Artículo de método

Aplicación de electroforesis en gel de poliacrilamida en el análisis de subfracciones de lipoproteínas relevantes para la enfermedad cardiovascular aterosclerótica

DOI:

10.3791/68996

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24 de octubre de 2025

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1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

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Este protocolo tiene como objetivo elaborar un método de análisis de subfracción de lipoproteínas basado en electroforesis en gel de poliacrilamida, que proporciona una base diagnóstica importante para la evaluación del riesgo de enfermedad cardiovascular. Puede dividir LDL en siete subfracciones. LDL1 y LDL2 se caracterizan como partículas grandes, mientras que LDL3 a LDL7 se caracterizan como partículas pequeñas.

Resumen

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El colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C) es un factor clave en el desarrollo de la enfermedad cardiovascular aterosclerótica (ASCVD). Los niveles elevados de LDL-C están estrechamente relacionados con la formación de placas ateroscleróticas y el riesgo de eventos cardiovasculares. Sin embargo, la heterogeneidad de las LDL influye significativamente en su capacidad para promover la aterosclerosis. La investigación indica que las partículas de lipoproteínas de baja densidad (LDL) se pueden clasificar en LDL densas pequeñas (sdLDL) y LDL flotantes grandes (lbLDL). Entre estos, es más probable que sdLDL penetre en el endotelio vascular y tiene una actividad de modificación oxidativa más fuerte, que está particularmente asociada con ASCVD. En pacientes con síndrome metabólico, diabetes e hipertrigliceridemia, los niveles de LDL-C pueden ser normales, pero la proporción de sdLDL es elevada, lo que lleva a una subestimación del riesgo cardiovascular. Por lo tanto, la detección precisa de las subfracciones de LDL es crucial para estratificar el riesgo de ASCVD y optimizar las estrategias de intervención.

Los métodos tradicionales de detección de LDL-C, como la fórmula de Friedewald y la medición directa, solo reflejan los niveles de colesterol total y no pueden diferenciar entre subfracciones. Los métodos para detectar subfracciones de LDL-C incluyen técnicas de ultracentrifugación (UC), cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y resonancia magnética nuclear (RMN). Sin embargo, estos métodos tienen altos requisitos técnicos, operaciones complejas o equipos costosos, lo que los hace poco prácticos para un uso clínico generalizado.

La tecnología de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) separa las partículas de lipoproteínas a través del efecto de tamiz molecular y las diferencias de carga. Esta técnica utiliza sistemas de gel de gradiente no desnaturalizantes, combinados con tinciones específicas como el negro de Sudán, que ofrecen alta resolución, fuerte reproducibilidad y facilidad de operación. La tipificación de lipoproteínas mediante la tecnología PAGE puede proporcionar una evaluación más completa y precisa de los niveles de lipoproteínas de los pacientes, lo que ayuda en las decisiones clínicas de tratamiento. Este artículo ha presentado cinco resultados representativos. El tamaño medio de partícula LDL de la muestra A, B, C, D, E es 275,3 Å, 266,6 Å, 258,2 Å, 257,4 Å y 252,9 Å, lo que indica un riesgo bajo, marginal, leve, moderado y grave de enfermedad cardiovascular debido a dislipidemia, respectivamente.

Introducción

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Según un informe de la Organización Mundial de la Salud de 2021, las enfermedades cardiovasculares (ECV) siguen siendo la principal causa de muerte entre las enfermedades humanas. El informe indica que 17,9 millones de personas en todo el mundo murieron por ECV en 2019, lo que representa casi un tercio de las muertes mundiales1. La ASCVD, un tipo de ECV, es la principal causa de muerte entre los residentes urbanos y rurales de China, y representa más del 40% de todas las muertes2. La aterosclerosis es una enfermedad vascular inflamatoria crónica impulsada por factores de riesgo tradicionales y no tradicionales3. Se caracteriza por la deposición de lípidos en la pared arterial4, proliferación de tejido fibroso y calcificación, lo que finalmente conduce a un engrosamiento de la pared del vaso, una elasticidad reducida y un estrechamiento de la luz. La dislipidemia es el factor de riesgo más significativo para la ASCVD, siendo el LDL-C un factor de riesgo patogénico para la ASCVD, desempeñando un papel crucial en el desarrollo de la ASCVD5. Numerosos estudios epidemiológicos, estudios de aleatorización mendeliana y ensayos controlados aleatorios han demostrado consistentemente que los niveles plasmáticos de LDL-C se correlacionan positivamente con el riesgo de ASCVD. La reducción de los niveles de LDL-C puede reducir el riesgo de ASCVD6.

El LDL es la principal lipoproteína responsable de transportar el colesterol endógeno en el cuerpo7. El LDL plasmático es heterogéneo y consta de una variedad de partículas con diferentes tamaños, densidades y composiciones químicas8. Las partículas de lbLDL tienen una densidad más baja y un tamaño más grande, mientras que las partículas de sdLDL tienen una densidad más alta y un tamaño más pequeño. La heterogeneidad de LDL subyace a sus variados efectos biológicos9. Las partículas de LbLDL son de mayor diámetro (≥ 25,5 nm), de menor densidad (cerca de 1,02 g/ml) y de morfología suelta, y consisten en LDL1 y LDL2. Las partículas de LbLDL contienen una mayor cantidad de ésteres de colesterol. Es menos probable que se oxiden o penetren en el endotelio vascular, lo que los hace relativamente más seguros. Por el contrario, las partículas sdLDL tienen un diámetro más pequeño (< 25,5 nm)10, mayor densidad (cerca de 1,06 g/ml) y una estructura densa, que consiste en LDL3 a LDL7. Las partículas de SdLDL contienen una menor cantidad de éster de colesterol, pero niveles más altos de triglicéridos y apolipoproteína B (ApoB) en comparación con lbLDL. Sus propiedades físicas los hacen más propensos a penetrar la barrera endotelial arterial. Bajo el subendotelio, las partículas de sdLDL son oxidadas por especies reactivas de oxígeno (ROS) para formar LDL oxidado (ox-LDL)11. El ox-LDL inhibe la actividad de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS), reduce la producción de NO e induce a las células endoteliales a expresar VCAM-1 / MCP-1, promoviendo la adhesión y migración de monocitos12. Las células mononucleares endoteliales migratorias se diferencian en macrófagos, que absorben ox-LDL sin límite a través de los receptores carroñeros. La acumulación de éster de colesterol intracelular se transforma en células espumosas, que son los componentes centrales de las estrías lipídicas ateroscleróticas. Las células espumosas secretan factores inflamatorios como IL-1β y TNF-α, que expanden aún más el estrés oxidativo y el daño endotelial, formando un circuito de retroalimentación positiva13. Puede activar la inflamación de las células endoteliales, promueve la formación de células espumosas y acelera la progresión de la placa. Dos grandes estudios de cohortes han demostrado que el sdLDL-C tiene un mayor valor de referencia clínica que el LDL-C para predecir y evaluar los riesgos potenciales de ASCVD14-15. Pero el método tradicional de detección de LDL-C no puede probar subfracciones de lipoproteínas debido a la limitación del método.

Las partículas de LDL (LDL-P) reflejan el número de partículas de LDL por unidad de volumen de sangre y sirven como portadores de moléculas de LDL, cada una de las cuales contiene una molécula de ApoB y múltiples moléculas de colesterol. El LDL-C representa la masa total de colesterol transportada por estas partículas. Los niveles de LDL-C están influenciados por el número de partículas de LDL y la densidad del colesterol, que pueden no reflejar completamente el riesgo real16. Por ejemplo, los pacientes con síndrome metabólico, diabetes o hipertrigliceridemia pueden tener niveles normales de LDL-C pero LDL-P anormalmente elevados (debido a partículas más pequeñas y menor contenido de colesterol). Incluso los niveles de LDL-C cumplen con el objetivo, el LDL-P alto aún puede aumentar el riesgo cardiovascular residual. Los estudios han demostrado que el LDL-P es más predictivo que cualquier otro parámetro relacionado con el LDL17. El análisis de las subfracciones de lipoproteínas es fundamental para comprender la patogénesis de la ASCVD, evaluar el riesgo residual y guiar el tratamiento de precisión. En los últimos años, las guías nacionales también han recomendado subfracciones de LDL como indicadores para la evaluación del riesgo de ASCVD o el seguimiento del tratamiento18.

ASCVD es la principal causa de muerte a nivel mundial. Sus estrategias de prevención y control dependen en gran medida del manejo de lípidos. Actualmente, el cribado de individuos con dislipidemia en la práctica clínica se basa principalmente en cuatro pruebas lipídicas tradicionales, que incluyen triglicéridos (TG), colesterol total (CT), colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C) y LDL-C. Además, otros marcadores lipídicos como la lipoproteína (a), la apolipoproteína A1 (ApoA1) y la ApoB se utilizan principalmente para poblaciones de alto riesgo de ASCVD19, como pacientes diabéticos, hipertensos y fumadores o aquellos cuyos niveles de LDL-C han sido controlados pero aún representan un alto riesgo.

A medida que la investigación ha progresado, las limitaciones de las pruebas tradicionales de lípidos se han vuelto cada vez más evidentes, particularmente en la efectividad de la alerta temprana y la explicación del riesgo residual. Un número considerable de pacientes con ASCVD son diagnosticados inicialmente con niveles normales de lípidos, lo que hace que el LDL-C sea ineficaz para la advertencia primaria. Los datos epidemiológicos muestran que alrededor del 20% de los pacientes con síndrome coronario agudo tienen niveles de LDL-C dentro del rango normal (<3,4 mmol/L) al ingreso, lo que sugiere que las pruebas tradicionales de lípidos pueden pasar por alto a los individuos de alto riesgo. Además, incluso después de alcanzar los objetivos de LDL-C, los pacientes con ASCVD aún pueden enfrentar un alto riesgo cardiovascular residual. En estos pacientes, la mayoría de los eventos de arterias coronarias residuales no pueden explicarse por una reducción en los niveles de LDL-C. Por lo tanto, es posible que las pruebas simples de LDL-C no satisfagan completamente las necesidades clínicas para el diagnóstico y tratamiento de la ASCVD, porque las pruebas de lípidos de rutina no pueden diferenciar entre lbLDL-C y sdLDL-C.

Múltiples estudios han confirmado una clara correlación entre las subfracciones de lipoproteínas y la ASCVD. Los resultados anormales de las pruebas de subfracción de lipoproteínas pueden servir como advertencia para la prevención primaria de ASCVD en individuos con niveles normales de lípidos, ayudando a identificar grupos ocultos de alto riesgo. Para la prevención secundaria de ASCVD, donde los niveles de LDL-C ya están dentro de los rangos objetivo, las pruebas de subfracción de lipoproteínas pueden ayudar a evaluar el riesgo residual y guiar el tratamiento posterior20. Por lo tanto, se espera que la detección de nuevas subfracciones de LDL proporcione nuevos objetivos para la prevención y el tratamiento de la dislipidemia y la ASCVD en comparación con las pruebas tradicionales de lípidos.

El sistema de detección y análisis de nuestro laboratorio utiliza principalmente PAGE para separar las subfracciones de lipoproteínas en función de su tamaño y carga. Las partículas de lipoproteínas se separan principalmente por tamaño debido al tamizado molecular en la matriz de poliacrilamida por PAGE. Las moléculas pequeñas migran rápidamente, mientras que las moléculas grandes se ven obstaculizadas por la obstrucción estérica y migran lentamente. Y cuanta más carga lleva una molécula, más rápido migra. Este método puede dividir rápidamente las lipoproteínas en doce subfracciones. El LDL se divide en siete subfracciones, etiquetadas como LDL1 a LDL7. Todos tienen distintos tamaños, densidades, propiedades fisicoquímicas, comportamientos metabólicos y potencial aterosclerótico. LDL1 y LDL2 se clasifican como lbLDL, mientras que LDL3 a LDL7 se clasifican como sdLDL. Las técnicas de detección de subfracciones de lipoproteínas incluyen CU, HPLC y RMN. Sin embargo, debido a los altos requisitos de equipo, la operación compleja y el consumo de tiempo, su aplicación clínica es relativamente limitada21. El método PAGE separa eficientemente varias subfracciones de LDL, lo que lo hace más fácil de usar en comparación con otras técnicas. El equipo utilizado es rentable y portátil, lo que lo hace más adecuado para un uso generalizado en laboratorios de rutina clínica. Este estudio tiene como objetivo validar PAGE como un método rápido y rentable para el análisis de subfracciones de LDL en muestras de suero para apoyar la toma de decisiones clínicas.

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Protocolo

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Todas las muestras de este estudio son evaluadas y aprobadas por el Comité de Revisión de Ética del Hospital Popular Provincial de Guangdong (Número de aprobación: KY2025-435-01). Todos los participantes firmaron un consentimiento informado por escrito antes del experimento.

1. Preparación del kit

  1. Preparación del tampón de gel
    1. Preparación de acrilamida al 30% (ACR): Pesar 30 g de acrilamida, agregar 80 ml de agua desionizada, remover para disolver y ajustar a 100 ml. Conservar a 4 °C en la oscuridad hasta su uso.
    2. Preparación de bisacrilamida al 1% (BIS): Pesar 1 g de bisacrilamida, agregar 80 ml de agua desionizada, remover para disolver y ajustar a 100 ml. Conservar a 4 °C en la oscuridad hasta su uso.
    3. Preparación de sacarosa al 25%: Pesar 25 g de sacarosa, añadir 70 ml de agua desionizada, remover para disolver y ajustar a 100 ml para su almacenamiento a 4 °C.
    4. Preparación de persulfato de amonio al 10% (APS): Disolver 0,1 g de persulfato de amonio en 1 ml de agua desionizada y utilizar inmediatamente.
    5. Preparación de Tris 1M (pH = 6,8): Pesar 121,14 g de trishidroximetilaminometano, añadir 800 mL de agua desionizada, remover para disolver y ajustar el valor de pH a 6,8, luego preparar hasta 1000 mL.
    6. Preparación de Tris 1M (pH = 8,6): Pesar 121,14 g de trishidroximetilaminometano, añadir 800 mL de agua desionizada, remover para disolver y ajustar el valor de pH a 8,6, luego hacer hasta 1000 mL.
      NOTA: Cuando manipule acrilamida, use guantes de caucho butílico, gafas de seguridad, ropa protectora y opere con una campana extractora. En caso de contacto con la piel, lávese inmediatamente con agua y jabón, luego busque atención médica. En caso de inhalación, muévase al aire libre.
  2. Preparación del gel separador
    1. Tome un tubo de vidrio limpio y selle la capa inferior con una película de sellado.
    2. Agregue 8,29 ml de ACR al 30%, 17,76 ml de BIS al 1%, 10 ml de sacarosa al 25%, 1 ml de APS al 10%, 10 ml de Tris 1M (pH = 8,6), 0,1 ml de tetrametiletilendiamina (TEMED) y 32,85 ml de agua desionizada en un vaso de precipitados limpio en secuencia. Mezclar bien para obtener 80 ml de licor madre (con una concentración de poliacrilamida del 3,3%) y agregar al tubo de vidrio a 1,2 ml por raíz. Polimerizar a temperatura ambiente durante 60 min y sellar el líquido con agua purificada para asegurar una superficie líquida plana.
  3. Preparación de pegamento concentrado
    1. Agregue 4,07 ml de ACR al 30%, 3,05 ml de BIS al 1%, 5 ml de sacarosa al 25%, 0,5 ml de APS al 10%, 5 ml de Tris 1M (pH = 6,8), 0,05 ml de TEMED y 32,33 ml de agua desionizada en un vaso de precipitados limpio en secuencia, mezcle bien para obtener 50 ml de licor madre (con una concentración de poliacrilamida del 3,05%), añadir al tubo de vidrio a 0,2 ml por raíz. Polimerizar a temperatura ambiente durante 60 min y sellar el líquido con agua purificada para asegurar una superficie líquida plana.
  4. Preparación de la solución de conservación
    1. Pesar 6,4 g de Tris, 75 g de sacarosa, 2,5 ml de glicerina y 0,3 ml de PC-300 (conservante antibacteriano) y agregar 800 ml de agua desionizada, revolver para disolver, ajustar el valor de pH a 6,8 y finalmente diluir a 1000 ml. La concentración de Tris-HCl es de aproximadamente 52 mM.
  5. Preparación de la solución de tinción negra de Sudán
    1. Pesar 0,03 g de negro de Sudán y disolverlo en una mezcla de 2 ml de etilenglicol, 6 ml de etanol anhidro y 2 ml de dimetilsulfóxido. Después de la filtración, divídalo en 1 ml por vial.
      NOTA: Cuando manipule negro de Sudán y dimetilsulfóxido, use guantes de nitrilo y gafas protectoras para evitar el contacto directo. Las operaciones deben realizarse en un ambiente ventilado. Enjuague inmediatamente la piel y los ojos con agua después de la exposición, luego busque atención médica si es necesario.
  6. Embalaje interior
    1. Embalaje completo según los requisitos de composición del kit.

2. Composición del kit

  1. Asegúrese de que el producto contenga columnas prefabricadas, solución conservante y solución de tinción negra de Sudán. Las columnas prefabricadas deben contener acrilamida, bisacrilamida, sacarosa, persulfato de amonio, Tris y tetrametiletilendiamina. La longitud de la columna prefabricada es de 75 ± 0,5 mm, el diámetro interior es de 5,5 ± 0,02 mm y el diámetro exterior es de 7,0 ± 0,02 mm. La solución conservante debe contener Tris, sacarosa, glicerina y conservantes. La solución de tinción de negro de Sudán debe contener negro de Sudán, etilenglicol, etanol anhidro y dimetilsulfóxido. Asegúrese de que las especificaciones de embalaje sean diferentes según la cantidad de columnas prefabricadas. Una porción de reactivo debe tener una columna prefabricada. No combine kits de reactivos de diferentes lotes, ya que esto puede afectar los resultados experimentales.

3. Preparación de la muestra

  1. Preparación del paciente: Asegúrese de que el paciente esté con el estómago vacío mientras extrae muestras de sangre.
  2. Utilice tubos de muestreo de gel de separación de suero y realice la recolección de muestras de acuerdo con el procedimiento operativo estándar. La sangre debe separarse lo antes posible después de la extracción de sangre para evitar la hemólisis.
  3. Analice las muestras de suero después de la separación lo antes posible a temperatura ambiente. Si no es posible realizar pruebas inmediatas, almacene las muestras a 2-8 °C durante un máximo de 7 días o a -20 °C durante un máximo de 30 días.
  4. Restaure las muestras a temperatura ambiente y mezcle completamente antes de usarlas, especialmente para las muestras congeladas y descongeladas. No se permite la congelación-descongelación repetida, ya que puede comprometer la integridad de la muestra. Tanto las muestras de lipemia como las de hemólisis pueden afectar los resultados de las pruebas. Si se trata de una muestra de lipemia o hemólisis leve, se recomienda realizar una centrifugación de alta velocidad a 14.462 x g a temperatura ambiente durante 15 min. Para muestras de lipemia, use una pipeta para aspirar toda la capa transparente desde la parte inferior. Para muestras de hemólisis, recolecte el sobrenadante. Luego transfiéralo a un nuevo tubo de centrífuga y tiñe. Sin embargo, si la lipemia o hemólisis es muy grave, se recomienda volver a extraer sangre.

4. Pasos de operación

  1. Preparación
    1. Saque las columnas prefabricadas y las muestras para probarlas. Utilice una pipeta para aspirar el líquido de conservación residual del puerto de muestra de las columnas prefabricadas. Equilibre las columnas prefabricadas y las muestras a temperatura ambiente y disuelva 14,3 g de polvo tampón electroforético con 800 ml de agua desionizada.
  2. Teñir
    1. Tome tubos de centrífuga limpios y numérelos. El número de tubos es consistente con el orden de los tubos de recolección de sangre. Agregue los tubos de centrífuga con una proporción de 50 μl de muestra por 10 μl de solución de tinción de negro de Sudán, mezcle bien y déjelo reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente para teñir.
      NOTA: El principio de tinción del negro de Sudán se basa en su propiedad lipofílica. Puede inducir reacciones cromogénicas específicas con sustancias lipídicas como grasas neutras, fosfolípidos y esteroides dentro de las células, lo que da como resultado partículas de color negro parduzco o negro oscuro. En este sistema, hemos optimizado el tiempo de tinción y la dosis utilizando un diseño experimental de un solo factor con el siguiente protocolo. Se seleccionan tres muestras de suero LDL-C (concentraciones altas, medias y bajas), con volúmenes de tinción correspondientes de 5 μl, 10 μl, 15 μl y 20 μl, respectivamente. Las duraciones de tinción se establecen en 10 min, 15 min, 20 min, 25 min, 30 min, 35 min, 45 min y 60 min. Se realizan experimentos electroforéticos, seguidos de un análisis en escala de grises de las bandas electroforéticas para verificar la eficacia de la tinción. Se determina que las condiciones óptimas son un volumen de tinción de 10 μl con una duración de tinción de 30 min ± 5 min. Un menor volumen y duración de la tinción dan como resultado un colesterol de lipoproteínas ligeramente teñido. Si bien las condiciones óptimas han logrado el equilibrio, no es necesario un mayor volumen y duración de la tinción.
  3. Separación ionofótica
    1. Inserte columnas prebalanceadas en el zócalo de goma del tanque de electroforesis. El puerto de muestra de la columna de gel está a unos 2 cm del tapón de goma. Asegúrese de que esté bien cerrado y que no se produzcan fugas. Cuando el número de columnas de gel de muestra no esté lleno, llene el espacio vacío con un tapón de goma sin agujeros.
    2. Luego vierta el tampón de electroforesis en los tanques superior e inferior. Retire las burbujas en la boca de las columnas prefabricadas. Agregue 25 μL de muestras teñidas al puerto de muestra de las columnas prefabricadas.
    3. Cubra la tapa, conecte el interruptor de encendido y configure los parámetros de voltaje (U = 100 V), corriente (I = 3 mA / tubo), potencia (P = 120 W), tiempo (T = 70 min) para la separación por electroforesis.
      NOTA: El voltaje, la potencia y el tiempo son parámetros fijos. La corriente debe ajustarse de acuerdo con el número de muestras de prueba (por ejemplo, 10 tubos de muestra, I = 3 mA x 10 tubos = 30 mA).
    4. Una vez completada la electroforesis, apague la alimentación, retire la tapa y vierta el tampón de electroforesis en la parte superior del dispositivo de electroforesis. Saque las columnas de gel a su vez y colóquelas en el marco de fijación, vierta el tampón de electroforesis sobrante en la superficie superior y analice en el sistema de análisis de escaneo.
  4. Análisis de escaneo
    NOTA: El tipo de analizador es DY-03 y el software de escaneo es KBL 3.3.9 GD.
    1. Encienda el interruptor de encendido del analizador de escaneo, haga doble clic en el software del sistema de escritorio y haga clic en Colección para ingresar a la interfaz del software. Haga clic en Exportar bandeja de muestras en la interfaz del software, coloque las columnas de gel en el estante de muestras con el extremo de muestreo orientado hacia el interior del dispositivo. Asegúrese de que las columnas de gel estén colocadas en las posiciones numeradas correspondientes. Las posiciones 25 y 26 están designadas solo para pruebas de control de calidad.
    2. Haga clic en Importar bandeja de muestras en la interfaz del software para importar la bandeja de muestras al dispositivo. Haga clic en Escanear para obtener imágenes de escaneo de muestra. El dispositivo tiene un sistema de enfoque automático incorporado. Ajusta automáticamente el enfoque entre el módulo de escaneo y el tubo de gel para garantizar imágenes claras. El software identifica automáticamente la posición inicial (VLDL) y la posición de terminación (HDL) del electroforograma. Cuando se detectan picos obvios en estas posiciones, el software se bloquea en el área de análisis designada para el análisis espectral.
    3. Después de ingresar la información de los pacientes y escanear el código de barras, haga clic en Análisis y procesamiento en la interfaz del software, el sistema analizará y generará automáticamente informes de prueba. Haga clic en Cargar LIS para transferir informes de prueba al sistema LIS.
    4. Saque las columnas prefabricadas después del escaneo y el análisis y trátelas de acuerdo con las especificaciones de desechos médicos.

5. Control de calidad

  1. Realice una prueba de control de calidad de dos niveles antes de la prueba diaria de muestras. Los pasos de operación de la prueba de control de calidad son los mismos que los de una prueba de muestra. La referencia de tipo A es el diámetro medio de partícula superior a 268 Å. La referencia de tipo B es el diámetro medio de partícula inferior a 265 Å.
    NOTA: Análisis de resultados: TIPO A, el tamaño medio de las partículas de LDL es > 268 Å, LDL1 y LDL2 representan más, lo que indica un bajo riesgo de ECV. TIPO INTERMEDIO (TIPO INT), el tamaño medio de las partículas de LDL es de 265 a 268 Å, lo que indica que la proporción de LDL3 a LDL7 está por encima del valor crítico. TIPO B, el tamaño medio de las partículas de LDL es < 265 Å, LDL3 a LDL7 representan más, lo que indica un alto riesgo de ECV.

6. Mejoras técnicas

  1. Para garantizar resultados diagnósticos precisos, se deben implementar las siguientes mejoras técnicas.
    1. Pre-examen: Asegúrese de que los pacientes estén completamente en ayunas antes de la extracción de sangre. Use plasma anticoagulante sérico o EDTA en lugar de plasma anticoagulante de heparina. Asegúrese de que la pipeta sea precisa en su absorción. Evite las muestras quilosas o hemolíticas graves.
    2. Durante el examen: Configure los parámetros de electroforesis de voltaje (U = 100 V), corriente (I = 3 mA / tubo), potencia (P = 120 W), tiempo (T = 70 min) de acuerdo con los protocolos estándar. Use guantes estériles para evitar la contaminación de los tubos de vidrio que podrían afectar la capacidad de tomar fotos y escanear.
    3. Después del examen: Al emitir informes, revise los cromatogramas anormales en busca de posibles interferencias y realice un nuevo análisis para evitar proporcionar conclusiones diagnósticas incorrectas.
      1. El cromatograma normal: en la posición inicial de VLDL y en la posición de terminación de HDL, ambos tienen un pico distinto (consulte la sección Resultados representativos).
      2. El cromatograma de anomalía: En la posición inicial de VLDL o la posición de terminación de HDL no tiene o tiene más de un pico.

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Resultados

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Este estudio tiene como objetivo inventar un método que utilice PAGE para detectar subfracciones de lipoproteínas en el suero de los participantes. El objetivo es determinar si las subfracciones de LDL-C son principalmente partículas grandes (LDL1 y LDL2) o partículas pequeñas (LDL3 a LDL7). Después de la tinción con negro de Sudán, las muestras se separan mediante el dispositivo de electroforesis en un gel de poliacrilamida. Luego, las lipoproteínas se separan en bandas distintas dentro de los tubos de gel y el análisis...

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Discusión

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Aunque la investigación ha confirmado el papel de sdLDL como factor de riesgo cardiovascular en el desarrollo de la aterosclerosis, actualmente no existe un método establecido para identificar las subfracciones de LDL. En las últimas décadas, se han logrado avances significativos en el desarrollo de métodos de detección de subfracciones de LDL. La UC se considera el estándar de oro. Puede separar subfracciones de LDL en función de sus diferencias de densidad, distinguiendo entre sdLDL y ...

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Divulgaciones

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Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Agradecimientos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este estudio cuenta con el apoyo de subvenciones del Proyecto del Fondo Provincial de Investigación de Ciencia y Tecnología Médica de Guangdong (A2024108).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Polvo tampón electroforéticoCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030401Para preparar soluciones tampón y proporcionar condiciones de electroforesis
Productos de control de calidad de alto valorCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030301Para la exactitud y precisión de la supervisión
Solución de separación de densidad de muestras de lipoproteínas (electroforesis en gel de gradiente)Compañía de tecnología Guangxi KangbolaiLSS60-SB1-A1  25030301Para separar los componentes del subtipo de lipoproteína de las muestras de suero
Productos de control de calidad de bajo valorCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030301Para la exactitud y precisión de la supervisión
Solución de tinción negra de SudánCompañía de tecnología Guangxi KangbolaiLSS60-SB1-A1  25030301Para tinción de muestras

Referencias

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