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Artículo de método

Construcción de un modelo de xenoinjerto de adenocarcinoma de pulmón en ratones y evaluación de la eficiencia de la decocción XY a través de la vía MAPK

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DOI:

10.3791/68023

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25 de abril de 2025

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1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

En este artículo

Resumen

Este estudio demuestra que la decocción XY ejerce efectos terapéuticos contra el adenocarcinoma de pulmón mediante la regulación de la vía MAPK.

Resumen

El adenocarcinoma de pulmón está aumentando en todo el mundo, lo que impulsa la exploración y el desarrollo de métodos de tratamiento eficaces. En los últimos años, se ha reconocido cada vez más el potencial terapéutico de la medicina tradicional china para el adenocarcinoma de pulmón, como la decocción XiaoYi (XY). El mecanismo de acción de la medicina tradicional china en el tratamiento del adenocarcinoma de pulmón continúa siendo dilucidado. En este estudio, se utilizaron modelos animales para investigar los efectos terapéuticos de la decocción XY en el tratamiento del adenocarcinoma de pulmón. Los componentes químicos de entrada en sangre de la decocción XY en ratones se separaron y analizaron en modos de iones positivos y negativos utilizando UHPLC-QE-MS. Los hallazgos se validaron a través de experimentos in vivo , que demostraron una reducción del tamaño del tumor, una mejora de los cambios patológicos y un aumento de la apoptosis. Como resultado, se identificaron quince componentes absorbidos en la sangre después de la administración de la decocción XY: Stachyose, Quercetina-3-O-beta-glucopiranosil-7-O-alfa-ramnopiranósido; Imperialino; Espinosina B; Peiminado; Base de flavona + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodofilotoxina; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihidroxi-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hidroxi-17-(2-hidroxi-6-metilhept-5-en-2-il) 4,4,8,10,14-pentametil-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahidro-1H ciclopenta[a]fenantren-3-il]oxi]-6-(hidroximetil)oxano-3-il]oxi-6-(hidroximetil)oxano-3,4,5-triol; Tricina; Ginsenósido Rg1; (20R)-Ginsenósido Rh1; Jujuboside B; Aucubina; Ginsenósido Rg3; y ácido beta-elemonico. Los experimentos con animales demostraron que la decocción XY inhibía el crecimiento tumoral, mejoraba los cambios patológicos y promovía la apoptosis de las células tumorales de manera dependiente de la dosis. Los mecanismos implicados pueden estar relacionados con la regulación positiva de la expresión de las proteínas p-JNK y p-P38 en la vía MAPK y la regulación negativa de la expresión de la proteína p-ERK en la vía MAPK. En conclusión, la decocción XY tiene el potencial de regular la vía MAPK y ejercer efectos terapéuticos contra el adenocarcinoma de pulmón.

Introducción

La incidencia del cáncer de pulmón está aumentando en todo el mundo. Representa el 18% de todas las neoplasias malignas y es responsable de un número significativo de muertes relacionadas con el cáncer 1,2. El cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) es una forma prevalente de cáncer de pulmón, con el adenocarcinoma como principal tipo patológico3. Debido a sus síntomas insidiosos, el CPNM a menudo se diagnostica en una etapa avanzada y tiene una alta tasa de mortalidad 4,5. Los pacientes con CPCNP en estadio IV tienen una tasa de supervivencia a cinco años de solo el 5%6, mientras que incluso el CPCNP en estadio temprano resecable quirúrgicamente tiene una tasa de supervivencia a cinco años de solo el 50%7.

Actualmente, el tratamiento del adenocarcinoma de pulmón incluye cirugía, radioterapia, quimioterapia, inmunoterapia y terapia dirigida. Además, la medicina tradicional china (MTC) para el adenocarcinoma de pulmón está siendo cada vez más reconocida y valorada8. La medicina tradicional china tiene una larga historia y se ha utilizado en el tratamiento de diversas enfermedades oncológicas con resultados terapéuticos efectivos 9,10. Considera el cuerpo humano como una entidad completa, con el principio terapéutico centrado en restaurar el movimiento del Qi (Qi se refiere a la energía vital que promueve la circulación de la sangre y los fluidos corporales, contribuyendo a mejorar la inmunidad y reducir la inflamación en pacientes con NSCLC) en los órganos internos para restaurar el equilibrio general e inhibir la progresión del cáncer.

La MTC no solo trata enfermedades oncológicas de baja toxicidad, múltiples dianas y alta eficiencia11, sino que también facilita la reparación del daño causado por la radioterapia y la quimioterapia, prolongando así la supervivencia12.

La tecnología de cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) integra la cromatografía líquida con la espectrometría de masas para lograr la separación y detección de componentes en mezclas de compuestos complejos13. LC-MS ofrece alta resolución, alta sensibilidad y alta especificidad, lo que permite la separación e identificación de varios componentes químicos en las decocciones de la medicina tradicional china (MTC). Cuando se combina con la química medicinal sérica, que separa y detecta los componentes activos de entrada a la sangre después de la administración oral14,15, la LC-MS permite la predicción y el análisis de los posibles mecanismos de acción de los fármacos. Este enfoque ayuda a comprender la composición química y los componentes farmacológicos de las decocciones de la MTC, proporcionando datos esenciales para la investigación en profundidad sobre sus efectos farmacológicos y aplicaciones clínicas, lo que lo hace altamente aplicable en la investigación de la MTC16,17.

La vía de señalización MAPK desempeña un papel crucial en la génesis, progresión, metástasis e invasión del cáncer de pulmón, con Erk, p38 y JNK como subfamilias importantes. Se ha demostrado que las decocciones de la MTC influyen en la expresión de proteínas en la vía MAPK18. La decocción de XiaoYi (XY) se deriva de la decocción de YiGuan y se utiliza para tratar el adenocarcinoma de pulmón en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad de Medicina China de Changchun (Figura 1), lo que demuestra una eficacia clínica precisa. Sin embargo, su mecanismo terapéutico sigue sin estar claro.

En este estudio, se empleó cromatografía líquida de ultra alta resolución junto con espectrometría de masas Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) para dilucidar el posible mecanismo terapéutico de la decocción XY contra el adenocarcinoma de pulmón, y sus efectos se validaron mediante estudios in vivo .

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Protocolo

Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun (Ética No. 2024008). Los ratones machos C57BL/6 de seis semanas de edad (20 ± 2 g), criados en condiciones específicas libres de patógenos (SPF), exhibieron patrones típicos de actividad física en un ambiente controlado con temperatura y humedad constantes. Tenían acceso ad libitum a alimentos y agua y se mantenían bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los detalles de los reactivos y equipos utilizados en este estudio se proporcionan en la Tabla de Materiales.

1. Preparación del extracto acuoso de decocción XY

  1. Coloque Panax ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 g) y Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g) en una olla de decocción. Añadir 1000 mL de agua desionizada y remojar durante 30 min a temperatura ambiente.
  2. Hervir las tres hierbas del paso 1.1 durante 1 h. Al mismo tiempo, remojar Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Molino de Ziziphus jujuba . spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Meliá toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g), y Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) en otro envase durante 30 min. Después de remojar, transfiéralos a la maceta de decocción del paso 1.1.
  3. Hervir las 18 hierbas de los pasos 1.1 y 1.2 durante 30 min. Vierta el líquido de hierbas, agregue 1000 ml de agua desionizada y hierva durante otros 30 minutos. Repita este proceso de ebullición tres veces para obtener tres porciones de líquido de hierbas, luego combínelas y mézclelas bien.
  4. Filtre el líquido herbal mezclado a través de un paño de malla 400. Concentre el filtrado a presión reducida, luego transfiera el líquido herbal concentrado a un equipo de enfriamiento para su posterior procesamiento.
  5. Vierta el líquido herbal concentrado en una bandeja de liofilización y colóquelo en la cámara de precongelación de un liofilizador al vacío. Una vez finalizada la precongelación, transfiera la bandeja a la cámara de secado por sublimación para eliminar el agua.
  6. Elimine la humedad residual a alta temperatura. Pulverizar el extracto de hierbas liofilizado con un pulverizador para obtener polvo fino de decocción XY liofilizado (Figura 2).

2. Preparación de suero que contiene medicamentos

  1. Asigne aleatoriamente ratones machos C57BL/6 de seis semanas de edad (20 ± 2 g) al grupo XiaoYi (XY) o al grupo de control.
    NOTA: La dosis en ratones se calculó utilizando el factor de conversión de humano a ratón:
    Dosis experimental equivalente para ratones (g/kg) = {Dosis humana (g/kg) / Peso corporal (70 kg)} x 9,1
    Sobre la base de este cálculo, se determinó que la dosis para ratones era de 2,6 g/kg.
  2. Pesar 0,9152 g de polvo de decocción XY liofilizado y disolverlo en 3,2 mL de agua destilada para preparar la solución del fármaco.
    NOTA: Los ratones se ayunaron durante 12 h antes de la administración oral.
  3. Administrar la decocción XY a los ratones del grupo XY mediante sonda nasogástrica, mientras se administra al grupo de control un volumen equivalente de agua desionizada.
  4. 2 h después de la administración oral, anestesiar a los ratones con pentobarbital sódico (siguiendo los protocolos aprobados institucionalmente). Enuclear los globos oculares con pinzas para recolectar muestras de sangre, luego sacrificar a los ratones mediante asfixia por CO2 seguida de luxación cervical siguiendo las pautas éticas19.
  5. Deje que las muestras de sangre se estabilicen a temperatura ambiente durante 90 minutos. Centrifugar a 3450 x g (4 °C) durante 15 min para recoger el sobrenadante.

3. Análisis UHPLC-QE-MS

  1. Añadir 100 mg de polvo liofilizado de decocción XY a 500 μL de solución de extracción (metanol: agua = 4:1). Mezclar bien, sonicalar e incubar en un baño de agua helada durante 1 h.
  2. Mantenga la mezcla a -40 °C durante 1 h, luego centrifugue a 13,800 x g (4 °C) durante 15 min. Filtre el sobrenadante a través de una membrana filtrante de 0,22 μm, luego combine 100 μL de cada sobrenadante para crear muestras de control de calidad (QC).
  3. Después de descongelar las muestras de plasma, tome 400 μL de la muestra de plasma del grupo de control y 400 μL de las muestras de plasma del grupo XY. Añadir 40 μL de ácido clorhídrico (2 mol/L) a cada muestra. Vórtice durante 1 min y deje reposar la mezcla a 4 °C durante 15 min. Repita este paso cuatro veces.
  4. Añadir 1,6 mL de acetonitrilo y vórtice durante 5 min. Centrifugar a 13.800 x g durante 5 min a 4 °C. Someter 1.800 μL del sobrenadante a secado con nitrógeno.
  5. Reconstituya las muestras secas en 150 μL de metanol al 80% que contenga 10 μg/mL del patrón interno mediante vórtice durante 5 min. Centrifugar a 13.800 × g durante 5 min a 4 °C, luego transferir 120 μL del sobrenadante a un vial de vidrio fresco para el análisis de LC-MS (Figura 3).

4. Cultivo celular y preparación animal

  1. Siembre 1 mL de células de carcinoma de pulmón de Lewis en una placa de cultivo que contiene el medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con un 10% de suero fetal bovino y un 1% de penicilina/estreptomicina. Incubar las células en condiciones controladas a 37 °C con 5% de CO2.
  2. Cuando las células alcancen el 80% de confluencia, hágalas pasar utilizando tripsina al 0,25%. Continúe el paso hasta que el estado de la célula se estabilice, luego ajuste la concentración de la célula a 3 x 106 células/mL.
  3. Inyecte 0,1 mL de la suspensión celular preparada por vía subcutánea en la axila derecha de ratones machos C57BL/6 para establecer el modelo de adenocarcinoma de pulmón.
    NOTA: El tejido tumoral se puede palpar en la axila de los ratones 5 días después de la inoculación.
  4. Después de 5 días, divida aleatoriamente los ratones en cinco grupos (n = 6 por grupo): Grupo modelo (M) - Sin tratamiento; Grupo de baja dosis de decocción XY (XY-L) - 1,3 g/kg; grupo de dosis media de decocción XY (XY-Z) - 2,6 g/kg; Grupo de alta dosis de decocción XY (XY-H) - 5,2 g/kg; Grupo del cisplatino (DDP) - Tratado con cisplatino20.
  5. Disolver el polvo de decocción XY en 200 μL de agua destilada a la dosis correspondiente y administrarlo por sonda nasogástrica. Los grupos M y DDP reciben un volumen igual de agua destilada a través de sonda nasogástrica.
  6. Administrar cisplatino al grupo DDP mediante inyección intraperitoneal (3 mg/kg) una vez cada 3 días. Inyectar el mismo volumen de solución salina fisiológica en los otros grupos.

5. Análisis anatomopatológico del tejido tumoral

  1. Después de 21 días, sacrificar a todos los ratones utilizando asfixia por CO2 seguida de luxación cervical (siguiendo las pautas éticas) y extirpar el tejido tumoral21. Medir el volumen y el peso del tumor (Figura 4).
  2. Fijar los tejidos tumorales extirpados en paraformaldehído al 4% durante 24 h). Deshidratar el tejido utilizando soluciones de etanol graduadas.
  3. Limpie los bloques de tejido deshidratado con xileno, luego insértelos en cera de parafina derretida. Deja que la cera se solidifique en un bloque de parafina. Divida el bloque de tejido en rodajas de 5 μm de grosor con un micrótomo.
  4. Desparafinar las secciones de tejido en xileno, seguido de rehidratación en soluciones de etanol graduadas. Tiñe las secciones con hematoxilina durante 5 minutos, luego enjuaga con agua desionizada.
  5. Contratiñir las secciones con una solución de eosina al 0,5% durante 1 min. Observe las secciones teñidas bajo un microscopio óptico y capture imágenes para su análisis.

6. Análisis inmunohistoquímico del tejido tumoral

  1. Realice el desparafinado y la rehidratación siguiendo los procedimientos descritos en los pasos 5.2-5.4.
  2. Incubar las secciones en un bloqueador de peroxidasa endógeno a temperatura ambiente durante 15 min. Bloquee la unión inespecífica incubando las secciones con suero de cabra.
  3. Aplicar los anticuerpos primarios: Ki-67 (1:600) y Caspasa-3 (1:100). Incubar las secciones durante la noche a 4 °C. Lavar con tampón PBS), luego aplicar un anticuerpo secundario de uso general (1:500) e incubar a 37 °C durante 30 min.
  4. Desarrolle la reacción de color agregando una solución DAB. Contratiñe las secciones con una solución de hematoxilina.
  5. Realizar la deshidratación, limpieza y sellado de las secciones manchadas. Observe la expresión de proteínas bajo un microscopio óptico y capture imágenes para su análisis.

7. Análisis de Western blot

  1. Homogeneizar los tejidos tumorales mediante un lisador de tejidos. Extraiga la proteína total y determine su concentración utilizando un kit de ensayo de ácido bicinconínico (BCA) (ver Tabla de Materiales).
  2. Realizar la cuantificación de proteínas, seguida de la electroforesis SDS-PAGE y la transferencia de proteínas a una membrana.
  3. Incubar la membrana durante la noche a 4 °C con anticuerpos primarios: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-actina (1:200) (ver Tabla de Materiales).
  4. Al día siguiente, incubar la membrana con un anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) a temperatura ambiente durante 1,5 h. Detecte bandas de proteínas mediante un sistema de quimioluminiscencia mejorada (ECL).
    NOTA: Las intensidades de las bandas de proteínas se cuantificaron utilizando el software ImageJ.

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Resultados

Las muestras de solución y suero en polvo XY del grupo de control y del grupo XY se analizaron utilizando UHPLC-QE-MS, revelando picos bien separados. Los diagramas de ionización total para los modos de iones positivos y negativos se muestran en la Figura 3. La composición de la decocción XY se identificó en función del tiempo de retención, el modo de adquisición y los fragmentos del espectro de masas. Se identificaron quince componentes de entrada sanguínea ...

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Discusión

La incidencia del cáncer aumenta cada año, atrayendo un importante interés clínico y de investigación22,23. Estudios recientes han demostrado la eficacia de la medicina tradicional china (MTC) en el tratamiento del cáncer de pulmón 24,25,26. Por ejemplo, se ha demostrado que la decocción de Maimendong aumenta el número y la actividad de ...

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el Plan de Desarrollo Científico y Tecnológico de la Provincia de Jilin (YDZJ202301ZYTS459).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
AcetonitriloCNW Technologies5/8/1975
2-cloro-L fenilalaninaShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Solución de hidróxido de amonio ChinaNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Anticuerpo-β-actinaAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AnticuerpoAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AnticuerpoAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AnticuerpoAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 AnticuerpoAbcamab208035
Anticuerpo anti-Ki67Tecnología de señalización celularGB121141
Anticuerpo anti-p38 (fosfo T180)Abcamab178867
Anticuerpo anti-p38 alfa/MAPK14Abcamab170099
Kit de ensayo de concentración de proteínas BCABoster Biological Technology17E17B46
Albúmina sérica bovina (BSA)DAKOBIOFROXX
Inhibidor de fosfatasa de amplio espectro (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 ratonesLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Columna cromatográficaAguasACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2.1 * 100 mm
CisplatinoChina Grupo Farmacéutico Nacional Reactivo Químico Co., Ltd.232120
Solución de recuperación de antígenos de citrato (pH 6.0)Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Cubreobjetos JiangsuShitai Equipo de Laboratorio Co., Ltd.10212432C
Etapa criogénicaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Kit cromogénicoJiangsu Shitai Equipo de laboratorio Co., Ltd.
Agitador de decoloraciónBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
DeshidratadorWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Horno de secadoShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Medio de águila modificado de DulbeccoGibco8121587
EDTA (pH 8.0) Solución de recuperación de antígenosWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) Solución de recuperación de antígenos WuhanBaiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Tampón de electroforesisNCM Biotech20230801
Máquina de incrustaciónWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinaChina Grupo Farmacéutico Nacional Reactivo Químico Co., Ltd.
EtanolChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Suero fetal bovinoGibco2166090RP
Ácido fórmicoSIGMA64-18-6
GraphPad Software PrismaGraphPad software, LLCVersión 9.0.0
HematoxilinaChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
Cromatografía líquida de alta resoluciónAgilent1260 Infinity II Prime
Centrífuga refrigerada de alta velocidadThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
Espectrometría de masas de alta resoluciónThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP Conjugado Cabra Anti-RatónSeraCare5220-0341
Cabra conjugada con HRP Anti-Conejo Anti-ConejoSeraCare5220-0336
Cabra conjugada con HRP Anticuerpo Secundario UniversalDAKOK5007
Cabra conjugada con HRP Anti-Rata Anti-RataSeraCare5220-0364
Conejo conjugado con HRP Anti-CabraSeraCare5220-0362
Ácido clorhídricoGrupo Farmacéutico Nacional de China Reactivo químico Co., Ltd.H9892
Peróxido de hidrógenoNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Kit de quimioluminiscencia ECL hipersensibleNCM BiotechP10300
ImageJ softwareInstitutos Nacionales de Saludv1.8.0
Sistema de imágenesNikon (Japón)NIKON DS-U3
Células de carcinoma de pulmón de LewisChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Tela de mallaBaijie100110779650
Instrumento de control de temperatura de calefacción de metalBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MetanolAladdinM116118
MicropipetaDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Portaobjetos de microscopioJiangsu Shitai Equipo de laboratorio Co., Ltd.10212432C
MicrotomoShanghái Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Horno de microondasGalanz Microondas Electrodomésticos Co., Ltd.P70D20TL-P4
Bálsamo neutroChina National Pharmaceutical Group Reactivo químico Co., Ltd.
Microscopio ópticoNikon (Japón)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A PAGE
kit de preparación rápida de gelBiosharpPL566B-5
Paraformaldehído ChinaNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Solución salina tamponada con fosfato (1x)Gibco8120485
Marcador de proteínas de color preteñido (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Tampón de carga de proteínas (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
pulverizadorShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 μ m)Cywin Innovation (Pekín) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Solución de transferencia rápida de membranaCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
Lisado de RIPABoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
Tampón TBSNCM Biotech23HA0102
Estación de trabajo de flotación de tejidosJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., provincia de Zhejiang.KD-P
NCM Biotech23CA2000
Tripsina (0.25%, 1x)HyCloneJ210045
Aparato ultrasónico de disrupción celularNingbo Xinyi equipo ultrasónico Co., Ltd.JY92-IIDN
Microscopio óptico verticalNikon (Japón)Nikon Eclipse CI
Lanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Mezclador de vórticeKylin-BellXW-80A
XilenoChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
2005289212954493511 China 9002010410004160Tampón transmembrana Liofilizador al vacío 214736

Referencias

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