Este protocolo describe un método para inducir la obstrucción ureteral unilateral (UUO) en ratones para estudiar la progresión de la fibrosis tisular en la nefropatía obstructiva. Incluye procedimientos quirúrgicos, cuidados postoperatorios y métodos para la evaluación de la fibrosis.
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Artículo de método
Modelo de obstrucción ureteral unilateral para la investigación de la fibrosis intersticial renal
En este artículo
Resumen
Resumen
La fibrosis renal es el resultado patológico final de la enfermedad renal crónica (ERC) progresiva. El modelo de obstrucción ureteral unilateral (UUO) es ampliamente utilizado para dilucidar los mecanismos moleculares y celulares que subyacen a la fibrosis intersticial renal y para identificar posibles dianas terapéuticas. Este modelo se establece en ratones a través de la ligadura quirúrgica de un uréter unilateral, un procedimiento relativamente sencillo y fácil de realizar. Sin embargo, se sabe que el modelo de ratón UUO exhibe una variabilidad e inconsistencia significativas, influenciadas por factores como la tensión del ratón, la edad, el sexo, el tipo de anestesia, la duración de la cirugía, la temperatura corporal durante el procedimiento, las habilidades quirúrgicas del operador, las condiciones de alimentación y el estado de salud general de los ratones. Las variaciones en las técnicas quirúrgicas, la colocación de las suturas y la duración de la obstrucción contribuyen a la variabilidad de los resultados. Además, el muestreo inconsistente de riñones obstruidos aumenta aún más la variabilidad en la evaluación de la fibrosis renal. Este estudio describe el proceso de desarrollo del modelo de ratón UUO y la evaluación de la fibrosis intersticial, discute los desafíos técnicos que contribuyen a la imprevisibilidad del modelo y propone posibles soluciones. Estos conocimientos tienen como objetivo establecer un enfoque más estandarizado y universalmente aplicable para investigar la fibrosis renal.
Introducción
La enfermedad renal crónica (ERC) afecta a más del 10% de la población mundial y su prevalencia está aumentando1. Diversas afecciones del tracto urinario, como anomalías anatómicas congénitas, nefrolitiasis, hiperplasia prostática y tumores vesicales, pueden provocar obstrucción ureteral². Como resultado, el modelo de ratón de obstrucción ureteral unilateral (UUO) es una herramienta clave para identificar nuevos mecanismos de fibrosis intersticial renal, comprender la progresión de la enfermedad y evaluar posibles estrategias de tratamiento. Ha sido ampliamente utilizado para investigar el origen de los miofibr....
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Protocolo
Todos los procedimientos con animales se llevan a cabo de acuerdo con las pautas de la agencia y son aprobados por el Comité Institucional de Ética Animal de la Universidad Médica de Nanjing. Para eliminar las diferencias de sexo y cepa y garantizar la comparabilidad de los resultados, solo se utilizan ratones machos CD1 de 8 a 10 semanas de edad y con un peso de 22 a 25 g. Los detalles de los reactivos y equipos utilizados en este estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.
1. Preparación de animales e instrumentos
- Autoclave todos los instrumentos quirúrgico....
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Resultados
Histología
La tinción con ácido peryódico-Schiff (PAS) reveló dilatación tubular, pérdida de los bordes en cepillo, formación de yesos e hinchazón epitelial tubular. La tinción tricrómática de Masson y rojo de Sirius mostró fibrosis intersticial después de UUO, en contraste con los túbulos compactos normales con lúmenes discernibles observados en el grupo simulado. El grado de fibrosis intersticial renal, indicado por áreas azules en la tinción tricrómica de Masson y áreas rojas en la tinción roja de .......
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Discusión
Se proporciona un procedimiento integral para establecer el modelo UUO, un enfoque ampliamente utilizado para investigar la fibrosis intersticial renal. Además, se demuestra la identificación y evaluación del modelo, incluyendo evaluaciones de la función renal y alteraciones histológicas. Se discuten las variables que contribuyen a la heterogeneidad del modelo y los factores técnicos modificables.
La susceptibilidad a la UUO varía significativamente según la e.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo contó con el apoyo de las subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias de China (82370686/2024YFA1107704), la beca del profesor especialmente designado de Jiangsu, el Proyecto de Innovación Científica y Tecnológica de Nanjing, el Programa de Cultivo de Talento de Alto Nivel del Hospital de la Provincia de Jiangsu (Fase I) (CZ0121002010037), la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Jiangsu (BK20240055) y el Equipo de Innovación Médica de Jiangsu para JR; Proyecto de Mejora de la Capacidad Clínica del Hospital de la Provincia de Jiangsu (el primer hospital afiliado a la Universidad Médica de Nanjing) (JSPH....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de 1 ml | Mingankang | / | |
| 4/0 | Jinhuan Medical | F401 | |
| 75% Etanol | Lircon | 6303060031 | |
| Bomba de aire Bomba de aire | RWD Life Science | R510-29 | |
| Cámaras de inducción de anestesia | RWD Life Science | V102-V | |
| Cortadora de pelo animal | Jinke | / | |
| Solución de betadina | Lircon | 6303030036 | |
| Buprenorfina (analgésico) | RWD Life Science | / | |
| Pinzas de iris curvado | jinke | / | |
| Almohadilla térmica electrónica | Reptizoo | AHM23 | |
| pinzas rectas finas | Jinke | / | |
| Recipiente de filtro de gas | RWD Life Science | R510-31-6 | |
| Almohadillas de gasa | Winner Medical | 601-026576 | |
| Tijeras de iris | Jinke | / | |
| Isoflurano (anestésico) | RWD Life Science | R510-22-10 | |
| Máquina de anestesia animal de salida múltiple | RWD Life Science | R550IE | |
| Portaagujas | jinke | / | |
| ungüento oftálmico | Dechra NDC | 17033-211-38 | |
| Hisopo de algodón estéril | Winner Medical | 601-015213 | |
| Solución salina estéril | Shimen | H20066533 |
Referencias
- Bello, A. K., et al. An update on the global disparities in kidney disease burden and care across world countries and regions. Lancet Glob Health. 12 (3), e382-e395 (2024).
- Klahr, S. Obstructive nephropathy. Intern Med. 39 (5), 355-361 (2000).
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Reimpresiones y permisos
