Artículo de método

Aplicación de electroforesis en gel de poliacrilamida en el análisis de subfracciones de lipoproteínas relevantes para la enfermedad cardiovascular aterosclerótica

DOI:

10.3791/68996

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24 de octubre de 2025

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1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

Autores correspondientes: Hui-quan Gan <87330049@126.com>

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

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Este protocolo tiene como objetivo elaborar un método de análisis de subfracción de lipoproteínas basado en electroforesis en gel de poliacrilamida, que proporciona una base diagnóstica importante para la evaluación del riesgo de enfermedad cardiovascular. Puede dividir LDL en siete subfracciones. LDL1 y LDL2 se caracterizan como partículas grandes, mientras que LDL3 a LDL7 se caracterizan como partículas pequeñas.

Resumen

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El colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C) es un factor clave en el desarrollo de la enfermedad cardiovascular aterosclerótica (ASCVD). Los niveles elevados de LDL-C están estrechamente relacionados con la formación de placas ateroscleróticas y el riesgo de eventos cardiovasculares. Sin embargo, la heterogeneidad de las LDL influye significativamente en su capacidad para promover la aterosclerosis. La investigación indica que las partículas de lipoproteínas de baja densidad (LDL) se pueden clasificar en LDL densas pequeñas (sdLDL) y LDL flotantes grandes (lbLDL). Entre estos, es más probable que sdLDL penetre en el endotelio vascular y tiene una actividad de modificación oxidativa más fuerte, que está particularmente asociada con ASCVD. En pacientes con síndrome metabólico, diabetes e hipertrigliceridemia, los niveles de LDL-C pueden ser normales, pero la proporción de sdLDL es elevada, lo que lleva a una subestimación del riesgo cardiovascular. Por lo tanto, la detección precisa de las subfracciones de LDL es crucial para estratificar el riesgo de ASCVD y optimizar las estrategias de intervención.

Los métodos tradicionales de detección de LDL-C, como la fórmula de Friedewald y la medición directa, solo reflejan los niveles de colesterol total y no pueden diferenciar entre subfracciones. Los métodos para detectar subfracciones de LDL-C incluyen técnicas de ultracentrifugación (UC), cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y resonancia magnética nuclear (RMN). Sin embargo, estos métodos tienen altos requisitos técnicos, operaciones complejas o equipos costosos, lo que los hace poco prácticos para un uso clínico generalizado.

La tecnología de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) separa las partículas de lipoproteínas a través del efecto de tamiz molecular y las diferencias de carga. Esta técnica utiliza sistemas de gel de gradiente no desnaturalizantes, combinados con tinciones específicas como el negro de Sudán, que ofrecen alta resolución, fuerte reproducibilidad y facilidad de operación. La tipificación de lipoproteínas mediante la tecnología PAGE puede proporcionar una evaluación más completa y precisa de los niveles de lipoproteínas de los pacientes, lo que ayuda en las decisiones clínicas de tratamiento. Este artículo ha presentado cinco resultados representativos. El tamaño medio de partícula LDL de la muestra A, B, C, D, E es 275,3 Å, 266,6 Å, 258,2 Å, 257,4 Å y 252,9 Å, lo que indica un riesgo bajo, marginal, leve, moderado y grave de enfermedad cardiovascular debido a dislipidemia, respectivamente.

Introducción

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Según un informe de la Organización Mundial de la Salud de 2021, las enfermedades cardiovasculares (ECV) siguen siendo la principal causa de muerte entre las enfermedades humanas. El informe indica que 17,9 millones de personas en todo el mundo murieron por ECV en 2019, lo que representa casi un tercio de las muertes mundiales1. La ASCVD, un tipo de ECV, es la principal causa de muerte entre los residentes urbanos y rurales de China, y representa más del 40% de todas las muertes2. La aterosclerosis es una enfermedad vascular inflamatoria crónica impulsada por factores de riesgo tradicion....

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Protocolo

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Todas las muestras de este estudio son evaluadas y aprobadas por el Comité de Revisión de Ética del Hospital Popular Provincial de Guangdong (Número de aprobación: KY2025-435-01). Todos los participantes firmaron un consentimiento informado por escrito antes del experimento.

1. Preparación del kit

  1. Preparación del tampón de gel
    1. Preparación de acrilamida al 30% (ACR): Pesar 30 g de acrilamida, agregar 80 ml de agua desionizada, remover para disolver y ajustar a 100 ml. Conservar a 4 °C en la oscuridad hasta su uso.
    2. Preparación de bisacrilamida al 1% (BIS): Pes....

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Resultados

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Este estudio tiene como objetivo inventar un método que utilice PAGE para detectar subfracciones de lipoproteínas en el suero de los participantes. El objetivo es determinar si las subfracciones de LDL-C son principalmente partículas grandes (LDL1 y LDL2) o partículas pequeñas (LDL3 a LDL7). Después de la tinción con negro de Sudán, las muestras se separan mediante el dispositivo de electroforesis en un gel de poliacrilamida. Luego, las lipoproteínas se separan en bandas distintas dentro de los tubos de gel y el análisis.......

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Discusión

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Aunque la investigación ha confirmado el papel de sdLDL como factor de riesgo cardiovascular en el desarrollo de la aterosclerosis, actualmente no existe un método establecido para identificar las subfracciones de LDL. En las últimas décadas, se han logrado avances significativos en el desarrollo de métodos de detección de subfracciones de LDL. La UC se considera el estándar de oro. Puede separar subfracciones de LDL en función de sus diferencias de densidad, distinguiendo entre sdLDL y .......

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Divulgaciones

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Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Agradecimientos

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Este estudio cuenta con el apoyo de subvenciones del Proyecto del Fondo Provincial de Investigación de Ciencia y Tecnología Médica de Guangdong (A2024108).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Polvo tampón electroforéticoCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030401Para preparar soluciones tampón y proporcionar condiciones de electroforesis
Productos de control de calidad de alto valorCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030301Para la exactitud y precisión de la supervisión
Solución de separación de densidad de muestras de lipoproteínas (electroforesis en gel de gradiente)Compañía de tecnología Guangxi KangbolaiLSS60-SB1-A1  25030301Para separar los componentes del subtipo de lipoproteína de las muestras de suero
Productos de control de calidad de bajo valorCompañía de tecnología Guangxi Kangbolai25030301Para la exactitud y precisión de la supervisión
Solución de tinción negra de SudánCompañía de tecnología Guangxi KangbolaiLSS60-SB1-A1  25030301Para tinción de muestras

Referencias

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  1. Qiao, Y. N., et al. Low-density lipoprotein particles in atherosclerosis. Front Physiol. 13, 931931(2022).
  2. Li, J. J., et al. 2023 Chinese guideline for lipid management. Front Pharmacol. 14, 1190934(2023).
  3. Kong, P., et al.

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Etiquetas

LDL densas peque astama o de la part cula de LDLelectroforesis en gel con gradientetipificaci n de lipoprote nastinci n con negro de Sud nestratificaci n del riesgo cardiovascularheterogeneidad de la LDL

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