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Artículo de método

Evaluación de la función ventricular derecha en modelos experimentales de hipertensión arterial pulmonar

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DOI:

10.3791/68248

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27 de junio de 2025

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1Laboratory of Pulmonary Investigation, Institute of Biophysics Carlos Chagas Filho, Federal University of Rio de Janeiro

En este artículo

Resumen

La presentación de métodos detallados para la evaluación de la función del ventrículo derecho mejorará la calidad y la fiabilidad de la investigación sobre la hipertensión pulmonar, ofreciendo un marco sólido para futuros estudios y mejorando la reproducibilidad en diferentes laboratorios.

Resumen

La hipertensión pulmonar (HP) es una afección crónica asociada con una supervivencia reducida, lo que la convierte en un área crítica de investigación. Los modelos experimentales de la HP han mejorado significativamente nuestra comprensión de su fisiopatología y han facilitado el diseño de pequeños ensayos observacionales y clínicos. Sin embargo, es crucial establecer metodologías estandarizadas para garantizar la comparabilidad entre diferentes estudios experimentales y grupos de investigación. La estandarización no solo mejora la reproducibilidad, sino que también fomenta la colaboración entre los equipos de investigación.

En este video, describimos los pasos metodológicos necesarios para analizar con precisión los parámetros funcionales de la HP. Estos incluyen la evaluación ecocardiográfica, la punción invasiva del ventrículo derecho (VD) y el cálculo del índice de Fulton. En cuanto a la ecocardiografía, se presenta en detalle la medición del tiempo de aceleración arterial pulmonar y la relación de tiempo de eyección pulmonar, así como el cálculo del gasto del VD. En cuanto a las mediciones invasivas, se describen los procedimientos esenciales, incluidos los protocolos de anestesia, la posición óptima de los animales, la configuración de la ventilación mecánica, la apertura precisa de la pared torácica, la visualización del VD y las técnicas de punción del VD.

Se explica en detalle la metodología para la disección ventricular (índice de Fulton), así como el cálculo de la relación VD/ventrículo izquierdo más tabique, corregida por el peso corporal del animal. Creemos que proporcionar una presentación detallada de estos métodos mejorará la calidad y la fiabilidad de la investigación en HP, ofreciendo un marco sólido para futuros estudios y mejorando la reproducibilidad en diferentes laboratorios.

Introducción

La medición funcional adecuada de la función del ventrículo derecho (VD) en animales pequeños se ha vuelto esencial desde el aumento de los estudios que utilizan modelos animales en ciencias respiratorias y cardiovasculares. Existen varios modelos animales de hipertensión pulmonar (HP), que utilizan monocrotalina1, hipoxia2 o Sugen + hipoxia3. Han servido para desentrañar nuevas vías fisiopatológicas 1,4 y estudiar nuevos posibles tratamientos farmacológicos5 y no farmacológicos6 para la HP. Sin embargo, a pesar del agente causal que conduce al fenotipo de HP, existe preocupación sobre la medición funcional del rendimiento del VD, principalmente porque la función del VD usualmente (1) es el resultado primario adoptado por los estudios preclínicos7; (2) se dispone de diferentes tipos de equipos para realizar ecocardiografía y punción invasiva de la cámara del VD; (3) se requiere experiencia en anestesia y algunos conocimientos sobre la ventilación mecánica invasiva en animales pequeños, así como el reconocimiento de una ventana adecuada para la evaluación de la VD.

De acuerdo con las 3R de los estudios preclínicos (reemplazo, reducción y refinamiento), la reducción está alineada para ampliar los métodos que ayudan a obtener niveles comparables de información, lo que aumenta la reproducibilidad8. Por lo tanto, el número de animales se reducirá en la investigación principalmente como resultado de estrategias como el diseño experimental adecuado, la evaluación estadística correcta y el intercambio de prácticas y conocimientos. En el presente estudio metodológico se presentan tres técnicas diferentes después de la inducción de HAP (Figura 1). La primera es la medición no invasiva de la función del VD mediante ecocardiografía transtorácica. Las imágenes se obtienen a partir de vistas del eje paraesternal largo y corto. El diámetro del tracto de salida del VD, el tiempo de aceleración pulmonar (PAT) y el tiempo de eyección pulmonar (PET) se evalúan mediante un Doppler de onda pulsada. Se calcula el cociente PAT/PET y se utiliza como índice indirecto de hipertensión arterial pulmonar (HAP)9,10. La segunda es la punción invasiva del VD. Por lo general, se utiliza un sistema de adquisición de datos fisiológicos, que se registra continuamente en una computadora que ejecuta un software hecho a medida. La presión sistólica invasiva del ventrículo derecho (RVSP) y la presión arterial pulmonar media se utilizan a menudo como resultados primarios en diferentes estudios7. El tercero es el índice de hipertrofia ventricular derecha, también llamado índice de Fulton11, que es la relación entre el VD y el ventrículo izquierdo (VI) más el peso del tabique interventricular (S) (VD/LEV + S), corregido por el peso corporal del animal. La presentación de métodos detallados para la evaluación de la función del VD mejorará la calidad y la fiabilidad de la investigación sobre la HP, ofreciendo un marco sólido para futuros estudios y mejorando la reproducibilidad en diferentes laboratorios.

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Figura 1: Diagrama de flujo. Ilustración resumida de los protocolos descritos en este artículo. Abreviaturas: ECO = ecocardiografía; VI = ventrículo izquierdo; HAP = hipertensión arterial pulmonar; VD = ventrículo derecho; HDV = hipertrofia ventricular derecha; RVSP = presión sistólica del ventrículo derecho; S = tabique interventricular. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Protocolo

El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Ética en el Uso de Animales (CEUA) de la Universidad Federal de Río de Janeiro bajo el número de proceso 043/22. Todos los procedimientos cumplieron con los Principios del Cuidado de los Animales de Laboratorio y la Guía de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. El estudio siguió las directrices ARRIVE11.

1. Preparación animal y protocolo experimental

  1. Calcule el número de animales según lo informado anteriormente12.
    NOTA: Teniendo en cuenta que las diferencias en RVSP entre CTRL y HAP lograron un tamaño del efecto de d = 3.95, asumiendo una razón de tamaño de muestra de 1 y un poder estadístico (1-β = 0.8) para identificar diferencias significativas (α = 0.05), fueron necesarios tres animales por grupo en este protocolo.
  2. Aleatorizar (seis) ratas Wistar macho (220 ± 10 g) para recibir una inyección intraperitoneal (i.p.) de monocrotalina (60 mg/kg; grupo HAP, n = 3) o solución salina (1 mL/kg; Grupo CTRL, n = 3).
  3. El día 28, medir los parámetros cardiovasculares y sacrificar a los animales por exanguinación a través de una transección de la aorta abdominal.

2. Ecocardiografía

  1. Configuración del sistema de electrocardiografía
    1. Compruebe si el cable de alimentación está conectado correctamente al dispositivo y a la toma de corriente. Presione el botón POWER en el panel de control durante unos segundos hasta que se inicie el sistema.
    2. Asegúrese de que el transductor esté conectado correctamente.
    3. Seleccione PACIENTE de la base de datos para registrar la identificación del animal y comenzar el procedimiento.
    4. Apague el transductor pulsando el botón de congelación (figure-protocol-1) en el panel de control mientras prepara al animal para preservar la vida útil del dispositivo.
  2. Procedimiento de electrocardiografía
    1. Configurar la máquina de anestesia con isoflurano al 2,5% y descarga de oxígeno de 1 L/min.
    2. Coloque al animal en la cámara de la máquina de anestesia. Una vez que el animal esté sedado, coloque al animal en posición supina, fije las patas superiores a la mesa de cirugía con cinta adhesiva y coloque la máscara de la máquina de anestesia en el hocico del animal. Para evitar despertar al animal, asegúrese de cambiar el botón de alternancia de la máquina de anestesia de CÁMARA a MÁSCARA.
      1. Evaluar el nivel de anestesia mediante la evaluación del diámetro de la pupila, la posición y la respuesta a la luz; posición de la membrana nictitante; y movimiento en respuesta a la estimulación de la cola. Comience los experimentos cuando las respuestas a un estímulo de ruido (aplausos), así como la estimulación de los bigotes y la respuesta de pinzamiento de la cola, estén ausentes13.
    3. Use un vendaje de gasa con detergente y agua para humedecer el pelaje del pecho del animal anestesiado. Afeita el pelaje del pecho del animal con una cuchilla de afeitar conectada a las pinzas Kelly. Aplica una cantidad generosa de gel conductor en el pecho del animal.
    4. Presione el botón 2D en el panel de control.
    5. Coloque el transductor entre el tercer y el quinto espacio intercostal para adquirir el eje corto. Dirija el transductor hacia el hombro izquierdo del animal (ángulo de 90° en relación con el esternón), capturando una imagen transversal a nivel de la base del corazón, que permite la visualización del VD, la válvula aórtica, la válvula pulmonar y la aurícula izquierda (Figura 2A).
    6. Presione el botón de congelación (figure-protocol-2) en el panel de control para congelar la imagen y presione el botón de guardar (figure-protocol-3) en el panel de control para guardar la imagen.
    7. Cuando se encuentre el ángulo correcto, permanezca en esa posición y presione el botón de onda de pulso (PW) en el panel de control para obtener el modo Doppler espectral de onda pulsada (Figura 2B).
    8. Utilice la bola de seguimiento en el panel de control para mover el cursor amarillo (izquierda o derecha/arriba o abajo) en una pantalla y colóquelo sobre la válvula pulmonar.
    9. Presione el botón cinco (5) en el panel de control para obtener la curva de flujo sanguíneo a través de la válvula pulmonar.
      PASO CRÍTICO: Para obtener una buena imagen, asegúrese de que la curva sea intensamente blanca y que la acústica sea alta y clara.
    10. Coloque el transductor entre el tercer y el quinto espacio intercostal para adquirir el eje largo. Dirija el transductor hacia el hombro derecho del animal (ángulo de 45°-60° en relación con el esternón), capturando una imagen de la sección longitudinal, que permite la visualización del ventrículo izquierdo, el ventrículo derecho, la aurícula izquierda, la válvula mitral y la válvula aórtica (Figura 2C).
    11. Presione el botón de congelación (figure-protocol-4) en el panel de control para congelar la imagen y presione el botón de guardar (figure-protocol-5) en el panel de control para guardar la imagen.
    12. Presione el botón END EXAM en el panel de control para finalizar el experimento y guardar las imágenes en la base de datos del paciente.
  3. Análisis de datos
    1. Configuración del sistema de electrocardiografía:
      1. Compruebe si el cable de alimentación está conectado correctamente al dispositivo y a la toma de corriente. Presione el botón POWER durante unos segundos hasta que se inicie el sistema.
      2. Seleccione BUSCAR en una pantalla y elija el ID de animal respectivo de la base de datos para iniciar el análisis.
      3. Presione el botón SONOVIEW en el panel de control. Haga clic una vez dentro de la imagen en una pantalla para iniciar el análisis.
        NOTA: La imagen está delimitada por una línea de puntos. Esta línea debe ser continua después de hacer clic para iniciar el análisis.
      4. Con la bola de seguimiento, seleccione la imagen de eje corto en modo Doppler espectral de onda pulsada en la esquina derecha de la pantalla.
      5. Presione el botón de la calculadora (figure-protocol-6) en el panel de control y seleccione el parámetro frecuencia cardíaca (FC) en una pantalla. Con la bola de seguimiento, coloque la línea del cursor de pico a pico de dos curvas. Haga esto tres veces para obtener el valor promedio.
      6. Presione el botón de la calculadora (figure-protocol-7) en el panel de control; seleccione el parámetro válvula pulmonar (PV) y después el parámetro tiempo de aceleración de la válvula pulmonar (PV AccT/ET) en una pantalla. Con la bola de seguimiento, coloque la línea del cursor desde el inicio hasta el pico de la curva. A continuación, coloque la línea desde el principio hasta el final de la misma curva. Haga esto tres veces para obtener el valor promedio (Figura 3A).
      7. Guarde los datos pulsando el botón Guardar (figure-protocol-8) en el panel de control.
      8. Con la bola de seguimiento, seleccione la imagen del eje largo en la esquina derecha de la pantalla.
      9. Presione el botón de la calculadora (figure-protocol-9) en el panel de control; seleccione el parámetro tracto de salida del ventrículo derecho (RVOT) y después el parámetro diámetro del tracto de salida del ventrículo derecho (RVOT DIAM) en una pantalla. Con la bola de seguimiento, coloque el cursor de una pared del RV a la otra pared. Haga esto tres veces para obtener el valor promedio (Figura 3B).
      10. Guarde las imágenes con datos pulsando el botón Guardar (figure-protocol-10) en el panel de control.
      11. Transfiere las imágenes al disco duro externo. Seleccione BUSCAR en una pantalla y el ID de animal respectivo de la base de datos. Seleccione EXPORTAR en una pantalla y elija el disco duro externo.

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Figura 2: Ventana paraesternal de la ecocardiografía transtorácica. Imagen esquemática de la posición del transductor para la adquisición de imágenes transversales y una imagen representativa del eje corto en (A) modo 2D y (B) modo Doppler espectral de onda pulsada, y el eje largo (C). Abreviaturas: Ao = aorta; AV = válvula aórtica; CTRL = control; LA = aurícula izquierda; VI = ventrículo izquierdo; MV = válvula mitral; HAP = hipertensión arterial pulmonar; RA = aurícula derecha; VD = ventrículo derecho. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 3: Análisis de los datos de la ecocardiografía transtorácica. (A) Imagen representativa de la posición de la línea punteada para el cálculo de la relación PAT/PET, y (B) imagen representativa de la posición del conector para analizar el diámetro de salida del ventrículo derecho. Abreviaturas: FC = frecuencia cardíaca; PAT = tiempo de aceleración de la arteria pulmonar; PET = tiempo de eyección pulmonar; PV AccT = tiempo de aceleración de la válvula pulmonar; PV ET = tiempo de eyección de la válvula pulmonar; PV AccT/ET = relación entre el tiempo de aceleración de la válvula pulmonar y el tiempo de eyección de la válvula pulmonar; Diámetro del TSVI = diámetro del tracto de salida del ventrículo derecho; Área del TSVI = área del tracto de salida del ventrículo derecho. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

3. Presión sistólica del ventrículo derecho

  1. Preparación de la presión sistólica del ventrículo derecho
    1. Ventilador mecánico: Ajuste en el ventilador mecánico los siguientes parámetros: Fracción de oxígeno inspirado (FiO 2 ), 21%; volumen corriente, 8 mL/kg; frecuencia respiratoria, 70 lpm; y presión positiva al final de la espiración (PEEP), 3 cmH2O.
    2. Monitor y transductor de señal: Conecte el juego de venas del cuero cabelludo de 19 G utilizado para la punción a un monitor para que se pueda visualizar la presión.
    3. Procedimiento de puesta a cero para el transductor de presión del registrador fisiológico multicanal:
      1. Conecte el transductor de presión al cable hemodinámico adecuado y al canal del monitor multiparamétrico.
      2. Alinee el transductor de presión y la punta final de la vena del cuero cabelludo a una altura similar al tórax del animal.
      3. Presione el botón cero en la pantalla multiparamétrica. Mueva la vena del cuero cabelludo conectada al transductor de presión hacia arriba y hacia abajo, y verifique si los valores aumentan y disminuyen, respectivamente.
        PASO CRÍTICO: El conjunto de venas del cuero cabelludo debe llenarse con solución salina heparinizada para garantizar una transmisión adecuada de la señal. Evite las burbujas de aire en la línea para evitar interferencias en la señal.
    4. Procedimiento de calibración del transductor de presión del registrador fisiológico multicanal: Utilizando un esfigmomanómetro externo y analógico, compruebe si la presión aplicada en el transductor de presión es similar a la observada en la pantalla del monitor multipático. Si no es así, ajuste la ganancia del canal.
    5. Para una computadora con un sistema de adquisición dedicado abierto, configure el software:
      1. Abra el programa y haga clic en DataAcquisitionSystem en la pantalla. Esto abre la ventana donde se puede monitorear la señal de presión.
      2. En esta ventana, haga clic en la flecha blanca en una pantalla en la esquina superior izquierda.
      3. Aparecerá una ventana emergente que solicita la configuración; haga clic en Aceptar.
      4. En la nueva ventana, vaya a Canal físico y haga clic en Examinar.
      5. Con el botón CTRL de un teclado, seleccione todos los canales excepto 'ai7' y haga clic en Aceptar.
      6. Debajo de Canal físico, consulte Configuración de terminal de entrada establecida en predeterminada. Utilice las flechas laterales para cambiarlo a RSE y, a continuación, haga clic en Aceptar.
      7. Se abrirá una nueva ventana donde se puede verificar la adquisición de la señal y se puede calibrar la línea de base. Presione Cargar configuración, seleccione el archivo de configuración adecuado y, a continuación, presione Cargar señales en el lado derecho de la ventana.
      8. Espere de 5 a 10 segundos para que la señal aparezca en la pantalla. Una vez visible, haga clic en Señal 0, seleccione Señal 6 y, a continuación, haga clic en Línea base cero.
      9. Vaya al directorio de archivos y elija la ubicación en la que se guardarán los datos durante el experimento. Haga clic en Carpeta actual en la esquina inferior derecha.
      10. Ahora que todos los parámetros están configurados en el software, haga clic en Aceptar. Regrese a la ventana principal del programa y haga clic en Adquirir. El programa iniciará la adquisición de señales.
      11. En la esquina inferior derecha, seleccione la señal según la configuración (señal 6).
        NOTA: Asegúrese de que la señal en el monitor de la computadora coincida con la señal en el monitor del transductor y fluctúe cuando se mueva el conjunto de venas del cuero cabelludo. De lo contrario, resuelva los problemas de transmisión de la señal antes de continuar.
  2. Procedimiento de presión sistólica del ventrículo derecho
    1. Después de la ecocardiografía, administrar una combinación i.p. de 87,5 mg/kg de ketamina y 12,5 mg/kg de xilacina para anestesiar al animal.
    2. Una vez que el animal esté sedado, administrar 400 μL de lidocaína por vía subcutánea (s.c.) en la región traqueal.
  3. Traqueostomía
    1. Una vez que el animal esté sedado, colóquelo en posición supina y fije las patas superiores con cinta adhesiva a la mesa de cirugía en una fuente de calor para mantener la temperatura corporal (por ejemplo, una mesa quirúrgica con calefacción).
    2. Limpie el área de la garganta con alcohol al 70%. Luego, use un apósito de gasa con detergente y agua para humedecer el pelaje de la garganta del animal anestesiado. Afeita el pelaje de la garganta del animal con una cuchilla de afeitar conectada a las pinzas Kelly.
    3. Haga una incisión en la piel con pinzas de tejido con dientes y tijeras.
    4. Exponga la tráquea retrayendo la glándula submaxilar y diseccionando sin rodeos los músculos circundantes con pinzas de tejido con dientes y pinzas de Kelly curvas.
    5. Pase con cuidado una línea de sutura por debajo de la tráquea con pinzas Kelly curvas.
    6. Usando los extremos sueltos de la línea de sutura, levante la tráquea suavemente para una mejor visualización y haga un pequeño corte entre dos anillos de cartílago con una hoja de bisturí. Tenga cuidado con los anillos de cartílago para evitar cortar la laringe.
    7. Inserte la cánula de traqueostomía suavemente con la punta biselada hacia abajo y, después de colocarla correctamente, gírela hacia arriba, avanzando aproximadamente cinco anillos pero no más profundos.
      NOTA: Si la cánula de traqueostomía contiene mucosidad, es necesario exhalarla con una jeringa antes de conectarla al ventilador mecánico.
    8. Asegure la cánula con la línea de sutura, asegurándose de que permanezca en su lugar.
    9. Administrar 2 mg/kg de bromuro de pancuronio para paralizar los músculos del animal.
      NOTA: El bromuro de pancuronio se puede inyectar por vía intravenosa a través de un catéter de vena de cola o por vía intraperitoneal.
    10. Conecte el animal al ventilador mecánico, probado y configurado en modo de ventilación controlada por volumen.
    11. Con el animal traqueostomizado y conectado al ventilador mecánico, se procede a exponer el corazón.
  4. Cateterismo
    1. Limpie el área del pecho con alcohol al 70%. Luego, use un vendaje de gasa con detergente y agua para humedecer el pelaje del pecho del animal anestesiado. Afeita el pelaje del pecho del animal con una cuchilla de afeitar conectada a las pinzas Kelly.
    2. Para abrir la cavidad torácica, haga una incisión en la piel desde la base de la apófisis xifoides, deteniéndose a unos 0,5 cm por debajo del sitio de la traqueostomía.
    3. Corta los músculos intercostales internos y externos para exponer las costillas y el esternón.
    4. Exponga el corazón cortando el esternón con unas tijeras y use pinzas Kelly para sujetar cada lado de la cavidad torácica para un mejor acceso al tubo recreativo.
      NOTA: Siempre corte a lo largo del esternón para minimizar el sangrado excesivo, lo que podría afectar la visibilidad.
    5. El corazón está cubierto por el pericardio. Retire esta membrana delgada con pinzas para que se puedan diferenciar las cavidades del corazón.
    6. Ahora que el animal ha sido traqueostomizado, conectado al ventilador, y el corazón está expuesto, se procede a la punción del ventrículo derecho.
    7. Asegúrese de que la computadora esté encendida, que LabView esté abierto y que la línea de base esté configurada para la adquisición de señales antes de evaluar el RVSP. Localice el VD, tomando como referencia la rama interventricular de las arterias coronarias. Esta rama es visible e indica la posición del tabique interventricular, separando los ventrículos derecho e izquierdo.
    8. En el software, verifique que se haya iniciado la adquisición de la señal. Haga clic en el botón Guardar en una pantalla e ingrese la identificación del animal.
    9. Con el juego de venas de cuero cabelludo heparinizado de 19 g relleno de solución salina, punción ligeramente por encima del punto de referencia, asegurándose de que la aguja no se inserte demasiado profundamente.
      PASO CRÍTICO: La inserción excesiva de la aguja podría perforar el ventrículo izquierdo, produciendo presiones no relacionadas con la arteria pulmonar.
    10. Verificar la precisión de la punción mediante los valores de presión obtenidos: RVSP en animales control, 10-20 mmHg; RVSP en animales con hipertensión arterial pulmonar, hasta 60 mmHg; la presión adquirida >80 mmHg indica que probablemente la cánula alcanzó el ventrículo izquierdo (Figura 4B).
    11. Registre al menos 10 picos de onda de presión estable para garantizar la fiabilidad de los datos.
    12. Al final de la adquisición de la señal, administrar heparina al animal para la extracción de sangre mediante punción del ventrículo izquierdo o de la vena cava abdominal con una jeringa heparinizada.
      NOTA: La heparina se puede inyectar por vía intravenosa a través de un catéter de vena de cola o directamente en el ventrículo izquierdo.
    13. Después de la extracción de sangre, se practica la eutanasia del animal por exanguinación mediante el corte de la vena cava abdominal y se procede a la recolección de órganos para su posterior análisis.
    14. Guarde la señal en el directorio de archivos elegido al comienzo del experimento. Transfiera las imágenes al disco duro externo seleccionando los archivos en la carpeta de la computadora y copie/pegue los archivos .bin en un disco duro externo.

4. Análisis de datos

NOTA: Compruebe el código de rutina utilizado en MATLAB para analizar la señal del transductor para RVSP (Archivo complementario 1). Se desarrolló en base a las necesidades de este proyecto de investigación.

  1. Abra el programa, haga clic en el botón Buscar y pegar (figure-protocol-13) en la pantalla de MATLAB y seleccione el archivo en el disco duro interno del equipo que contiene el código adecuado.
  2. En la esquina izquierda de la pantalla de MATLAB, observe la lista de archivos que contienen los códigos de cada canal reconocido por el transductor.
  3. Elija el código para la configuración del canal que se eligió al principio del experimento para detectar la señal (canal 6).
  4. Presione el botón de ejecución (figure-protocol-14) y seleccione el archivo .bin en el disco duro externo para analizar.
    PASO CRÍTICO: En la esquina inferior derecha, cambie el tipo de archivo de Todos los archivos de MATLAB a Todos los archivos, de lo contrario, los archivos .bin no aparecerán.
  5. Seleccione la mejor área de la curva haciendo clic una vez al principio y otra al final. La mejor zona es la que tiene las curvas más homogéneas, con picos y valles visualmente iguales (Figura 4A).
  6. Seleccione 10 s de la curva haciendo clic una vez al principio (0 s) y una vez al final (10 s) (Figura 4A).
    NOTA: El eje X representa el tiempo en segundos y el eje Y representa la presión en mmHg.
  7. Ajuste la línea base restando el valor mínimo más bajo en la ventana de comandos y presionando ENTRAR en el teclado. El software genera todos los datos automáticamente (Figura 4A).
  8. Observe los datos presentados en dos columnas; El primero es el tiempo del pico y el segundo es el valor del pico (presión).
    NOTA: Las curvas obtenidas de la punción representan las presiones sistólica (pico) y diastólica (valle) del VD. El análisis de MATLAB presenta ambos valores.
  9. Copia y pega los datos de la presión sistólica en un fichero .txt y borra los valores referentes al tiempo.
  10. Cambie todos los puntos a comas en el archivo .txt para poder obtener el promedio.
  11. Seleccione 10 valores de presión máxima y promedie.

figure-protocol-15
Figura 4: Análisis de los datos de presión sistólica del ventrículo derecho. (A) Imágenes representativas de los pasos para seleccionar áreas de la curva durante el análisis. (B) El ejemplo de una curva muestra un pico de aproximadamente 80 mmHg, lo que indica que la punción fue lo suficientemente profunda como para alcanzar el ventrículo izquierdo. Después de retirarse suavemente, alcanzó la cavidad del ventrículo derecho. Se puede ver en la curva que aparece en el primer escalón. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

5. Índice de hipertrofia ventricular derecha

  1. Procedimiento
    1. Al comienzo del protocolo experimental, mida el peso corporal del animal.
    2. Después de medir el RVSP, eutanasiar al animal por exanguinación y extraer los órganos de la cavidad torácica en bloque para separar el corazón del animal eutanasiado.
    3. Diseccionar los vasos de la base del corazón (aorta, arteria pulmonar, vena cava y venas pulmonares).
      PASO CRÍTICO: Tenga cuidado de evitar diseccionar las aurículas derecha e izquierda.
    4. Seque el corazón con una gasa y registre el peso del corazón entero seco medido en la balanza de precisión.
    5. Disecciona las aurículas izquierda y derecha y deséchalas.
    6. Separe el RV del VI asociado con el S.
    7. Seque cada componente, diseccione con gasa y registre el peso del RV y el LV + S medido por separado en la balanza de precisión.
  2. Análisis de datos
    1. Calcular el índice de hipertrofia ventricular derecha como índice de Fulton, que permite evaluar la hipertrofia del VD comparando el peso de la pared libre del VD con el peso de las paredes VI+S corregido por el peso corporal:
      figure-protocol-16
      NOTA: Índice de Fulton en animales control, hasta 0,4 mg; Índice de Fulton en animales con HAP, >0,4 mg.

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Resultados

Para los análisis estadísticos, se comprobó la normalidad y la varianza de cada variable mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Los datos se presentan como medias ± desviación estándar. Se utilizó la prueba t no apareada para comparar las concentraciones de partículas en los grupos control (CTRL) e hipertensión arterial pulmonar (HAP) (p<0,05).

Alteraciones ecocardiográficas en el modelo animal de HAP
En la Figura 4 se observa que la ...

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Discusión

La HAP es una enfermedad progresiva caracterizada por un remodelado vascular excesivo, que promueve un aumento de la resistencia vascular pulmonar, lo que resulta en un aumento de la poscarga del VD14. En consecuencia, la RVSP representa una variable funcional que se correlaciona directamente con la gravedad de la HAP15. Con el tiempo, la respuesta adaptativa del VD es la hipertrofia concéntrica compensatoria (medida por el índice de Fulton...

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Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.

Agradecimientos

Los autores agradecen al Sr. André Benedito da Silva por su apoyo con los experimentos, a la Sra. Verônica Cristina dos Santos Lima por el cuidado de los animales y a la Sra. Lorna O'Brien por la revisión de la gramática inglesa. Este estudio contó con el apoyo de la Fundación de Investigación del Estado de Río de Janeiro (FAPERJ E-26/202.766/2018, E-26/010.001488/2019).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Reactivos
Alcohol 70%MontenegroALC70-001
Gel conductor MercorCG-002
Solución salina (NaCl 0,9%)BioPharmaSAL-009
Instruments
19 G juegode venas del cuero cabelludoDescarpackSVS-19G
Pinzas curvasKelly ABC instrumentos cirúrgicosCKF-003
PinzasKelly ABC instrumentos cirúrgicosKF-004
Agujas (18, 22 y 26 G)DescarpackNDL-MIX
Placa de PetriGlassLabPD-150
Cuchilla de afeitarABC instrumentos cirúrgicosRB-005
BisturíABC instrumentos cirúrgicosSC-006
TijerasABC instrumentos cirúrgicosSCIS-007
Línea de suturaABC instrumentos cirúrgicosSUT-008
Jeringas (1, 3 y 5 ml)DescarpackSYR-135
Pinza MedTechTC-010
ABC instrumentos cirúrgicosTWZ-011
Drugs
dextroketamina 5%Cristá liaDXT-00587,5 mg/kg intraperitoneal
Isoflurano 1 mL/mL 240 mLCristá liaISO-2402.5% solución para inhalación
Clorhidrato de lidocaína 1%Cristá liaLID-001400 µ L subcutáneo localmente
MonocrotalinaSigma-AldrichC240160 mg/kg intraperitoneal
Bromuro de pancuronio 2 mg/mLCristá liaPAN-0022 mg/kg heparina sódica intravenosa
5000 UI/mLCristá liaHEP-5000diluido 1:4 en 1 ml de
clorhidrato de xilacina 2%SyntecXYL-00212,5 mg/kg intraperitoneal
Equipment
GraphPad Prism 9GraphPad Software, IncGP9
Monitor veterinario multiparamétrico en red LifeWindow 9xDigicare Animal HealthLW9x
Software LabViewNational Instruments, Corp.LV-2019
MATLAB R2019a (Versión) softwareThe MathWorks, Inc.MATLAB-2019
Monitor y transductor de señalMedTechMST-015
Báscula de precisiónSartoriusPS-020
R540 Ratones& Máquina de anestesia para animales de rataRWD Life Schience Co., LTDR540-ANA
ScaleOhausSCL-025
Servo-i ventilador mecánicoGetinge ABSERVO-IFiO2 = 21%; volumen corriente = 8 ml/kg, frecuencia respiratoria = 70 lpm y PEEP = 3 cmH2O
SonoVer softwareSONOTEC Ultraschallsensorik Halle GmbHSV-2020
Sistema UGEO HM70A Samsung Eletrô nica da Amazô nia LTDAHM70A
G*Power 3.1.9.7Universidad de Dü sseldorf, Alemaniagpower
Cánula de traqueotomía Clorhidrato de

Referencias

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