuenciación. Además, un subconjunto de pacientes participa en un experimento de cultivo celular tridimensional (3D) in vitro para la preselección de quimioterapia. Los datos agregados tienen como objetivo descubrir estrategias terapéuticas que pueden conducir a tratamientos personalizados donde los enfoques clínicos estándar son inadecuados. Las técnicas clave incluyen biopsia con aguja gruesa guiada por ultrasonido, recolección meticulosa de tejido mamario normal y determinación precisa del porcentaje tumoral para garantizar la extracción de ARN, la secuenciación y el cultivo celular 3D de alta calidad. El estudio también aborda los desafíos encontrados en esfuerzos anteriores de biobancos. En última instancia, esta investigación tiene como objetivo contribuir significativamente a la investigación del cáncer de mama, posicionándose como un modelo para la investigación colaborativa, el establecimiento de biobancos y el avance de la medicina de precisión en países en desarrollo, como Filipinas.
Introducción
El cáncer de mama es la forma más prevalente de cáncer entre las mujeres filipinas. En Asia, Filipinas presenta una de las tasas más altas de mortalidad por cáncer de mama y la relación mortalidad-incidenciamás baja 1. Las tasas pueden haberse visto muy afectadas por la ausencia de programas de detección y tratamiento oportuno y eficaz para el cáncer de mama. En el país, el cáncer de mama generalmente se diagnostica en etapas posteriores, ya que la mayoría de los pacientes con cáncer solo buscan consulta en etapas avanzadas del cáncer. En Filipinas, donde se observa una alta tasa de incidencia de cáncer de mama, el 53% de los casos de cáncer de mama se diagnosticaron en las etapas III y IV, y solo el 2-3% se diagnosticaron en la etapaI 1,2,3. Además de promover la aceptación de la detección y la educación del paciente sobre el cáncer de mama, la investigación y el desarrollo relacionados con el cáncer de mama deben explorarse más a fondo para disminuir la incidencia del cáncer de mama en el país.
El establecimiento de biobancos en todo el mundo permitió acelerar los avances médicos. Los biobancos se utilizan para el almacenamiento y la conservación de especímenes biológicos científicamente valiosos para futuras investigacionesy desarrollos. Desde entonces, los biobancos se han utilizado para la investigación traslacional5 y la mejora de los enfoques médicos personalizados6. En Asia, los biobancos se concentran principalmente en Asia oriental, especialmente en China, Japón y Corea4. En los países de ingresos bajos y medianos de Asia, como Filipinas, el concepto de biobanco aún está emergiendo. Los biobancos en Filipinas son propiedad en su mayoría de instituciones de atención médica privadas, donde el estado de salud y exposición de la demografía filipina en general puede no estar bien representado.
El establecimiento del biobanco de cáncer en el Hospital General de Filipinas (PGH) de la Universidad de Filipinas en Manila (UPM) ha demostrado la viabilidad de establecer un biobanco de cáncer apoyado por el gobierno que pueda avanzar en los estudios relacionados con el cáncer en Filipinas7. Sobre la base de esta base a través de un esfuerzo de colaboración que une la experiencia médica, la innovación en la investigación y la política de atención médica, nos esforzamos por crear un cambio positivo en el panorama de la atención y la investigación del cáncer de mama en Filipinas. Con eso, existe una necesidad imperativa de tener un flujo de trabajo de biobanco de fenomas de cáncer y un enfoque ampliado que agilice la recopilación de datos extensos y estratificados específicos de pacientes a escala nacional. Este estudio describe el protocolo para los procedimientos de recolección de muestras de biopsia de mama y mastectomía, centrándose en su integración en el marco de los biobancos. Anticipando no solo avanzar en nuestra comprensión de la patogénesis del cáncer de mama dentro del contexto de la población filipina, sino también facilitar el desarrollo de tratamientos de precisión que se alineen con los atributos genéticos, ambientales y clínicos únicos de las personas afectadas.
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Protocolo
Este es un estudio prospectivo y observacional con una colección de muestras biológicas no identificadas (tumor y tejido mamario normal) y datos clinicopatológicos, de tratamiento y de resultados de 100 pacientes filipinas con cáncer de mama en varios estadios. Este es un trabajo colaborativo entre el Hospital General de Filipinas (PGH), el Centro del Genoma de Filipinas (PGC) y el Instituto de Biología (IB) de la Universidad de Filipinas Diliman, cada uno con tareas designadas. El protocolo fue registrado en la Oficina de Administración de Subvenciones de Investigación (RGAO-2020-0933) y revisado y aprobado por la Junta de Ética de Investigación de la Universidad de Filipinas en Manila (UPMREB) para su implementación con el número de autorización ética UPMREB 2020-822-01. Todos los laboratorios utilizados se adhieren a las directrices de bioseguridad de cada institución. El reclutamiento de pacientes de PGH aseguró la varianza y la representación en términos de factores clinicopatológicos, etnia y exposiciones ambientales. Se utilizó un procedimiento operativo estándar (SOP) desarrollado y validado en proyectos anteriores como marco para la adquisición, recolección, transporte y otros arreglos logísticos relacionados con las muestras.
NOTA: Consulte la Figura 1 - Flujo de trabajo diagramático del protocolo para obtener un resumen del flujo de trabajo del protocolo y los roles de cada institución involucrada en el estudio.
1. Procedimiento de recolección de muestras antes de la mama
- Identificar y evaluar a los pacientes elegibles para su inclusión en el estudio durante una consulta clínica o una conferencia preoperatoria.
- Criterios de inclusión para pacientes oncológicos
- Incluyen mujeres filipinas, de 19 a 75 años diagnosticadas con cáncer de mama en etapa 1, 2 y 3, y mujeres filipinas de 19 a 70 años diagnosticadas con cáncer de mama en etapa 3B y 4.
- Incluir casos clínicamente sospechosos o diagnosticados patológicamente de cáncer de mama invasivo de cualquier etapa.
- Incluya pacientes que se someterán a tratamiento quirúrgico (mastectomía radical modificada o mastectomía radical) ya sea por adelantado (estadio clínico I o II) o quimioterapia posneoadyuvante (estadio IIIB, IIIC). Los pacientes en etapa IIIA pueden someterse a cirugía inicial o terapia neoadyuvante según las recomendaciones del médico. Para pacientes en estadio IV, aquellos dispuestos a someterse a una biopsia con aguja gruesa del tumor de mama y el tejido normal adyacente. Las pacientes con cáncer de mama en etapa IV no se someterán a tratamiento quirúrgico.
- Incluya pacientes con cáncer de mama en etapa III que se hayan sometido a terapia neoadyuvante antes del reclutamiento, y haya un registro completo de respuesta al tratamiento médico y clínico.
- Incluya pacientes que puedan comprender y firmar el consentimiento informado.
- Criterios de exclusión para pacientes con cáncer
- Excluir a los pacientes que tienen neoplasias malignas previas o concurrentes, incluido el diagnóstico previo de cáncer de mama.
- Excluir pacientes con cáncer de mama bilateral.
- Excluir a los pacientes que se sometieron previamente a radioterapia neoadyuvante o terapia hormonal.
- Excluir a los pacientes que se sometieron a una biopsia central o incisional previa cuando no haya consentimiento para repetir el procedimiento de biopsia para aquellos pacientes que se someterán a quimioterapia neoadyuvante (ya que no se puede obtener una muestra tumoral fresca previa a la quimioterapia)
- Excluir a los pacientes que se sometieron a biopsia por escisión previa sin tumor residual.
- Excluir a los pacientes con comorbilidades que impidan el tratamiento quirúrgico o la quimioterapia neoadyuvante.
- Criterios de retiro
- Informe a los participantes que pueden retirarse en cualquier momento por motivos de seguridad u otras preocupaciones sin afectar su atención médica. Este estudio no intervencionista no afectará la elección del tratamiento para los participantes.
- Criterios de inclusión para pacientes oncológicos
- Obtenga el consentimiento del paciente y complete el formulario de recopilación de datos.
NOTA: El becario a cargo (FIC) asignado o el consultor, junto con el investigador asociado universitario (URA), obtiene el consentimiento. - Obtenga y verifique el cronograma del paciente para el procedimiento de biopsia con aguja gruesa después de confirmar su participación en el estudio.
- Realizar procedimientos de conformidad con los lineamientos establecidos y aprobados por el Comité del Consejo de Ética y el Comité de Bioseguridad de la institución.
2. Procedimiento de recolección de muestras de biopsia de mama
NOTA: Consulte la Figura 2 para ver el flujo de trabajo detallado del procedimiento de biopsia de mama con aguja gruesa para pacientes en estadios III y IV, que muestra la distribución de muestras para cada procedimiento.
- Preetiquete los tubos antes de la recolección de muestras como GB, es decir, Genómica - Mama (el estudio al que se encuentra la muestra), xxx, que es el número de participante y puede variar de 001 a 100, o más, y las letras A, C y D. Los siguientes son los códigos de letras que se utilizarán para etiquetar los tubos:
A - significa biopsia con aguja gruesa, tejido tumoral, para enviar a PGC
C - significa biopsia con aguja gruesa, tejido tumoral, para biobanco
D - significa biopsia con aguja gruesa, tejido normal- Asigne las muestras enviadas para secuenciación con la etiqueta del laboratorio: "BC" y dos números de muestra de dos dígitos (por ejemplo, BC01, BC21). Cada muestra tiene un código "GB" correspondiente que se correlaciona con el código asignado durante la recolección de muestras.
- Obtenga hasta nueve núcleos de tejido con una pistola de biopsia con aguja gruesa de 14 G bajo guía de ultrasonido, en una clínica ambulatoria, quirófano u otro entorno aséptico.
- Para cada núcleo, obtenga una muestra de mama de aproximadamente 2 cm de longitud en el centro del tumor y a 1 cm del tumor para el tejido normal adyacente. Recolecte dos tipos de muestras de cada participante: tejido tumoral y tejido normal.
- Entregue cada muestra a la URA para colocarla en una placa de Petri que contenga solución salina tamponada con fosfato (PBS).
NOTA: En este estudio, las biopsias con aguja gruesa se realizaron solo en pacientes con cáncer de mama en estadio III y IV. Para los pacientes en estadio III, las biopsias con aguja gruesa proporcionaron muestras tumorales sin quimioterapia. Para las pacientes en estadio IV, las biopsias con aguja gruesa sirvieron como muestra del tumor primario, ya que no se realizó una mastectomía. Para pacientes con cáncer de mama en estadio I y II, no se realizaron biopsias con aguja gruesa. En cambio, el tumor y los tejidos normales adyacentes se obtuvieron de muestras de mastectomía.
- Corte las muestras de biopsia por la mitad para distribuirlas uniformemente entre el estudio y el análisis histopatológico.
- Para el tejido tumoral, obtenga hasta 9 núcleos por paciente del estudio con una aguja de 14-G.
- Separar los núcleos tumorales obtenidos en 2 grupos en la placa de Petri: muestras para análisis de ARN (6 núcleos) y muestras para biobanco (3 núcleos).
- Corta cada núcleo en 2 a lo largo, pero en los casos en que sea difícil hacerlo, corta los núcleos en 2 transversalmente. Use una cuchilla estéril para cortar los núcleos. Envíe la mitad del núcleo de tejido para análisis de ARN o guárdelo para biobancos. Envíe la otra mitad del núcleo del tejido a Patología para un análisis histopatológico de rutina.
- Para tejido normal, obtenga hasta 3 núcleos por paciente del estudio con una aguja de 14 G. Use una aguja diferente a la que se usa para obtener tejidos tumorales para evitar la contaminación. En los casos en que esto no sea posible, obtenga primero tejidos mamarios normales antes de obtener tejidos tumorales.
- Coloque cada tejido normal obtenido en una placa de Petri similar a lo que se hizo con los tejidos tumorales y corte los núcleos por la mitad. Distribuir las muestras para el estudio y al Departamento de Anatomía Patológica para el análisis histopatológico.
- Después de la recolección de muestras, distribuya las muestras entre los tubos, siguiendo una forma y orden de prioridad.
- Coloque la mitad de los núcleos en el criovial designado de 2 ml precargado con 1,25 ml de solución de estabilización de ARN (todos los núcleos para el análisis de ARN colocados juntos en 1 vial y todos los núcleos para biobancos en un vial separado, mantenga las muestras a temperatura fría en todo momento) y coloque las mitades correspondientes de estos núcleos en viales/tubos de muestras ordinarios y fíjelos con formalina tamponada neutra al 10% (10% NBF), para análisis histopatológico. Asegúrese de que los dos medios grupos correspondientes, el que va al centro designado (por ejemplo, muestras enviadas para análisis de ARN) y la muestra de patología correspondiente tengan el mismo código de muestra.
- Completar los formularios de patología quirúrgica. Junto con los formularios, envíe las muestras de patología fijadas con formol a Patología para histopatología de rutina.
- Selle con parafilm las muestras de biopsia con aguja gruesa empapadas en tubos que contengan solución de estabilización de ARN (idealmente una proporción de 5:1 de solución a tejido, por lo que si es tejido de 0,25 cm, 1,25 ml de solución de estabilización de ARN).
- Almacene las muestras a 4 °C durante 24 h y, finalmente, transfiéralas al congelador ultra bajo, con una temperatura de -80 °C.
NOTA: En la Sección 4 (Almacenamiento, embalaje y transporte de especímenes) se examinará una guía sobre el almacenamiento.
3. Procedimiento de recolección de muestras de mastectomía mamaria
- Siga el procedimiento de recolección de muestras antes de la mama en la Sección 1.
NOTA: Las pacientes en etapa I, II y III inscritas en el estudio se someterán a una mastectomía en el quirófano. Para las pacientes en etapa I y II, la mastectomía se realizará por adelantado, mientras que para las pacientes en etapa III, la mastectomía solo se realizará al completar 8 ciclos de terapia neoadyuvante. Para la etapa 4, no se recolectan muestras de mastectomía. Consulte la Figura 3 para ver el protocolo detallado de recolección de muestras de mastectomía mamaria que muestra la distribución de muestras por procedimiento. - Coordinar el cronograma con los colaboradores y el departamento de Patología. Haga esto al menos 2 días antes de la fecha prevista del procedimiento. En caso de cambios en el horario establecido, informe al personal correspondiente de inmediato para evitar conflictos en el horario.
- Etiquete previamente los tubos antes de la recolección de muestras como GB, que significa Genomics Breast (el estudio al que se encuentra el espécimen), xxx, que es el número de participante y puede variar de 001 a 100, o más, y las letras E y F. Los siguientes son los códigos de letras que se utilizarán para etiquetar los tubos:
E - significa mastectomía, tejido tumoral, para enviar a PGC, IB y para biobancos
F - significa mastectomía, tejido normal- Asigne las muestras enviadas para secuenciación con la etiqueta del laboratorio: "BC" y el número de muestra de dos dígitos (por ejemplo, BC01, BC21). Cada muestra tiene un código "GB" correspondiente que se correlaciona con el código asignado durante la recolección de muestras.
- Llene los formularios de patología quirúrgica durante la cirugía, mientras espera la muestra. Envíe actualizaciones al patólogo a cargo para que haga los preparativos necesarios para la recolección de muestras.
- Coloque la muestra en una bolsa de plástico/muestra limpia inmediatamente después de la extracción y documentación de la muestra mamaria. Asegúrese de que la muestra de mastectomía se lleve inmediatamente al departamento de patología para su macroscopía y minimizar el tiempo de isquemia fría. No coloque la muestra en formol al momento de la presentación.
NOTA: Las fotos de acción de muestra durante la mastectomía se muestran en la Figura 4 (Imágenes representativas de la recolección de muestras durante el procedimiento de mastectomía). - Obtenga dos tipos de muestras de cada muestra al macroscopio: tejido tumoral y tejido normal.
- Tejido tumoral
- Obtenga un mínimo de un bloque (preferiblemente más) que mida 1 cm × 1 cm × 1 cm de tejido tumoral por muestra.
- Corta el bloque de tejido obtenido en dos partes, cada medio bloque mide 1 cm × 0,5 cm × 0,5 cm. Entregue la mitad del bloque de tejido a la URA para biobanco y análisis, y luego fije la otra mitad en formol para histopatología de rutina.
- Trisecte uniformemente el medio bloque de tejido fresco. Esto estará destinado a la secuenciación de ARN, biobancos y cultivo de organoides.
- Para la secuenciación de ARN: Colocar inmediatamente en crioviales de 5 ml preenfriados y marcados, precargados con una solución de estabilización de ARN de 2,5 ml (no más de 30 min, debe mantenerse fría en todo momento).
- Para biobancos: Coloque inmediatamente en crioviales de 5 ml preenfriados, premarcados y precargados con una solución de estabilización de ARN de 2,5 ml (no más de 30 min, debe mantenerse fría en todo momento).
- Para cultivo de organoides: Colocar inmediatamente en viales cónicos de 15 ml preenfriados, premarcados y precargados con 5 ml de solución de almacenamiento de tejido y 0,01 ml de primocina (no más de 30 min, debe mantenerse frío en todo momento). Agrupe en un tubo cónico un tercio de todos los bloques tumorales obtenidos de diferentes secciones de la muestra.
- Tejido normal
- Obtenga un mínimo de un bloque (preferiblemente más) que mida 1 cm × 1 cm × 1 cm de tejido mamario normal por muestra.
- Corta el bloque de tejido obtenido en dos partes, cada medio bloque mide 1 cm × 1 cm × 0,5 cm. Entregue la mitad del bloque de tejido a la URA para biobanco y análisis, y luego fije la otra mitad en formol para histopatología de rutina.
- Corta el bloque de tejido en dos por igual para el estudio. Estos estarán destinados a la secuenciación de ARN y biobancos.
- Para la secuenciación de ARN: Colocar inmediatamente en crioviales de 5 ml preenfriados y marcados, precargados con crioviales de 2,5 ml con solución de estabilización de ARN (no exceder los 30 min, mantener a temperatura fría en todo momento).
- Para biobancos, colóquelo inmediatamente en crioviales de 2,5 ml preenfriados, premarcados y precargados con solución de estabilización de ARN (no más de 30 min, manténgalos a temperatura fría en todo momento).
NOTA: Las muestras tumorales etiquetadas como "E" generalmente se obtienen de tres o más secciones diferentes del espécimen. Para evitar confusiones, las muestras de tumores destinadas al análisis de ARN y al biobanco deben colocarse en tubos separados etiquetados como E1, E2, E3, etc., mientras que las muestras tumorales agrupadas destinadas al cultivo celular deben colocarse en tubos etiquetados simplemente como E. Para las muestras etiquetadas como E1, E2 y E3, se debe registrar la posición o ubicación relativa de cada muestra de tejido con respecto al tumor (por ejemplo, centro, posición de las 10 en punto).
- Tejido tumoral
- Sellar con parafilm los crioviales que contienen las muestras obtenidas de la mastectomía.
- Almacene los crioviales a 4 °C durante 24 h y, finalmente, transfiéralos al congelador ultra bajo, con una temperatura de -80 °C para su almacenamiento a largo plazo.
- Empaque el tubo cónico que contiene los bloques tumorales agrupados y prepárelo para el transporte. Estos bloques tumorales se utilizarán para el cultivo celular en organoides.
4. Almacenamiento, embalaje y transporte de muestras
- Sellar inmediatamente con parafilm todos los crioviales que contengan el tumor y los tejidos normales y almacenarlos a 4 °C durante 24 h. Después de 24 h, transfiera los tubos a -20 °C durante unas 2-4 h y luego transfiéralos a -80 °C indefinidamente, para su almacenamiento a largo plazo hasta el transporte.
- Actualice el rastreador de muestras y la base de datos antes del transporte de muestras para el análisis de ARN, incluidos los resultados de la histopatología de rutina y los porcentajes tumorales, para garantizar la identidad de la muestra.
- Realice un manifiesto de transporte para cada muestra, antes del transporte. Asegúrese de que el proceso de envasado sea rápido y que los tubos que contienen las muestras no se dejen a temperatura ambiente (RT) durante un período prolongado.
- Selle todas las tapas crioviales con parafilm para evitar fugas.
- Coloque todos los tubos en una gradilla para tubos de ensayo.
- Coloque el registrador de temperatura y colóquelo sobre la rejilla junto a los tubos para su transporte.
- Envuelva los tubos con material absorbente, luego con plástico de burbujas y coloque los artículos dentro de la bolsa resellable. Asegúrese de que el registrador de temperatura esté registrando la temperatura y que los tubos estén intactos y colocados en posición vertical antes de sellar los artículos dentro de la bolsa.
- Coloque los paquetes de gel en el fondo de la caja de envío de poliestireno, luego coloque la bolsa resellable que contiene los tubos encima de los paquetes de gel. Coloque otra capa de paquetes de gel encima de la bolsa. Asegúrese de que los tubos estén intercalados entre paquetes de gel para garantizar que las muestras se mantengan frías durante el transporte.
- Cierra la caja de poliestireno y colócala dentro de una caja de envío de cartón. Si no hay una caja de cartón grande disponible, use una caja de poliestireno más grande. Coloque el manifiesto de transporte completo dentro de una bolsa con cierre hermético y colóquelo dentro de la caja. La ubicación de los artículos dentro de la caja se muestra en la Figura 5.
- Selle la caja de cartón y coloque la etiqueta de envío adecuada fuera de la caja.
- Informe al destinatario del cronograma de recolección de muestras y cuándo será el envío de muestras objetivo.
- Para el cultivo de organoides, solo se envían y utilizan tejidos tumorales derivados de mastectomías. Asegúrese de que se entreguen frescos, en hielo húmedo y dentro de las 24 horas posteriores a la recolección de muestras. Una vez que las muestras estén empaquetadas y la caja sellada, reserve rápidamente un servicio de mensajería para transportarlas. Asegúrese de que las cajas no se dejarán en áreas de alta temperatura durante períodos prolongados, ya que una caída o aumento severo de temperatura puede comprometer la viabilidad de las muestras.
- Antes de entregarlo al servicio de mensajería, tome nota de la cantidad de viales/tubos enviados y la hora en que el mensajero salió del Biobanco. A la llegada del paquete, asegúrese de que el destinatario tome nota de lo siguiente: Hora de llegada y recepción en el centro designado, temperatura a la llegada, número de viales/tubos recibidos y cualquier muestra comprometida
- Para el análisis de ARN, verifique si las muestras que se entregarán tienen un resultado histopatológico correspondiente y porcentajes de tumores de la División de Patología Quirúrgica, antes de enviar muestras para análisis de ARN. Identificar y seleccionar el bloque de tejido con el mayor contenido tumoral para cada paciente que se someterá a la extracción de ARN. Transporte muestras solo aquellas con porcentajes tumorales.
- Envíe las muestras en grupos de no más de 40 para facilitar el procesamiento por lotes. Elija cualquier combinación de tejido tumoral de biopsia con aguja gruesa o mastectomía y tejido normal de mastectomía. Revise las siguientes condiciones si se va a transportar tejido normal de la biopsia con aguja gruesa:
-Inscrito en la Etapa 3, pero el resultado histopatológico muestra la Etapa 4
-Inscrito en el estadio 3, pero el resultado histopatológico muestra una progresión locorregional de la enfermedad. - Asegúrese de que todas las muestras se transporten sobre hielo húmedo. De manera similar al protocolo que se sigue al enviar muestras para cultivo celular 3D, una vez que las muestras están empaquetadas y la caja sellada, reserve de inmediato un servicio de mensajería para el transporte. Evite dejar las cajas en áreas de alta temperatura durante períodos prolongados, ya que las fluctuaciones significativas de temperatura pueden comprometer la viabilidad de las muestras.
- Antes de entregarlo al servicio de mensajería, tome nota de la cantidad de viales/tubos enviados y la hora en que el mensajero salió del Biobanco. Tenga en cuenta lo siguiente a la llegada del paquete: hora de llegada y recepción en el centro designado, temperatura a la llegada, número de viales/tubos recibidos y cualquier muestra comprometida (si la hay).
- Actualice la base de datos de muestras enviadas e ingrese toda la información necesaria antes del procesamiento posterior de las muestras. Supervise y evalúe la base de datos una vez a la semana.
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Resultados
Para la recolección de muestras durante la biopsia con aguja gruesa, realizar el procedimiento bajo guía de ultrasonido tuvo un gran impacto en la comodidad del paciente y la eficiencia del flujo de trabajo, así como en la integridad del ARN de las muestras. Si esto no se hace, es posible que no se obtengan los resultados esperados y los pacientes deben regresar a las clínicas para repetir el procedimiento, lo que prolonga la recolección y el procesamiento de la muestra.
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Discusión
La implementación exitosa de este protocolo se basa no solo en la precisión técnica, sino también en la coordinación de los equipos clínicos y de investigación para garantizar una calidad constante de las muestras y la integridad de los datos. Este protocolo incorpora varios procedimientos clave diseñados para maximizar la precisión del diagnóstico y generar muestras biológicas de alta calidad adecuadas para análisis moleculares posteriores. Los pasos clave incluyen la biopsia con aguja ...
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Divulgaciones
Los autores no tienen ningún conflicto de intereses, ya sea financiero, personal o institucional, que revelar.
Agradecimientos
Esta investigación está financiada por el Departamento de Ciencia y Tecnología del Consejo Filipino de Investigación y Desarrollo en Salud (DOST-PCHRD) y se lleva a cabo en colaboración con el Centro del Genoma de Filipinas (PGC) y el Instituto de Biología Diliman de la Universidad de Filipinas (UPD-IB). Los autores también desean agradecer al Sr. Lech Havel Tizon, al Sr. Conrad Chong y a la Sra. Susan Valibia por su ayuda en la optimización de este protocolo, así como a los residentes de patología que contribuyeron a la filmación de este protocolo, la Dra. Clarisse Veronica Mirhan y la Dra. Patricia Franco.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución de formol al 37% | PHILUSA Corporation | N/A | Utilizado como conservante de tejidos para análisis histopatológicos |
| Alcohol isopropílico al 70% | Green Cross Inc. | N/A | Usado como desinfectante |
| Impresora de códigos de barras | Zebra | GC420t | Para la impresión de etiquetas de código de barras que se usarán en tubos de etiquetado que contienen las muestras |
| Lejía | Green Cross Inc. | N/A | Usado como desinfectante; para la descontaminación de herramientas quirúrgicas |
| Bolsas de hielo azules | Rubbermaid | 1002 | Para mantener muestras a bajas temperaturas durante el transporte |
| Biopsia de aguja de núcleo 14-G | Bardo | MN1410 | Un instrumento quirúrgico tubular invasivo diseñado para conectarse a una pistola de biopsia para la extracción automática de una pequeña muestra de tejido de una estructura anatómica (una biopsia), causando un daño mínimo en el tejido circundante, para examen o análisis patológico tisular. |
| Pistola de biopsia mamaria con aguja del núcleo | Bardo | MG1522 | Instrumento reutilizable de biopsia de núcleo utilizado para recoger muestras de tejido durante la biopsia con aguja de núcleo |
| Placa de Petri desechable 90 mm x 15 mm | Productos Biomédicos Phoenix | MUCHO: 20220206 | Utilizado en la recogida de muestras de biopsia con aguja de núcleo al sumergir tejidos en PBS |
| Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (PBS) | Thermo Fisher Scientific | 21600010 | Una solución salina balanceada utilizada para diversas aplicaciones de cultivo celular, como lavar células antes de disociarlas, transportar células o tejidos, diluir células para contar y preparar reactivos. |
| Pinzas | Proveedor local | N/A | |
| Kimtech Science Kimwipes Limpiaparabrisas delicadas para tareas | Kimberly Clark Profesional | KC34120 | 4,3 x 8,4 pulgadas. (11,0 cm x 21,3 cm); 1 capa de 280 Contes; Para limpiar superficies, piezas, instrumentos y consultorios médicos, estas toallitas limpian fácilmente líquidos, polvo y partículas pequeñas. |
| Solución de almacenamiento de tejido MACS | Miltenyi Biotec | 130-100-008 | Solución de almacenamiento utilizada para permitir un almacenamiento optimizado de muestras frescas de órganos y tejidos |
| Micropipeta | Tecnología de Instrumentos de Líquenes de Shanghái Co., Ltd. | STEM-GC-3197-Y | para pipetear/transferir líquidos en pequeños volúmenes |
| Puntas de micropipeta | Tarsons | 521100 | para pipetear/transferir líquidos en pequeños volúmenes |
| Parafilm | Parafilm M | 5259-04LC PM996 | Para sellar los tubos herméticos y a prueba de humedad para evitar fugas |
| Primocin 250 mg (5 x 1 mL) | InvivoGen | ANT-PM-05 | Se utiliza para proteger los tejidos de la contaminación microbiana |
| Frigorífico (4 y grados; C) | LG | Modelo: GR-Y331SLZB | Para el almacenamiento de muestras de tejido y reactivos |
| Solución ARNlater | Thermo Fisher Scientific | AM7021 | Solución de estabilización de ARN utilizada en el almacenamiento y biobanco de tejidos |
| Tubo cónico estéril de 15 mL y nbsp; | Termo Científica | 339650 | Se utiliza para hacer alicotas de reactivos/medios usados en el almacenamiento de tejidos |
| Crioviales estériles de 5 mL | Termo Científica | 5000-1020 | Se utiliza para hacer alicotas de reactivos/medios usados en el almacenamiento de tejidos |
| Bisturí estéril (#11) | Surgitech | N/A | Para tumores cortantes y tejidos mamarios normales |
| Tijeras quirúrgicas (18,5 cm 7 & frac14; " str) | Olten Instruments | BO-0125 | Para tumores cortantes y tejidos mamarios normales |
| Registrador de temperatura | Extech Instruments | 42280 | Para registrar la temperatura y la humedad durante el transporte de muestras |
| Tinta de tejido | Epredia | 3120123 | Para teñir los márgenes de muestras quirúrgicas extirpadas para análisis histopatológico |
| Congelador ultrabajo | Haier Biomedical | DW-86L579 | Para almacenamiento indefinido de tumores y tejidos mamarios normales |
| Recipiente de muestra de orina 60mL | Seguro Guardia | 0016UCS06PC | Para almacenamiento de tejidos para análisis histopatológicos |
| Bolsas ziplock | Reynolds Consumer Products LLC | Utilizado para empaquetar las muestras para su transporte |
Referencias
- Wu, T., Lee, J. Promoting breast cancer awareness and screening practices for early detection in low-resource settings. Eur J Breast Health. 15 (1), 18-25 (2018).
- De Leon Matsuda, M. L., et al. BRCA1 and BRCA2 mutations among breast cancer patients from the Philippines. Int J Cancer. 98 (4), 596-603 (2002).
- Ngelangel, C. A., Wang, E. H. M. Cancer and the Philippine Cancer Control Program. Jpn. J Clin Oncol. 32 Suppl, S52-S61 (2002).
- Lee, S., Jung, P. E., Lee, Y. Publicly-funded biobanks and networks in East Asia. SpringerPlus. 5 (1), 1080(2016).
- Murtagh, M. J., Demir, I., Harris, J. R., Burton, P. R. Realizing the promise of population biobanks: a new model for translation. Hum Genet. 130, 333-345 (2011).
- Coppola, L., et al. Biobanking in health care: evolution and future directions. J Transl Med. 17 (1), 172(2019).
- Sajo, M. E. J. V., et al. A pilot cancer-phenome biobanking system in a low-resource Southeast Asian setting: The Philippine general hospital biobank experience. Biopreserv Biobank. 18 (3), 180-188 (2020).
- Considerations for RNA Seq Read Length and Coverage. , Illumina Knowledge. https://knowledge.illumina.com/library-preparation/rna-library-prep/library-preparation-rna-library-prep-reference_material-list/000001243 (2024).
- Evidence-based clinical practice guidelines for early breast cancer. Phil J Surg Specialties. 68 (2), 41-74 (2013).
- Al-Ismaeel, A. H., Nugud, A., Nugud, A., Nugud, S. Ultrasonography-guided core needle biopsy diagnostic value in breast lump assessment: An experience from the Middle East. J Diagn Med Sonogr. 37 (1), 5-11 (2021).
- Poontananggoon, S. Accuracy of ultrasound-guided core-needle biopsy on non-palpable breast masses. Srinagarind Med J. 35 (2), 125-128 (2020).
- Finak, G., et al. Gene expression signatures of morphologically normal breast tissue identify basal-like tumors. Breast Cancer Res. 8 (5), R58(2006).
- Johnson, K. C., et al. Normal breast tissue DNA methylation differences at regulatory elements are associated with the cancer risk factor age. Breast Cancer Res. 19 (1), 81(2017).
- Smits, A., et al. The estimation of tumor cell percentage for molecular testing by pathologists is not accurate. Mod Pathol. 27, 168-174 (2014).
- Busheri, L., et al. Breast cancer biobank from a single institutional cohort in an urban setting in India: Tumor characteristics and survival outcomes. Cancer Treat Res Commun. 28, 100409(2021).
- Pekar, G., et al. Biobanking multifocal breast carcinomas: sample adequacy with regard to histology and DNA content. Histopathology. 68, 411-421 (2016).
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