Artículo de método

Validación de la conjugación de agentes terapéuticos para dispositivos médicos recubiertos de alcohol polivinílico

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DOI:

10.3791/67358

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29 de noviembre de 2024

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1Department of Surgery, LSU Health Shreveport, 2Department of Molecular and Cellular Physiology, LSU Health Shreveport

En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para derivatizar dispositivos médicos con terapias proteicas mediante la conjugación de terapias proteicas a una membrana de alcohol polivinílico fundida en dispositivos médicos. La conjugación de terapias basadas en proteínas permite la administración localizada y concentrada y es un enfoque rentable que requiere cantidades de fármaco mucho más bajas para la dosificación, al tiempo que minimiza los efectos fuera del objetivo.

Resumen

Las terapias basadas en proteínas a menudo están limitadas por su vía de administración y la incapacidad de confinarlas a su sitio de acción. Un enfoque innovador que hemos desarrollado es la unión covalente de proteínas terapéuticas a dispositivos médicos, lo que permite una administración más localizada y altamente concentrada de estos agentes en su sitio de acción previsto. Este estudio tiene como objetivo evaluar si el péptido similar al glucagón-2 (GLP-2) puede unirse covalentemente a los dispositivos de manguito de expansión vaginal (VES) y manguito de expansión intestinal (IES) en cantidades clínicamente relevantes y medibles.

Los manguitos de expansión se recubrieron con alcohol polivinílico (PVA) y se reticularon con glutaraldehído/vapor de ácido sulfúrico para crear una superficie químicamente activa capaz de unirse a terapias que contienen aminas como el GLP-2. Se creó una curva estándar uniendo 250 μg, 100 μg, 50 μg, 25 μg y 0 μg de GLP-2 a pocillos recubiertos de PVA de una placa de 24 pocillos. Se creó un estándar ELISA utilizando un anticuerpo anti-GLP-2 de conejo seguido de un anticuerpo secundario de fosfatasa alcalina IgG anticonejo de cabra más un sustrato de micropocillo azul de fosfatasa alcalina. La colorimetría (de amarillo a azul a 620 nm) fue proporcional a la concentración de anticuerpos unidos a GLP-2, lo que permitió calcular la concentración unida de GLP-2 en los manguitos recubiertos de PVA. La adición de 50 μg de GLP-2 a los dispositivos IES/VES unió un promedio de 22,69 ± 9,32 μg/cm2 de GLP-2 con un área de superficie externa IES/VES (9,425cm2), lo que indica que el 44% de GLP-2 agregado se inmovilizó en los manguitos IES/VES recubiertos de PVA.

La dosis actual de GLP-2 humano es de 50 μg/Kg. Debido a que cada funda contiene 22 μg, esto es aproximadamente el 44% de una dosis sistémica en un solo dispositivo. Esta metodología permite añadir dosis drásticamente más bajas de agentes terapéuticos para obtener el mismo efecto que la administración sistémica del fármaco GLP-2 y evitar los efectos sistémicos.

Introducción

Las terapias basadas en proteínas, como las enzimas, los anticuerpos, las citocinas, las hormonas y los factores de crecimiento, han demostrado ser muy eficaces en el tratamiento devarias enfermedades. Si mejoramos nuestra comprensión de cómo proporcionar estos agentes terapéuticos, podríamos avanzar significativamente en la biotecnología para la aplicación de estas sustancias como medicamentos/tratamientos médicos1. La eficacia de las terapias proteicas está limitada por su biodistribución, su coste y sus efectos fuera del objetivo. Se han intentado varios enfoques para mejorar la farmacocinética y la farmacodinámica de la terapéutica de proteínas, incluyendo la pegilación, la glicosilación, la lipidación y la fusión de otras proteínas2. La "focalización" es otra preocupación porque la mayoría de las terapias proteicas actuales tienen múltiples sitios de acción, lo que resulta en efectos fuera del objetivo. Específicamente, la dirección de estos fármacos a los sitios deseados podría reducir la dosis terapéutica requerida y reducir los efectos secundarios2. Si se pudiera restringir la administración del fármaco al lugar de acción previsto, podría ser posible mejorar radicalmente el tratamiento y, al mismo tiempo, limitar los efectos secundarios indeseables de estos fármacos.

En la actualidad se están utilizando múltiples dispositivos médicos que contienen sustancias terapéuticas, como los stents liberadores de fármacos con un recubrimiento antiproliferativo que contiene clopidogrel, vincristina y vinblastina para ayudar a prevenir la reestenosis y la necesidad de repetir la revascularización después del cateterismo cardíaco3. Además, se han creado stents ureterales biodegradables liberadores de fármacos que contienen paclitaxel, doxorrubicina, gemcitabina y otros agentes antiproliferativos para ayudar a tratar el carcinoma urotelial del tracto superior4. A medida que estos stents se degradan, los fármacos antitumorales se liberan localmente de forma controlada, prolongando la administración del fármaco sin necesidad de dosis adicionales4. Esta metodología permite el efecto a largo plazo de los fármacos antitumorales en el lugar de acción previsto, al tiempo que previene la necesidad de exposición sistémica, limita la acción del fármaco sobre las células no tumorales y reduce la toxicidad del fármaco. Además, la naturaleza biodegradable del stent también puede evitar la necesidad de un procedimiento de extracción del stent4.

El síndrome del intestino corto (SBS) es otra afección en la que el uso de terapias basadas en proteínas ha mostrado una mejoría significativa en los pacientes5. El SIC puede ocurrir a través de varios mecanismos, pero resulta en una longitud intestinal inadecuada, causando malabsorción y desnutrición. Las terapias, como los análogos del péptido similar al glucagón 2 (GLP-2), se pueden utilizar antes de pasar al tratamiento quirúrgico de esta afección5. El GLP-2 humano, una hormona peptídica nutriente sistémica, es producida en el intestino delgado distal y el colon por células endocrinas de tipo L. El GLP-2 induce la proliferación de las células de la cripta intestinal, promueve la reparación de la mucosa dañada, inhibe la apoptosis de las células epiteliales intestinales y mejora el suministro de sangre intestinal5. Los análogos de GLP-2, como la teduglutida, han sido aprobados para pacientes de 1 año o más para el tratamiento del SBS para ayudar a aumentar la adaptación intestinal natural6. Naturalmente, la adaptación intestinal puede llevar años y resulta en un retraso en el vaciamiento gástrico para aumentar el tiempo de absorción y un aumento del diámetro por dilatación intestinal para aumentar el área de superficie para la absorción7. Los análogos de GLP-2 tienen la misma actividad farmacológica que el GLP-2 natural, pero tienen una estructura más estable, lo que permite una vida media más larga y una mayor afinidad con los objetivos5. Actualmente, el costo anual de la teduglutida es de $295,000 y la dosis al paciente es de 0.05 mg/kg por día5. Los efectos secundarios de la teduglutida incluyen náuseas, vómitos, diarrea, dolor abdominal, pérdida de peso, pólipos gastrointestinales y aumento del crecimiento de tumores existentes.

Previamente, nuestro laboratorio ha demostrado que el despliegue de una manga de expansión intestinal (IES) (Figura 1) fue capaz de producir una elongación inmediata del 36,2% del intestino delgado ex vivo y una elongación del 30,2% del intestino delgado después de un despliegue in vivo de un mes 6,8. Este dispositivo podría convertirse en una terapia para los pacientes con SBS que podría acortar la dependencia nutricional parenteral. La capacidad de bioconjugar terapias con el dispositivo IES podría mejorar aún más la capacidad de enterogénesis por distracción al agregar el agonista del crecimiento de la mucosa intestinal GLP-2 al dispositivo. Las membranas de alcohol polivinílico (PVA) son polímeros hidrófilos que se pueden preparar disolviendo PVA en agua, fundiéndolo sobre un soporte estructural y luego reticulándolo con glutaraldehído utilizando ácido sulfúrico como catalizador9. Se ha demostrado que estas nanopartículas de hidrogel tienen potencial como sistemas de administración de fármacos a través de la difusión de fármacos, el hinchamiento de la matriz de hidrogel y la reactividad química del fármaco/matriz10. El PVA ha sido aprobado por la FDA para su uso clínico en humanos debido a su excelente biocompatibilidady seguridad. La polimerización de PVA da lugar a grupos terminales que permiten la bioconjugación12.

Los dispositivos IES/VES tienen una longitud de 3 cm con una superficie externa de 9.425cm2 y son capaces de fundirse con membranas de PVA. Estas membranas de PVA se pueden bioconjugar con GLP-2 para permitir la administración localizada y concentrada de agentes terapéuticos. Reducir la dosis requerida del fármaco y evitar la necesidad de administración sistémica, evitando los efectos negativos del tratamiento fuera del sitio. Esto puede ayudar a mitigar el costo de estos medicamentos costosos al requerir menos dosis, y la liberación tardía del medicamento puede disminuir la frecuencia de la dosificación, lo que reduce aún más los costos. El recubrimiento del dispositivo IES con GLP-2 podría reducir las dosis requeridas, ahorrar dinero a los pacientes, evitar la administración sistémica, prevenir los efectos negativos del tratamiento y mantener una administración continua del medicamento al sitio objetivo. Este informe evalúa hasta qué punto una proteína terapéutica, como el GLP-2, puede unirse covalentemente a dispositivos médicos como los dispositivos IES/VES en cantidades fisiológicamente significativas para proporcionar el beneficio local de estos fármacos y evitar los efectos fuera del objetivo.

Protocolo

NOTA: Las secciones 1 y 2 se completan al mismo tiempo. El recubrimiento con PVA y la reticulación de la membrana de PVA deben realizarse al mismo tiempo tanto para los manguitos de expansión como para la placa de 24 pocillos. Esto les permite estar listos al mismo tiempo para crear la curva estándar con la placa de 24 pocillos para usar la absorbancia para calcular la concentración de GLP-2 de cada manga.

1. Creación de dispositivos IES y VES recubiertos de GLP-2

  1. Prepare la solución de PVA al 5% agregando 5 g de PVA en 100 mL de agua desionizada. Para ayudar a disolver, considere revolver en una placa caliente. Luego, prepare la solución de GLP-2 de 1 mg/mL agregando 1 mg de GLP-2 en 1 mL de agua desionizada.
  2. Precontrate los manguitos de expansión intestinal y los manguitos de expansión vaginal sobre una pipeta de vidrio, estabilizando los extremos con pipetas de plástico cortadas para que encajen firmemente en la pipeta de vidrio alrededor de los manguitos precontraídos.
  3. Pinte las mangas precontratadas con el PVA prefabricado al 5% con un pincel pequeño. Después de pintar una capa de PVA, deje que las mangas se sequen a temperatura ambiente (RT) durante 10 minutos, luego pinte otra capa para un total de 5 capas de PVA en cada manga.
  4. Después de que se seque la5ª capa, coloque los manguitos precontraídos en un desecador debajo de una cubierta de seguridad química para permitir que se reticulen en RT. Inicie la reticulación agregando 3 mL de glutaraldehído al 25% y 3 mL de ácido sulfúrico al 94%-98% para separar los vasos de precipitados abiertos en el desecador para que los vapores reaccionen y reticulen las membranas de PVA en los manguitos.
  5. Después de reticular los manguitos en la cámara durante 48 h, sáquelos de la cámara y deje que el glutaraldehído se evapore de los manguitos durante 15 minutos.
  6. A continuación, añada 50 μL de la solución de GLP-2 de 1 mg/mL pipeteando cuidadosamente en cada manguito. Deje que se seque durante 30 minutos a RT antes de retirar los manguitos precontraídos de la pipeta de vidrio y añadir cada manguito al pocillo respectivo en la placa de 24 pocillos.

2. Creación de la placa de 24 pocillos recubierta de GLP-2

  1. Para hacer la curva estándar de GLP-2 unida al PVA, pipetee 50 μL de PVA al 5% en el fondo de 18 de los pocillos destinados a usar de una placa de 24 pocillos. Deje 6 pocillos en blanco para contener los dispositivos IES y VES (3 para cada tipo de dispositivo).
  2. Deje que la capa de PVA se seque en la placa de 24 pocillos durante la noche en un horno a 120 °C.
  3. Coloque la placa de 24 pocillos en un desecador debajo de una cubierta de seguridad química para permitir que el PVA se reticule durante 48 h en RT. Inicie la reticulación agregando 3 mL de glutaraldehído al 25% y 3 mL de ácido sulfúrico al 94%-98% para separar los vasos de precipitados abiertos para que los vapores puedan reaccionar dentro de la cámara para reticular el PVA en la placa de 24 pocillos.
  4. Después de la reticulación durante 48 h, retire la placa de 24 pocillos de la cámara y deje que el glutaraldehído se evapore de la placa durante 15 minutos.
  5. Luego, haga un gradiente de concentración agregando 250 μL, 100 μL, 50 μL, 25 μL y 0 μL de solución de GLP-2 de 1 mg/mL en sus pocillos etiquetados, creando la placa de 24 pocillos con 3 pocillos para cada concentración de GLP-2 (250 μg, 100 μg, 50 μg, 25 μg y 0 μg) y 3 pocillos para cada tipo de manguito (IES y VES).

3. Creación de una curva estándar y una concentración de GLP-2 en el manguito de discernimiento

  1. Después de que las diluciones respectivas de GLP-2 se agreguen a los pocillos y los manguitos recubiertos de fármaco se agreguen a los pocillos, refrigere la placa durante la noche a 4 °C para permitir que se produzca la unión del fármaco.
  2. Al día siguiente, agregue 2 mL de 1 mg/mL de leche en polvo en solución bloqueadora de agua desionizada a cada pocillo durante 1 h. Después de bloquear, lave cada pocillo 3 veces con PBS durante 5 minutos en cada lavado.
  3. Prepare la solución de anticuerpos anti-GLP-2 de conejo añadiendo 40 μL de anticuerpo anti-GLP-2 de conejo en 50 ml de agua desionizada. A continuación, añada 2 ml de la solución de anticuerpos GLP-2 para conejos a cada pocillo de la placa de 24 pocillos y refrigere durante la noche a 4 °C.
  4. Después de la incubación primaria de anticuerpos, lavar cada pocillo otras 3 veces con PBS durante 5 minutos en cada lavado. Producir la fosfatasa alcalina IgG anti-conejo producida en la solución de anticuerpos secundarios de cabra añadiendo 20 mL de anticuerpo secundario en 40 mL de agua desionizada. A continuación, añada 2 mL de solución de anticuerpos secundarios a cada pocillo y déjela reposar durante 2 h en RT.
  5. Aspire la solución de anticuerpos secundarios y lave cada pocillo con otro lavado de PBS 3 veces durante 5 minutos cada uno. A continuación, añada el sustrato de micropocillo azul de fosfatasa alcalina a cada pocillo.
  6. Permita que la fosfatasa alcalina conjugada con el anticuerpo secundario reaccione con el sustrato durante 20 min en RT. A medida que avanza la reacción, observe si el color de la solución cambia de amarillo a azul.
  7. Detenga la reacción pipeteando 200 μL de solución de cada pocillo y colóquela en una placa de 96 pocillos etiquetada igual que la placa de 24 pocillos. Una vez que se retira el reactivo de la placa de 24 pocillos con la membrana de PVA conjugada con la enzima fosfatasa alcalina, la reacción se detendrá y el color no cambiará.
  8. Lea la placa de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas de absorbancia a una longitud de onda de 620 nm para generar la curva estándar y calcular la concentración de GLP-2 en los manguitos recubiertos de PVA.

Resultados

Este protocolo describe el recubrimiento y la reticulación de dispositivos IES y VES con PVA para permitir la conjugación de GLP-2. La Figura 2 muestra la curva estándar generada para determinar la concentración de GLP-2 en cada dispositivo. La Figura 3 muestra la concentración de GLP-2 de cada dispositivo IES y VES, y la concentración de los pozos utilizados para la curva estándar. Los mangas tuvieron una concentración promedio de GLP-2 de 22,69 ± 9,32 μg/cm2, que correspondió a los 50 μg pocillos de la placa de 24 pocillos, que tuvieron una concentración de GLP-2 de 23,7 μg/cm2. Esto demuestra que la adición de 50 μg de GLP-2 da como resultado que el 45% del fármaco añadido permanezca unido al dispositivo médico recubierto de PVA.

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Figura 1: Implementación de IES. Este gráfico muestra el despliegue in vivo de una manga de expansión intestinal en el modelo de rata. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 2: Curva estándar. Esta imagen muestra la curva estándar generada utilizando un gráfico de líneas con los siguientes valores: Y = mx + b, Y = absorbancia a 620 nm, x = concentración, m = 0,0118, B = 0,0734, R2 = 0,966. La placa de 24 pocillos tenía una superficie de 1,93cm2, lo que daba concentraciones de GLP-2 de 125,95 μg/cm2, 66,38 μg/cm2, 23,77 μg/cm2, 14,58 μg/cm2 y 0,00 μg/cm2 para los pocillos de 250 μg, 100 μg, 50 μg, 25 μg y 0 μg, respectivamente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 3: Concentración de GLP-2 para los dispositivos y los pozos respectivos. Este gráfico muestra las concentraciones determinadas para cada dispositivo IES y VES y los pocillos de la placa de 24 pocillos utilizada para hacer la curva estándar. Después de la adición de 50 μg de GLP-2 a cada manguito (superficie externa de 9,425cm2), la cantidad de GLP-2 unida al dispositivo fue de 22,69 ± 9,32 μg/cm2. Esto corresponde a los 23,7 μg/cm2 para el pocillo de 50 μg de la curva estándar. Al agregar 50 μg de GLP-2 a estas fundas, el 45% del medicamento agregado se unió al dispositivo después de lavarse varias veces. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Discusión

Presentamos aquí una metodología para unir terapias basadas en proteínas, como GLP-2, a dispositivos médicos recubiertos de PVA y reticulados. La concentración del GLP-2 unido se determinó mediante la creación de una curva de concentración estándar de GLP-2 en placas de 24 pocillos recubiertas de PVA mediante la adición de anticuerpo anti-GLP-2 de conejo, fosfatasa alcalina IgG anti-conejo de cabra y sustrato de micropocillo azul de fosfatasa alcalina. El anticuerpo secundario conjugado con una enzima fosfatasa alcalina permitió la adición de un sustrato de micropocillo azul de fosfatasa alcalina que comienza siendo amarillo, y a medida que la fosfatasa alcalina unida al anticuerpo GLP-2 reacciona con el sustrato, se vuelve azul. Este cambio de color se lee a una absorbancia de 620 nm para crear la curva estándar de la Figura 2 y calcular la concertación de los dispositivos IES y VES unidos a GLP-2 utilizando su absorción. Después de la adición de 50 μg de GLP-2 a estos dispositivos recubiertos de PVA, el 45% del fármaco añadido se unió al dispositivo.

En este protocolo, el paso crítico es el paso de reticulación. Los dispositivos médicos recubiertos de PVA requieren más de 48 horas en una cámara hermética para permitir que los vapores de glutaraldehído al 25% y ácido sulfúrico al 94%-98% reticulen el PVA en los dispositivos. Esta reticulación permite que la membrana de PVA con grupos reactivos sea una superficie biorreactiva estable para unirse a las terapias basadas en proteínas para la administración de fármacos dirigidos. El uso de 5 capas se determinó empíricamente ya que 1-2 capas resultaron en re-expandidas en 1 h, 3 capas en 24 h, y deseábamos que el dispositivo tardara varios días en volver a expandirse para proporcionar una fuerza distractora en el tiempo para la expansión intestinal y vaginal. Con una superficie de 9.425cm2, los dispositivos IES y VES tienen el potencial de bioconjugar una gran cantidad de agentes terapéuticos en comparación con su pequeño tamaño. Si el paso de reticulación falla, la estabilidad de la membrana de PVA disminuye y la capacidad de retener terapias bioconjugadas disminuye, como se ve en IES 2 en la Figura 3.

La unión covalente de terapias basadas en proteínas a dispositivos médicos recubiertos de PVA permite la administración localizada y concentrada de estos agentes a los sitios de interés, al tiempo que evita la administración sistémica y el costo asociado y los efectos fuera del objetivo. Actualmente, la dosis típica de teduglutida para todos los pacientes es de 50 μg/kg por día13. Debido a que cada manguito contiene 22 μg/cm2, esto es aproximadamente el 44% de una dosis sistémica en un solo dispositivo. Con una superficie externa de 9,425cm2, estos manguitos son capaces de suministrar localmente 213,85 μg de GLP-2. Se trata de una dosis 4,3 veces mayor que la sistémica y se localiza en la zona de interés. La focalización permite que se utilice menos cantidad del fármaco al evitar la necesidad de administración sistémica. En la actualidad, la terapia anual con teduglutida cuesta 295.000 dólares para la dosis de 50 μg/kg al día5. Al conjugar teduglutida en la funda, se debe disminuir la dosis necesaria del fármaco y minimizar los efectos secundarios sistémicos. Los efectos secundarios comunes de la teduglutida incluyen dolor abdominal (28%), reacción en el lugar de la inyección (26%), náuseas (26%), distensión abdominal (17%), dolor de cabeza (16%) y vómitos (14%)13.

Una limitación de este estudio es la farmacodinámica y la farmacocinética de la liberación prolongada de GLP-2 a partir del dispositivo médico bioconjugado recubierto de PVA. El ensayo actual documentó que el GLP-2 puede unirse a los dispositivos de PVA reticulado, pero aún no tenemos información sobre cuánto tiempo permanece unido el fármaco antes de ser liberado de la membrana de PVA y el alcance de la liberación total del GLP-2 desde el sitio de implantación. Sabemos que después de varios pasos de lavado, el GLP-2 permanece adherido al dispositivo, pero se desconoce el grado de conjugación con el dispositivo y cómo afectará a la liberación. En estudios futuros, podríamos medir la liberación en sobrenadantes de IES y VES almacenados en biofluidos para modelar la liberación in vivo o recuperar estos dispositivos en diferentes momentos después de la implantación in vivo para medir el GLP-2 restante. Además, planeamos medir si algún factor, como el pH, la temperatura y la humedad, afecta la estabilidad y la tasa de liberación del medicamento del dispositivo. Experimentos futuros determinarían esto mediante la implantación de una funda de PVA bioconjugada y la medición de la concentración del fármaco que rodea la funda en diferentes momentos posteriores al despliegue y en diferentes condiciones establecidas. Sin conocer la farmacodinámica del manguito recubierto de PVA, no podemos determinar cómo se compararía la dosis localizada de GLP-2 con la dosis sistémica típica. Además, aún se desconoce la capacidad máxima de unión de los manguitos recubiertos de PVA. Después de añadir 50 μg, se determinó que el 45% del fármaco añadido permanecía unido a la funda. Esto podría significar que ya hemos superado la capacidad máxima de encuadernación. Se justifican estudios futuros que agreguen diferentes concentraciones de GLP-2 a cada manguito para determinar la verdadera capacidad de unión máxima de estos dispositivos y la tasa de liberación con dosis variables.

Aquí, validamos la capacidad de conjugación terapéutica con nuestros dispositivos médicos recubiertos de PVA. Los resultados muestran que el 44% del GLP-2 añadido se unió covalentemente a los dispositivos IES y VES, lo que permitió la administración local y altamente concentrada de terapias basadas en proteínas como el GLP-2. Se espera que la administración localizada de medicamentos ayude a reducir los costos del tratamiento, aumentar la accesibilidad y reducir los efectos secundarios. Esta metodología se puede utilizar para cientos de terapias actuales basadas en proteínas para mejorar la administración local de fármacos y mejorar los resultados del tratamiento.

Divulgaciones

Jonathan Steven Alexander y Christen J. Boyer son titulares de la patente US10537659B2, dispositivos médicos de alcohol polivinílico impresos en 3D y métodos de activación (2017). El resto de los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Esta investigación fue financiada por R. Keith White, MD, a través del Fondo de la Cátedra John C. McDonald del Departamento de Cirugía, W. Reid Grimes, MD para la financiación a través del Fondo de Cátedra Whitney Boggs del Departamento de Cirugía, y la subvención LSU LIFT2, HSCS-2022-LIFT-002.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Anti-Conejo IgG (molécula entera) – Anticuerpo peroxidasa producido en cabraSigma-AldrichA0545-1ML
BluePhos Microwell Substrate Kit Sera Care5120-0059
GenClone 25-107, 24 pocillos Placas de cultivo celular Pocillos de fondo plano, tratado con TC, 100 placas/unidadGenesee Scientific 25-107
GLP-2 Anticuerpo monoclonal recombinante de conejo (3K3P5)Invitrogen MA5-42869
Péptido-2 similar al glucagón (GLP-2) (1-33), rataEchelon Biosciences195262-56-7
Glutaraldehído, solución acuosa al 25%Sigma-Aldrich111-30-8
Desecador de polipropileno Nalgene con llave de pasoThermoFisher Scientific5310-0250
Poli(alcohol vinílico)Sigma-Aldrich9002-89-5
Ácido sulfúrico (grado TraceMetal), Fisher ChemicalFischer ScientificA510-P212

Referencias

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