Establecimiento y evaluación de un modelo ovino de defecto osteocondral de espesor completo

Resumen

Aquí presentamos un protocolo integrado para generar lesiones osteocondrales controladas en rodillas de oveja con el fin de establecer un modelo experimental adecuado para estudios de regeneración de tejido óseo y cartílago. El protocolo describe un método para inducir un defecto osteocondral de grosor completo en el cóndilo femoral, utilizando técnicas que minimizan los impactos en el bienestar animal y la variabilidad en los resultados.

Resumen

El envejecimiento, el trauma, la predisposición genética y el estilo de vida afectan a la degradación del cartílago del cuerpo humano. Una vez lesionado, los insultos continuos derivados de las actividades diarias pueden desencadenar enfermedades patológicas como la osteoartritis, la principal causa de discapacidad y pérdida socioeconómica a nivel mundial. El objetivo principal de todos los cirujanos ortopédicos que tratan lesiones del cartílago articular ha sido reducir la extensión anatómica de la lesión, reparar la superficie del cartílago y restablecer la estabilidad articular. Los modelos animales son esenciales para el desarrollo de fármacos terapéuticos, pero los modelos actuales para defectos de cartílago son insatisfactorios. Las lesiones osteocondrales en ovejas son un modelo valioso para probar nuevas terapias y biomateriales que pueden ayudar en la recuperación del cartílago y el hueso en ambientes articulares humanos. Este estudio estableció un protocolo eficiente para inducir defectos osteocondrales agudos en animales de gran tamaño. Se creó una lesión estandarizada en ambos cóndilos femorales mediales. Una rodilla fue asignada aleatoriamente para recibir tratamiento con gelatina-metacriloilo, mientras que la rodilla contralateral sirvió como control. Seis meses después de la intervención, se extirpó la zona del cóndilo femoral, se descalcificaron las articulaciones de la rodilla diseccionadas, se incrustaron en parafina y se cortaron en secciones, que se teñieron con hematoxilina y eosina. Se utilizaron puntuaciones para evaluar la lesión. Esta metodología permite la observación macroscópica inmediata tras la inducción de la lesión. Además, este modelo replica eficazmente los defectos clínicos del cartílago, proporcionando un valioso modelo para estudiar su patología y desarrollar enfoques terapéuticos innovadores.

Introducción

El cartílago es esencial para preservar la competencia mecánica del sistema esquelético al proporcionar una superficie sin fricción entre los huesos en las articulaciones diartródiales, evitando así la erosión de la superficie^{articular 1}. La capacidad del cartílago para realizar estas exigentes funciones mecánicas depende en gran medida de la composición y organización únicas de su matriz extracelular, especialmente de su excepcionalmente alto contenido de agua. El agua desempeña un papel crucial en la estructura y función del cartílago articular, representando aproximadamente el 70-80% de su composición. El agua es el elemento principal responsable de la carga durante la compresión. La capacidad del tejido para resistir las fuerzas de compresión depende de cómo está estructurada y restringida el agua dentro de la matriz. Esta organización es posible mediante la interacción del agua con las principales macromoléculas del cartílago, como el colágeno y los proteoglicanos, especialmente los agregados unidos al ácido^{hialurónico 1}. Estas actúan como estructuras de contención que ordenan y limitan el movimiento del agua. Esta interacción proporciona al tejido no solo rigidez, sino también resiliencia y la capacidad de recuperarse tras la deformación. La interacción entre el agua libre, el agua unida y la matriz macromolecular constituye el núcleo del comportamiento biomecánico^{del cartílago 2}.

A pesar de su notable capacidad para soportar y distribuir las cargas físicas y mecánicas que llegan a las articulaciones, una vez lesionado, el cartílago articular (CA) tiene un potencial limitado para la reparación espontánea debido a la baja actividad mitótica de los condrocitos y la deficiente vascularización^{tisular 2}. El daño articular suele estar asociado a la pérdida progresiva de moléculas y proteínas de la matriz extracelular (MEC), que constituyen el 95% del tejido y confieren características biomecánicas a la AC³. Un desequilibrio entre la síntesis y degradación de los componentes de la MEC, que se desplaza hacia procesos catabólicos, puede dar lugar a la osteoartritis (OA), la enfermedad degenerativa articular más prevalente en todo el mundo. La osteoartritis afecta aproximadamente al 10-12% de la población adulta, causando dolor, limitando la movilidad y reduciendo notablemente la autonomía de los^{pacientes 4}. La osteoartritis es más prevalente en poblaciones envejecidas debido a los insultos acumulados en la articulación a lo largo de la vida; sin embargo, se han asociado diversos factores de riesgo con el inicio de la condición clínica, como el género, la predisposición genética, la obesidad y los hábitos^{diarios 4}. Hasta ahora, los enfoques terapéuticos para tratar la artrite se han centrado en el manejo clínico de los síntomas y la sustitución total de las articulaciones en los casos más^graves. Sin una estrategia terapéutica robusta, reproducible y fiable para tratar eficazmente la artrosis, se están estudiando enfoques innovadores para comprender y abordar los problemas asociados a la lesión del cartílago articular.

Para reparar, regenerar y mejorar el movimiento articular en las articulaciones artríticas, el progreso en medicina regenerativa ha surgido como una nueva esperanza para restaurar el CA^{dañado 6,7}. El uso de condrocitos autólogos combinado con la implantación de ECM e inyección intraarticular de células madre representa el estado actual de la arte en este^{ámbito 8,9,10}. El principal desafío de estos enfoques es asegurar una diferenciación adecuada y la síntesis funcional de ECM por parte de células implantadas. Los condrocitos autólogos tienden a formar fibrocartílago o progresar a un estado hipertrófico, creando nuevo tejido disfuncional que no recapitula las características fisiológicas del CA, lo que conduce a una recuperación incompleta y a menudo a un deterioro^{tardío 11}. Los biomateriales pueden utilizarse para guiar el comportamiento celular durante la regeneración tisular, proporcionando un andamiaje temporal para que las células se adhieran y sintetizen una nueva matriz extracelular^{natural y funcional 12,13,14}. El biomaterial ideal para la ingeniería del cartílago debe asegurar una fuerte integración con los tejidos circundantes, especialmente el hueso subcondral, ya que la falla en esta interfaz compromete la reparación a largo plazo. Sin embargo, la débil unión entre las capas de cartílago y hueso de los andamios osteocondrales y la mala integración con el tejido huésped siguen siendo grandes^{retos 15}. Aunque los andamios intentan imitar la arquitectura osteocondral nativa, reproducir la compleja microestructura de la interfaz sigue siendo difícil. Esto refuerza la importancia de la investigación y desarrollo de andamios con propiedades biológicas que puedan apoyar simultáneamente la regeneración de cartílago y hueso, manteniendo la estabilidad de la interfaz¹⁶. La gelatina, derivada del colágeno —un componente clave del tejido cartílago— posee propiedades como motivos de unión celular y biodegradabilidad, lo que sugiere su potencial como biomaterial de apoyo cuando se combina con factores regenerativos para el tratamiento de lesiones osteocondrales. Cuando se modifica químicamente con anhídrido metacrílico para formar gelatina metacriloilo (GelMA), se vuelve fotocruzable, permitiendo la inyección y la fotopolimerización in situ, lo que mejora la estabilidad mecánica para aplicaciones en medicina^{regenerativa 17}.

Las lesiones osteocondrales tienen una capacidad regenerativa limitada, lo que representa un desafío clínico. Las investigaciones preclínicas que emplean modelos animales grandes de lesiones articulares de rodilla son esenciales para la investigación traslacional porque permiten una evaluación sistemática de variables que afectan los mecanismos de la enfermedad y los resultados terapéuticos. Las especies más utilizadas incluyen cerdos, cabras, perros, caballos y ovejas, cada una presentando ventajas y limitaciones específicas que deben considerarse en el diseño experimental. Además, todas estas especies presentan una reparación endógena limitada de defectos condrales y osteocondrales, como se observó en^{humanos 18}. Para garantizar que estos modelos sean predictivos de los resultados humanos, deben reproducir parámetros relevantes como anatomía, fisiología y propiedades^{biomecánicas 18}. Para comparar, el grosor del cartílago articular humano en los cóndilos femorales varía entre 1,8 y 2^{mm 19}, y el diámetro de las lesiones cartílagoas que normalmente requieren tratamiento es de 10 mm o^{más 20}.

El modelo porcino ofrece ventajas para estudios de cartílago y regeneración osteocondral, ya que el tamaño de las articulaciones, el grosor del cartílago y los requisitos de carga de peso se asemejan mucho a los observados en^{humanos 18}. Algunas razas de cerdos miniatura, como el minipig de Göttingen, son fáciles de manejar y alcanzan la madurez esquelética entre los 18 y 22 meses^{de edad.} Su grosor de cartílago varía de 1 a 2 mm, y pueden formarse defectos de 6 a 8 mm en¹⁸ mm. Las características óseas, incluyendo el grosor trabecular, la tasa de aposición ósea y la organización de las fibras de colágeno, son comparables a las de los humanos^. Sin embargo, el modelo porcino también tiene limitaciones: incluso en razas en miniatura, la articulación de la rodilla (stifle) es más pequeña que en humanos, lo que limita la creación de grandes defectos experimentales. Además, la mayoría de los estudios utilizan animales esqueléticamente inmaduros debido a los costes de mantenimiento asociados, lo que puede sobreestimar el potencial de^{reparación 23}.

Las cabras presentan anatomía articular, biomecánica y grosor de cartílago como los humanos²⁴. No requieren instalaciones especializadas, son fáciles de manejar y son relativamente^{baratas 25}. El grosor del cartílago de cabra oscila entre 0,8 y 2,0 mm, y el tamaño de defecto crítico más reportado es de 6^{mm 26}. Sin embargo, existe una variación significativa en el grosor del cartílago entre razas, tamaños y sexos, lo que puede dar lugar a resultados^{inconsistentes 27}. La proporción de cartílago a hueso subcondral, así como la estructura ósea trabecular también son comparables a las de los humanos²⁸. La madurez esquelética ocurre relativamente tarde, entre los 24 y 36 meses de edad^{de los 29} años. Desde un punto de vista biomecánico, la rodilla de la cabra experimenta presiones articulares y cargas cíclicas similares a las de los humanos^, aunque la flexión de la rodilla durante la marcha es mayor (50°-70° en cabras frente a <30° en humanos), lo que resulta en áreas de contacto^{distintas 30}. Esta diferencia, combinada con presiones máximas más altas, puede contribuir a una reparación del cartílago menos^{eficiente 30}.

Entre los modelos animales de gran tamaño, los perros destacan por su capacidad para tolerar regímenes de rehabilitación, inmovilización articular y entrenamiento para caminar en cinta, natación y ejercicios controlados de carga¹⁸. El grosor del cartílago articular varía entre 0,9 y 1,3 mm, y el tamaño crítico del defecto es aproximadamente 4 mm, limitando la comparación directa con el modelo^{humano 25}. La madurez ósea ocurre entre los 8,5 y 13,7 meses de edad^{a los 31} años. Anatómicamente, la rodilla canina difiere de la rodilla humana, y las variaciones en biomecánica, patrones de carga y madurez entre razas complican la extrapolación de los^{resultados 32}. A pesar de estas diferencias anatómicas y del pequeño tamaño del defecto, el modelo canino sigue siendo valioso para estudios que incluyen protocolos de rehabilitación o patologías espontáneas del cartílago similares a las humanas. Sin embargo, su uso experimental está restringido por consideraciones^{éticas 29}.

El modelo equino es el modelo animal más grande disponible para la investigación en reparación del cartílago y desarrolla de forma natural lesiones condrales relacionadas con la edad o traumatismos y osteoartritis similares a las de los humanos³³. Los caballos presentan características anatómicas y biomecánicas comparables a las humanas, como una articulación de rodilla erguida, tamaño articular grande, grosor del cartílago entre 2 y 3 mm más cercano al cartílago humano — extensión completa de rodilla durante la marcha, y densidad mineral^{ósea comparable 34}. La madurez esquelética ocurre entre los 24 y 48 meses, y los tamaños de defectos comúnmente estudiados oscilan entre 6 y 20^{mm 32,33}. Las limitaciones incluyen la alta carga vertical sobre la articulación de la sofocante equina durante la locomoción, que expone los implantes a fuerzas mayores que en humanos y dificulta la curación a largo^{plazo 35}. Además, los costes de adquisición y mantenimiento son elevados, y se requieren instalaciones^{especializadas 36}.

Las ovejas se utilizan ampliamente como modelo en estudios de reparación de cartílago debido a su disponibilidad, temperamento dócil, buena tolerancia a la cirugía articular y facilidad de manejo³⁷. La madurez ósea en las ovejas suele alcanzarse aproximadamente a^{los 2-3} años de edad. Además, la rodilla ovina muestra similitudes anatómicas y biomecánicas con la articulación humana^{de la rodilla 38}. El grosor del cartílago en el cóndilo femoral medial varía entre 0,7 y 1,7 mm, y la densidad mineral ósea y las presiones de contacto también son comparables, aunque la fracción de volumen óseo es mayor en la^{oveja 39}. Debido a la reducción del grosor del cartílago, los defectos inducidos suelen extenderse al hueso subcondral, lo que hace que este modelo sea más adecuado para estudios de defectos^{osteocondrales.} Lesiones de 6 a 8 mm de diámetro suelen formarse en lugares como los cóndilos femorales y el^{trocleo 32}. Además, el modelo ovino ofrece ventajas para estudios bilaterales, permitiendo la comparación de sitios tratados y de control dentro del mismo animal, reduciendo así la variabilidad relacionada con el hospedador, mejorando la consistencia y reproducibilidad, y minimizando el número de animales necesarios^{para 40}. Cada modelo presenta diferentes grados de similitud con la fisiología y biomecánica humanas. Por lo tanto, la selección del modelo debe equilibrar la relevancia biológica, la viabilidad práctica y las consideraciones éticas. En el presente estudio, se incluyeron ovejas nulíparas de 12 meses, evaluadas durante el periodo estacional del anestro.

Este estudio buscó diseñar un protocolo eficaz para generar defectos osteocondrales agudos en animales de gran tamaño. El protocolo consiste en crear una lesión osteocondral de espesor completo para establecer un modelo adecuado para estudios de medicina regenerativa. Además, se explora la aplicación del hidrogel GelMA como guía para la curación de tejidos y como un método prospectivo para la entrega de moléculas y células regenerativas. El protocolo detalla el procedimiento quirúrgico para crear lesiones osteocondrales en el cartílago articular de la rodilla de la oveja. Es adaptable a diversas aplicaciones de ingeniería de tejidos, incluyendo la inducción de lesiones similares en otros modelos de animales grandes para la medicina regenerativa.

Protocolo

El estudio recibió la aprobación del Comité de Ética en Investigación y fue certificado con un Certificado de Presentación Ética numerado 6092250823/2023. En el presente estudio, se seleccionaron nueve ovejas White Suffolk de 12 meses de edad. El defecto se creó en ambos cóndilos femorales mediales de cada animal. Se usaban defectos vacíos como controles. Cada animal tuvo una rodilla asignada aleatoriamente a tratamiento con GelMA y la otra como control. Esta estrategia nos permitió evaluar la capacidad regenerativa natural y reducir el impacto de variaciones individuales, como factores genéticos y madurez ósea. Se siguió a los animales durante 6 meses para evaluar la formación del cartílago hialino.

1. Procedimiento anestésico

1. Privar a los animales de comida y agua durante aproximadamente 24 horas antes de la cirugía.
2. Premedicar a los animales con meperidina intramuscular 4 mg/kg combinada con midazolam 0,3 mg/kg.
3. Llena el vaporizador anestésico un día antes de usarlo, con la habitación vacía, y lleva guantes protectores para minimizar el riesgo de exposición laboral.
4. Revisa el circuito anestésico en busca de fugas antes de cada procedimiento y realiza todas las manipulaciones en un área bien ventilada, siguiendo las directrices de bioseguridad institucional.
5. Después de 15 minutos, canular a los animales con un catéter de 18 g y administrar la solución de Ringer lactado a una dosis de 10 mL^∙kg-1∙^h-1.
6. Administrar anestesia intravenosa usando propofol al 1% con una dosis de 4 mg/kg.
7. Intuba a los animales con un tubo endotraqueal manguito de 7,5-8,0 mm y mantenlos bajo ventilación espontánea mediante un sistema respiratorio circular semicerrado que suministra oxígeno a un FiO₂ de 1,0 y un caudal de 50 mL/kg.
8. Utilizar la técnica de anestesia intravenosa parcial (PIVA), mantener el propofol como una infusión continua a 0,1 mg∙^{kg-1 min-1}, y ajustar solo la concentración de isoflurano para lograr un plano quirúrgico adecuado de anestesia. Controla la profundidad de la anestesia durante todo el procedimiento.
9. Realizar bloqueos perineurales de los nervios femoral y ciático, guiados por un neurolocalizador. Administrar 0,2 mL/kg de lidocaína al 2% por cada bloqueo.
   NOTA: La cirugía solo debe comenzar una vez confirmada que el animal está bajo anestesia quirúrgica (sin respuesta a un pellizco firme en las pezuñas ni tono mandibular).

2. Procedimiento quirúrgico in vivo

1. Desinfecta la rodilla rapada usando gluconato de clorhexidina antiséptico tópico y coloca al animal en la posición de decúbito dorsal en la sala de operaciones.
2. Localiza la cavidad articular tocando la rodilla del animal para determinar el lugar exacto de la incisión. Realizar una incisión cutánea doble curva (comenzando distal respecto al epicóndilo femoral lateral y terminando medialmente a nivel de la tuberosidad tibial).
3. Identifica el tendón rotuliano, la rótula, el ligamento rotuliano y la porción medial de la cápsula articular. Incire la cápsula para exponer el cóndilo femoral medial. Hiperflexiona la rodilla para visualizar la región más distal del cartílago articular del cóndilo.
4. Realizar una incisión quirúrgica de aproximadamente 3-5 cm en la región del cóndilo del animal. Retira las capas de tejido que quedan debajo de la piel para acceder al cóndilo y mantén limpia la zona de la incisión para evitar contaminaciones.
5. Recoge el líquido sinovial usando una jeringuilla y una aguja. Transfiere parte de la muestra a un tubo EDTA para su análisis y utiliza el material restante para preparar las láminas de frota.
6. Coloca los retractores para exponer completamente la superficie condilar. Cuanto más expuesto esté el cóndilo, más fácil será inducir una lesión en el siguiente paso.
   NOTA: En este momento, ten cuidado con la pata del animal. La flexión o extensión de la rodilla puede ayudar a exponer el cóndilo.
7. Perforar un defecto de 8 mm de diámetro y 5 mm de profundidad en el centro del cóndilo femoral medial usando un taladro ortopédico equipado con una broca de tráfina de 8 mm, asegurando una alineación adecuada para evitar dimensiones o formas no deseadas, y manteniendo un ángulo de 0° respecto a la región más distal del cartílago articular.
   NOTA: Realizar la trepanación a la menor velocidad posible, operando suavemente el control del taladro y usando solo la rotación necesaria para cortar el cartílago y el hueso subcondral, además de realizar enfriamiento local con 0,9% de NaCl a temperatura ambiente, incluso a baja velocidad.
8. Realizar la extracción quirúrgica del tapón osteocondral utilizando el martillo ortopédico y el osteotomo.
9. Limpia la extensión de la herida con gasas estériles, asegurando que el interior de la lesión esté libre de sangre y restos de tejido.
10. Aplicar 200 μL de la formulación líquida de GelMA al 20% (p/v), que contiene 0,25% (p/v) de fenil-2,4,6-trimetilbenzilfosfinato (LAP) como fotoiniciador, en el interior de la lesión hasta que llegue a la superficie.
11. Fotocruza el hidrogel GelMA bajo un LED de 395-405 nm (9 W de potencia total) situado aproximadamente a 5 cm de la muestra durante 180 s. Bajo estas condiciones, la irradiancia estimada en la superficie es de ~10 mW/cm², lo que resulta en una energía total de exposición de aproximadamente 1,8 J/cm².
    NOTA: Utiliza gafas protectoras cuando uses luz ultravioleta.
12. Quita los separadores con cuidado.
13. Cierra la lesión con suturas independientes en las diferentes capas tisulares para evitar la formación de seroma. El número de suturas necesarias dependerá de la extensión de la incisión quirúrgica.
14. Aplica una venda estéril en las suturas para prevenir infecciones.

3. Cuidados postoperatorios

1. Vigila a los animales durante la recuperación anestésica, incluyendo signos vitales como la frecuencia cardíaca (70-90 pulsos/min), la frecuencia respiratoria (12-20 respiraciones/min), la temperatura corporal (39 °C a 40,5 °C) y las mucosas normales, con un tiempo de recarga capilar de 1-2 s. Palpar regularmente las arterias facial y femoral para comprobar si el pulso es fácilmente perceptible.
   NOTA: La recuperación anestésica debe realizarse en un entorno tranquilo, limpio, cálido y acolchado, con poca iluminación y bajo nivel de ruido.
2. Realizar apósitos quirúrgicos utilizando penicilina tópica (penicilina benzatina G: 1.250.000 UI; procaína penicilina G: 1.250.000 UI; sulfato de dihidroestreptomicina: 1,25 g; urea: 2,50 g), una vez al día durante 10 días.
3. Asegúrate de que los animales permanezcan en posición cuadrúpedo inmediatamente después de despertar de la anestesia, apoyes peso en la extremidad operada y no muestren signos de molestia.
4. El analgesia postoperatorio consistió en meloxicam (0,4 mg/kg cada 24 horas) y tramadol (2 mg/kg cada 12 horas) durante 5 días. Se administró una dosis adicional de rescate de tramadol cuando se identificaron expresiones faciales relacionadas con el dolor utilizando la Escala⁴¹ de Grimacias de Oveja, una herramienta validada basada en unidades específicas de acción facial (incluyendo el tensión orbital, la respuesta de Flehmen, la posición de la oreja y la posición de la cabeza) para evaluar el dolor y la angustia postoperatoria en ovejas.

4. Análisis histológico

1. Seis meses después de la cirugía, realizar la eutanasia. Para lograr una sedación profunda antes de administrar el agente de eutanasia, se premedica a los animales por vía intravenosa con ketamina (10 mg/kg) y xilazina (1 mg/kg), utilizando dosis intencionadamente superiores a las normalmente recomendadas para procedimientos clínicos para asegurar un inicio rápido de sedación profunda, según respaldan los protocolos aceptados de eutanasia. Posteriormente, administra propofol para inducir un coma anestésico. Luego, administrar cloruro de potasio a 2 mEq/kg IV hasta que ocurra una parada respiratoria y cardiovascular y no existan reflejos protectores.
2. Secciona la epífisis distal femoral para eliminar la zona de los cóndilos. Fijar las articulaciones de rodilla diseccionadas con formalina amortiguada con un 10% de neutral y descalcificar en EDTA al 5% (ácido etilendediaminetetraacético) a 34 °C, cambiando la solución de EDTA cada 3 días.
3. Incrusta el material en parafina y córtalo en secciones de 4 μm. Retira la parafina de las láminas remojándolas en xileno a 65 °C durante 3 x 5 minutos. Hidrátate con 10-20 inmersiones en etanol (99%, 95%, 70%) seguidas de agua desionizada durante 5^{minutos 42}.
4. Para la tinción de hematoxilina y eosina (H&E), teñir las secciones con hematoxilina Harris y contratinción con eosina, escanear a un aumento del 20× usando un microscopio automático de escaneo por láminas y analizar con el software vinculado.
5. Evaluar la lesión según la iniciativa⁴³ de histopatología de la Osteoarthritis Research Society (OARSI): una puntuación de 0 indica cartílago normal; una puntuación de 1 refleja fibrilación superficial sin pérdida de cartílago; una puntuación de 2 corresponde a hendiduras verticales que alcanzan la capa inmediatamente inferior a la zona superficial, acompañadas de una pérdida parcial de la lámina superficial; una puntuación de 3 indica hendiduras verticales o erosión que se extienden hacia el cartílago calcificado y afectan a menos del 25% de la superficie articular; Las puntuaciones de 4, 5 y 6 representan grietas verticales o erosión que alcanzan el cartílago calcificado e involucran entre el 25-50%, el 50-75% y más del 75% de la superficie articular, respectivamente.
   NOTA: Para este estudio, se asignó una puntuación de 4 a las lesiones con hendiduras verticales o erosiones que se extienden hacia el cartílago calcificado y que afectan a más del 25% de la superficie articular.

Resultados

Inducción de defecto osteocondral

Este estudio tenía como objetivo desarrollar un protocolo eficiente para inducir defectos osteocondrales agudos en animales de gran tamaño. Las lesiones se crearon mecánicamente durante un procedimiento quirúrgico, resultando en una lesión de aproximadamente 8 mm de diámetro y 5 mm de profundidad (Figura 1). Teniendo en cuenta las puntuaciones establecidas por la Sociedad Internac...

Discusión

Para superar los desafíos en la terapia con cartílago, como la insuficiencia de la diferenciación condrogénica y la maduración de la CLE, los estudios no clínicos siguen siendo esenciales para evaluar las estrategias terapéuticas. Se han reportado previamente métodos para modelos no clínicos de tejido cartílago lesionado utilizando diversas^{técnicas 45}. Sin embargo, la literatura aún carece de informes detallados y procedimientos estandarizados para inducir una les...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Hilo de sutura poliglecaprono 25, nº 2-0	Ethicon		El hilo de sutura para el cierre general de tejidos blandos se utilizaba para suturar la cápsula articular y el tejido celular subcutáneo.
Anticuerpos anti-β-Tubulina	Invitrogen	PA516863	Anticuerpo contra la β-tubulina, dos subunidades (&alfa;/β) que conforman los microtúbulos del citoesqueleto
Dispositivo de anestesia	HB hospitalar		Equipos de anestesia inhalada
Axio Scan Z1	Zeiss, Múnich, Alemania		Microscopio
Penicilina G de benzatina	Ourofino		Antibióticos
Catéter 18 G	Solidor		Catéter intravenoso
Cefalexina	Virbac		Terapia antimicrobiana
Solución acuosa de digluconato de clorhexidina	RIOQUÍ MICA		Antiséptico utilizado para la antisepsis cutánea
Tubo endotraqueal con manguito 7.5 y guion; 8,0 mm	Solidor		Tubo endotraqueal con manguito
DAPI	Sigma	D9542	Tinte fluorescente
Eagle Medium Modificado de Dulbecco	Gibco	12100-046	Medio de cultivo celular
Sulfato de dihidroestreptomicina	Ourofino		Antibióticos
Tubo EDTA	Becton Dickinson	362788	Tubo de recogida
Eosina	Neón	1795	Un colorante utilizado para visualizar la morfología celular, tinción y nbsp; citoplasma.
Ácido etilendediaminético tetraacético	Sigma	E5134	Favorece la desmineralización gradual del tejido óseo
Suero fetal bovino	Gibco	12657-029	Suplemento para cultivo celular con factores de crecimiento
Formol	Sigma-Aldrich	47608	Preservar la morfología tisular
GelMA liofilizado	TissueLabs	GLMA-LYO-1	Hidrogel fotocruzable
Harris hematoxilina y nbsp;	Laborclin	620503	Un colorante utilizado para visualizar la morfología celular, teñiendo núcleos.
Isoflurano	Cristá Lia		Mantenimiento anestésico
Ketamina 10%	VETNIL		Procedimiento de eutanasia
Solución de Ringer lactato	Fresenius Kabi		Terapia de fluidos
L-Glutamina 200 mM	Gibco	25030-081	Aminoácido esencial para cultivo celular
Cloruro de lidocaína	Cristá Lia		Anestesia local
Kit de viabilidad VIVA/MUERTO/citotoxidad	Invitrogen	L3224	Kit de ensayo fluorescente para evaluar la viabilidad celular
Meloxicam	Ouro fino		Antiinflamatorios y analgésicos para el periodo postoperatorio
Clorhidrato de midazolam	Cristá Lia		Medicación preanestésica
Hilo de sutura mononylon, nº 3-0	Ethicon		Sutura utilizada para el cierre de la piel
NaCl 0,9%	Cristalia		Solución salina
Neurolocalizador	Neurolocalizador DL 250 DeltaLife		Anestesia local guiada por un neurolocalizador y un electroestimulador del nervio periférico.
Ejercicio ortopédico	Mini Taladro Ortopédico Cánulado (Delicado) - Mandril cromado - Marca Makita		Se usa para cirugías ortopédicas.
Martillo ortopédico	Edlo	Hammer Neufield (10-3155)	Características generales: 20 cm de longitud y 560 gr de peso; material: acero inoxidable de alta calidad; Uso: Indicado para procedimientos de traumatología y ortopedia que requieren impacto controlado. Certificaciones: los productos cuentan con certificaciones de calidad como ISO (Organización Internacional de Normalización): 13485:2016, con normas europeas de cumplimiento y buenas prácticas de fabricación.
Ostetótomo de Lambotte	Edlo	Osteotomo de Lambotte (10-0749)	El osteotomo de Lambotte (6 mm x 17 cm / 6 3/4") es un instrumento quirúrgico de alta precisión utilizado principalmente en cirugías ortopédicas y procedimientos neuroquirúrgicos que implican manipulación ósea. Con una punta de 6 mm de ancho, es ideal para cortes delicados, remodelado y la extracción de cartílago compacto y hueso subcondral.
Penicilina estreptomicina	Gibco	15140-122	Antibiótico de amplio espectro ampliamente utilizado en cultivo celular
Clorhidrato de petidina	Cristá Lia		Medicación preanestésica
Cloruro de potasio 19,1%	Samtec		Procedimiento de eutanasia
Procaína penicilina G	Ourofino		Antibióticos
Propofol	Cristá Lia		Inducción y mantenimiento anestésico
Lactato de Ringer	Cristá Lia		Terapia de fluidos
Sistema de respiración circular semicerrado	HB hospitalar		Circuito respiratorio para anestesia
Vendaje estéril de crepe	Cremer		Venda estéril de crepé, utilizada para cubrir los extremos distales de las extremidades que se operan.
Stimuplex D, 22 Ga. x 2 in. (50 mm) Aguja aislante con juego de extensiones, 30 grados; Biselado (STIMD2250/30)	BBRAUN		Anestesia local perineural
Cloruro de tramadol	Cristá Lia		Analgesia postoperatoria
Trephine Drill	Taladro de trefina ósea, mm de diámetro y guiño; modelo: contra-angle, marca: surgical WF		Taladro de trepina recolectora de huesos de 8,0 mm; producido en acero quirúrgico; utilizado en cirugías de injerto óseo; sirve para extraer el bloque óseo para análisis histológico o autoinjertos.
Xilazina 10%	VETNIL		Procedimiento de eutanasia