El amarillo de hidroxisafflor A atenúa la toxicidad inducida por LPS en las neuronas dopaminérgicas del pez cebra mediante la regulación de la vía de señalización TLR4/NF-ĸB

Resumen

Este protocolo tiene como objetivo probar si el amarillo de hidroxisafflor A (HSYA) atenúa la neurotoxicidad inducida por LPS en el pez cebra. La función motora se evaluó mediante un sistema de visión visual. La lesión del nervio dopaminérgico se examinó mediante inmunohistoquímica. Las moléculas implicadas en la vía TLR4/NF-κB se analizaron mediante Western blot.

Resumen

La inflamación inducida por lipopolisacáridos (LPS) desempeña un papel crucial en el desencadenamiento y la perpetuación de las enfermedades neurodegenerativas, incluida la enfermedad de Parkinson (EP). El amarillo de hidroxisafflor A (HSYA) es el componente principal de Carthamus tinctorius L. Este estudio tiene como objetivo observar si HSYA podría mejorar la toxicidad inducida por LPS en las neuronas dopaminérgicas del pez cebra. Los peces cebra fueron expuestos a LPS y luego tratados con HSYA. Se realizaron pruebas de comportamiento para evaluar la función motora del pez cebra. Se examinó la lesión neuronal dopaminérgica y el nivel de dopamina. También se midieron TLR4, NF-κB, IL-1β y TNF-α. Demostró que el LPS (60 μg/mL, concentración final) inducía toxicidad en el pez cebra y causaba disfunción motora y daño a las neuronas tirosina hidroxilasa (TH) positivas. La exposición a LPS no solo disminuyó el contenido de dopamina, sino que también aumentó los niveles de IL-1β, TNF-α y la expresión de TLR4 y NF-κB. La HSYA mejoró la disfunción motora inducida por el LPS. Además, HSYA atenuó la pérdida de neuronas TH-positivas, que se acompañó de un aumento en el contenido de dopamina. El tratamiento con HSYA también inhibió la expresión de TLR4, NF-κB y la producción de IL-1β, TNF-α. En conclusión, este estudio demuestra que HSYA atenúa la lesión inducida por la inflamación en las neuronas dopaminérgicas del pez cebra mediante la regulación de la vía TLR4/NF-κB, que proporciona una base experimental para la prevención de la lesión inflamatoria en la EP.

Introducción

La patogenia de la enfermedad de Parkinson (EP) es el deterioro de la actividad motora debido a la lesión de las neuronas dopaminérgicas en el cerebro. Las manifestaciones de la EP incluyen disfunción motora, incluyendo temblor en reposo, bradicinesia, inestabilidad postural y tono muscular. Los niveles de citocinas en el líquido cefalorraquídeo y en las regiones cerebrales nigrostriatales post-mortem de los individuos con EP están elevados en comparación con los controles sanos de la misma edad¹. Los mecanismos por los cuales la lesión neuronal dopaminérgica es causada por la inflamación han sido bien establec....

Protocolo

Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las Directrices de los Institutos Nacionales de Salud para el Uso de Animales de Laboratorio (Publicación 86-23, revisada en 1986). Y este estudio fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Yantai (YTDX20220623). Los reactivos y el equipo utilizado en este estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Mantenimiento del pez cebra

El pez cebra de la cepa AB (Danio rerio) se mantuvo en un sistema de recirculación de agua a una temperatura del agua de 27-28,5 °C (p....

Resultados

Efectos del LPS en la función motora del pez cebra
La velocidad media, la distancia total y la aceleración máxima del pez cebra en los grupos LPS (60 μg/mL y 90 μg/mL) se redujeron (P < 0,01) en comparación con el grupo control. La disfunción motora también se manifestó como cambios frecuentes en la dirección del movimiento. El ángulo de giro absoluto de la natación del pez cebra en los grupos LPS 60 μg/mL y LPS 90 μg/mL aumentó significativamente (P

Discusión

Las plantas medicinales tienen un largo historial de aplicaciones antiinflamatorias y neuroprotectoras¹⁴. Nuestros estudios previos mostraron que HSYA tenía un efecto protector en modelos animales de EP inducidos por agentes neurotóxicos. Utilizando la toxicidad inducida por LPS en el pez cebra, este estudio demuestra que HSYA atenúa la lesión inducida por la inflamación en las neuronas dopaminérgicas del pez cebra mediante la regulación de la vía de señalización .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Kit de medición de concentración de proteínas BCA	Beyotime Biotechnology	P0012S Sistema de
	Beijing Sage Venture Technology Co.	ChampChemi 910
Clorhidrato de dopamina	Sigma– Aldrich	PHR1090
Balanza electrónica	Shanghai OHAUS Instrument Co.	Kits ELISA AR-2140
para IL-1 y beta;	Kits ELISA de COIBO Biotechnology	CB10018-FI
para TNF-α	COIBO Biotechnology	CB10148-FI
GAPDH anticuerpo	Tecnología de señalización celular	5174S
GraphPad Prism 5.0	Software estadístico GraphPad, Boston, MA, EE. UU., www.graphpad.com	Prism 5.0
Cromatografía líquida de alto rendimiento– detección electroquímica (HPLC– ECD)	GL Sciences, Ibaraki, Japón	ED723
Centrífuga de congelación de alta velocidad	Beijing Dalong Xingchuang Experimental Instrument Co.	D3024R
HPLC– ECD	GL Sciences	ED723
HSYA	Luye Pharma Group Ltd.
Image Quant	GE Healthcare, Tokio, Japón	LAS 4000
Lamin B1 anticuerpo	Tecnología de señalización celular	13435S
LPS	Sigma– Microscopio Aldrich	L2630
	Leica, Wetzlar	DM1000LED
Microscopio	Leica, Alemania	DM1000LED
Etiquetadora de enzimas multifuncional	Shanghai Meigu Molecular Instrument Co.	SpectraMax Paradigm
NF-κ Tecnología	de señalización celular	8242S
Sistema Noldus Visual Vision XT	Beijing Noldus Biotechnology Co., Ltd.	EthoVision XT15
Kit de extracción de proteínas nucleares y citoplasmáticas	Beyotime Biotechnology	P0028
PMSF	Beyotime Biotechnology	ST506
TAK-242	Merck	614316
Termostato	Shenzhen Galaxy Instrumentation Co.
Anticuerpo TLR4	Abcam	ab13556
Pez cebra	Centro del Norte para National Pez cebra Model Animals	AB cepa
Sistema de recirculación de agua de pez cebra	Beijing Aisheng Biotechnology Co., Ltd.	ESEN-AW-S1

imágenes quimioluminiscentes LY202206 de anticuerpos B 12810129