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Artículo de investigación
El ácido lipoico activa la vía citoprotectora Nrf2/HO-1 en la queratitis fúngica, reduciendo los niveles de citocinas inflamatorias y daños corneales. Esta terapia dirigida al huésped demuestra perfiles de seguridad superiores en comparación con los antifúngicos convencionales, a la vez que proporciona conocimientos mecanicistas sobre el tratamiento de enfermedades oculares impulsadas por estrés oxidativo mediante el aumento de la vía antioxidante endógena.
Se investigó el ácido lipoico (LA), un antioxidante de ditioles con un perfil ejemplar de seguridad ocular, por su capacidad para temperar el entorno oxidativo-inflamatorio que impulsa la queratitis fúngica. Las células epiteliales corneales humanas toleraron LA hasta 60 μM sin pérdida de viabilidad y, tras el desafío de Aspergillus fumigatus , LA indujo una escalada triple de la translocación nuclear relacionada con factor eritróide 2 (Nrf2) y una multiplicación por cinco en su efector aguas abajo, hemo oxigenasa-1 (HO-1). El silenciamiento farmacológico de Nrf2 con ML385 o el bloqueo catalítico de HO-1 con estaño protoporfirina IX abrogaron estos eventos moleculares y restablecieron la expresión de interleucina-1β y factor de necrosis tumoral α, afirmando una dependencia estricta de Nrf2/HO-1. Experimentos paralelos en un modelo de queratitis murina corroboraron las observaciones in vitro : la LA tópica disminuyó la opacidad corneal y las puntuaciones inflamatorias en un 47%, amplificando simultáneamente la expresión corneal de Nrf2 y HO-1 mientras reducía a la mitad los transcritos de citocinas; la coadministración de SnPPIX anuló estos beneficios. En conjunto, los datos delimitan una jerarquía mecanicista coherente en la que LA, a concentraciones clínicamente alcanzables, aumenta los niveles de proteínas Nrf2 y potencia la translocación nuclear, potencia la actividad de HO-1 y, por tanto, calma la turbulencia citocinética inducida por patógenos. Estos hallazgos sitúan a LA como un adjunto fácilmente traducible y dirigido al huésped, capaz de complementar la quimioterapia antifúngica y sugieren perspectivas terapéuticas más amplias para la modulación centrada en Nrf2 en la inflamación corneal que amenaza la vista.
La queratitis fúngica (FK) es ahora reconocida como una emergencia oftálmica generalizada, responsable de más de 1 millón de casos probados en cultivo anualmente y de una proporción desproporcionada de ceguera corneal en regiones tropicales ysubtropicales 1,2. Las estimaciones de incidencia que se acercan a 6-8 por cada 100.000 habitantes en Estados Unidos y aún más en las economías agrarias subrayan una amenaza global creciente que afecta preferentemente a las poblaciones en edad laboral tras un trauma vegetal o el desgaste de lentesde contacto 3,4. Los hongos filamentosos, especialmente especies de Fusarium y Aspergillus, dominan el paisaje etiológico, prosperando en climas cálidos y húmedos y explotando microlesiones oculares para iniciar la infección5.
A pesar de medio siglo de uso clínico, la natamicina 5% sigue siendo el único agente tópico aprobado específicamente para la FK; sin embargo, su química polienica confiere una penetración corneal pobre, requiere dosificaciones frecuentes y no está disponibleuniversalmente 6,7. De forma alarmante, un estudio sucesivo de vigilancia realizado en el sur de Asia ha revelado aumentos incrementales en las concentraciones inhibidoras mínimas tanto de natamicina como de triazolas, con aislados de Fusarium mostrando un aumento anual del ≥6% en la resistencia a la natamicina y una tendencia paralela para voriconazol8. Estos datos coinciden con los informes clínicos sobre fallos terapéuticos y refuerzan las previsiones de que el mercado de terapias FK se expandirá de 0.900 millones de USD en 2023 a 1.480 millones de USD en 2033, impulsado en gran medida por las deficiencias de la farmacoterapia actual. Las medidas quirúrgicas ad hoc, como los colgajos conjuntivales o la queratoplastia penetrante, salvan la anatomía en úlceras recalcitrantes, pero requieren muchos recursos y limitan lavisión 9. En conjunto, estas deficiencias subrayan la necesidad de estrategias dirigidas por el huésped o multiobjetivo que vayan más allá de la acción fungistática por sí sola.
El estrés oxidativo y la consiguiente cascada inflamatoria se entienden ahora como determinantes fundamentales de la patogénesis fúngica y la formación de cicatrices corneales. Tras la invasión fúngica, las células epiteliales corneales y las poblaciones inmunitarias residentes, incluyendo mastocitos conjuntivales, células dendríticas limbales y queratocitos estromales, inician respuestas inmunitarias innatas mediante receptores de reconocimiento de patrones, como Dectin-1 y los receptores tipoToll 10. Las especies reactivas de oxígeno derivadas de neutrófilos (ROS) se acumulan en el estroma infectado como parte del estallido oxidativo antimicrobiano, mientras que los macrófagos infiltrados y los linfocitos T perpetúan la inflamación crónica mediante amplificación decitocinas 11. Paradójicamente, los hongos filamentosos regulan al alza sus propios circuitos antioxidantes (por ejemplo, las dismutasas de superóxido reguladas por Yap1) para sobrevivir a este entorno hostil. El exceso de ROS activa a su vez la transcripción dependiente de NF-κB de IL-1β, TNF-α y otros mediadores proinflamatorios que provocan la destrucción tisular y la opacacióncorneal 12. En el centro de la citoprotección endógena se encuentra el factor eritroide 2 relacionado nuclear (Nrf2), cuya translocación al núcleo orquesta la expresión de hemo oxigenasa-1 (HO-1) y una variedad de enzimas desintoxicantes en múltiples tipos celulares corneales, incluyendo células epiteliales, queratocitos y célulasendoteliales 13,14. El envejecimiento, la diabetes y la inflamación crónica regulan a la baja este eje, haciendo que los tejidos oculares sean vulnerables a insultos oxidativos, mientras que el aumento genético o farmacológico de Nrf2 acelera el cierre de heridas epiteliales y suprime el aumento de citocinas en diversas lesionescorneales 15.
Los estudios de prueba de concepto han comenzado a explotar esta vía en la FK. Moléculas pequeñas naturales como el perildehído16, el ácidogálico 17, el hidroxitirosol18 y el compuesto organoselenioebselen 19 logran efectos antifúngicos y antiinflamatorios al potenciar la señalización de Nrf2-HO-1 mientras afectan directamente la viabilidad fúngica. Las plataformas de nanomedicina que co-administran antifúngicos y antioxidantes ilustran aún más la promesa terapéutica de combinar la eliminación de patógenos con el refuerzo de defensa del huésped20,21. Sin embargo, muchos de estos candidatos se enfrentan a obstáculos traslacionales relacionados con la complejidad de la formulación o la seguridad ocular no demostrada.
El ácido lipoico (LA) es un antioxidante ditiol ubicuo con un historial de seguridad sistémica bien establecido y una versatilidad farmacodinámica excepcional. Basado en estudios en tejidos hepáticos yneuronales, 10,12 LA se propone modificar directamente los residuos de cisteína (particularmente Cys151, Cys273 y Cys288) en la proteína ECH-1 asociada a Kelch (Keap1), interrumpiendo su interacción con Nrf2 y evitando así la ubiquitinación y degradación proteasómica de Nrf2, lo que resulta en un aumento de los niveles de proteínas Nrf2, una mayor translocación nuclear y un aumento de la transcripción de HO-1. Sin embargo, la demostración directa de la interacción Keap1-LA en células epiteliales corneales merece una investigación futura. LA ha demostrado beneficios citoprotectores en modelos hepáticos, neurales y oculares de lesiónoxidativa 13,15. Su naturaleza anfipática facilita la penetración tisular sin la toxicidad de membrana observada en polienos, y ya existen formulaciones clínicas para indicaciones tópicas y sistémicas. No obstante, la capacidad de LA para modular el microambiente inflamatorio corneal y así mejorar la FK no ha sido investigada rigurosamente.
Por tanto, el presente estudio investigó si LA podía mitigar la queratopatía inducida por A. fumigatus activando el eje Nrf2/HO-1 mientras suprimía las citocinas proinflamatorias. Utilizando células epiteliales corneales humanas y un modelo de FK murino validado, delimitamos las características dosis-respuesta, diseccionamos dependencias mecanicistas con inhibidores selectivos y comparamos los resultados terapéuticos con grupos de control no infectados y de los grupos infectados tratados con vehículos. Hasta donde sabemos, esta representa la primera investigación sistemática para establecer la eficacia terapéutica del ácido lipoico en queratitis fúngica mediante caracterización exhaustiva dosis-respuesta, disección mecanicista mediante inhibidores farmacológicos selectivos tanto de Nrf2 como de HO-1, y validación en modelos celulares y animales. Este trabajo integra de forma única lecturas moleculares, celulares y traslacionales para proporcionar evidencia definitiva de la dependencia de la vía Nrf2/HO-1 subyacente a los efectos antiinflamatorios de LA. Al integrar lecturas moleculares, celulares e in vivo , buscamos ofrecer una evaluación integral de LA como una terapia fácilmente traducible y dirigida al huésped que aborda los dos imperativos gemelos de la erradicación de patógenos y la contención inflamatoria en la FK.
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Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso Animal (Número de protocolo: IACUC-2024-FK-007) y realizados de acuerdo con la Declaración de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología para el Uso de Animales en la Investigación Oftalmológica y Visual. Los ratones machos C57BL/6, de entre 8 y 10 semanas y con un peso de 20-25 g, fueron alojados en jaulas ventiladas individualmente bajo condiciones ambientales controladas de 22 ± 2 °C y humedad relativa del 50%-60%, con un ciclo claro y oscuro de 12:12 h. Estos animales específicos libres de patógenos se obtuvieron de los Laboratorios Charles River (véase Tabla de Materiales). Todos los ratones pasaron por un periodo de aclimatación de 1 semana para adaptarse al nuevo entorno antes de los procedimientos experimentales, con acceso sin restricciones a comida y agua estándar para roedores.
PRECAUCIÓN: Aspergillus fumigatus es un organismo patógeno que requiere contención de nivel 2 de bioseguridad. Todos los cultivos fúngicos deben manipularse en un armario certificado de seguridad biológica utilizando el equipo de protección personal adecuado, incluyendo guantes, batas de laboratorio y protección ocular. El dimetilsulfóxido (DMSO) es inflamable y puede penetrar en la piel; Maneja en zonas bien ventiladas y evita el contacto directo. La ketamina y la xilazina son sustancias controladas que requieren almacenamiento seguro y documentación adecuada según la normativa institucional.
Preparación experimental
Todos los reactivos, fármacos y materiales necesarios se prepararon según el flujo de trabajo experimental (véase la Tabla de Materiales y la Figura Suplementaria 1 para el esquema). Se prepararon soluciones de stock de ácido racémico (±)-α-lipoico (LA) utilizando ácido racémico α-lipoico (1,2-ditiolano-3-pentanoico) disueltos en DMSO hasta una concentración de 60 mM y almacenados en alicotas de un solo uso a -80 °C para evitar la degradación oxidativa. El inhibidor de Nrf2 ML385 y el inhibidor de HO-1 SnPPIX fueron preparados y alicitados de forma similar para uso único para evitar ciclos de congelación y descongelación. Todos los medios y suplementos de cultivo celular se preparaban en condiciones estériles y se precalentaban a 37 °C antes de su uso.
Todos los materiales contaminados con cultivos fúngicos, incluidos placas de agar, tubos de cultivo y plásticos desechables, fueron autoclavados a 121 °C durante 30 minutos antes de su disposición en contenedores de residuos de riesgo biológico. Los residuos químicos que contenían disolventes orgánicos se recogían por separado y se eliminaban mediante protocolos institucionales de salud y seguridad ambiental. Tejidos animales y cadáveres fueron incinerados mediante servicios aprobados de residuos biomédicos.
Cultivo fúngico y preparación de infecciones
Aspergillus fumigatus se cultivó en agar dextrosa Sabouraud a 37 °C durante 5-7 días hasta que se observó la formación de conidales maduros. Los conidios se cosecharon inundando cultivos maduros con solución salina estéril protegida con fosfato (PBS) que contenía 0,05% Tween-80, y las suspensiones conidales se filtraron mediante gasas estériles para eliminar fragmentos hifales. La concentración de conidal se determinó mediante un hemocitómetro y se ajustó a concentraciones establecidas basándose en modelos publicados de queratitis fúngica. Para los experimentos in vitro, se seleccionó 1 x 106 conidios/mL (multiplicidad de infección de 10:1) basándose en estudios previos que demostraron que esta concentración induce respuestas inflamatorias robustas en células epiteliales corneales, manteniendo a la vez una viabilidad celular adecuada para análisisposteriores 16,17. Para los estudios in vivo, se eligió 1 x 107 conidios/mL, ya que este inóculo produce queratitis consistente y de gravedad moderada con puntuaciones reproducibles de la enfermedad al quinto día tras la infección, proporcionando un rango dinámico suficiente para evaluar la eficacia terapéutica sin mortalidadexcesiva 16,19.
Tratamiento animal e infección corneal
Bajo anestesia general (inyección intraperitoneal de ketamina 100 mg/kg y xilazina 10 mg/kg), se indujo queratitis fúngica creando tres arañazos lineales de 1 mm en la córnea central usando una aguja estéril de 25G, seguida de la aplicación tópica de 5 μL de suspensión conidal de A. fumigatus . Los ratones fueron asignados aleatoriamente a grupos de tratamiento (n=8 por grupo): control (no infectado), control infectado, infectado + tratamiento LA (60 μmol/L tópico 4 veces al día) y infectados + LA + tratamiento con SnPPIX (LA más 5 mg/kg de SnPPIX intraperitonealmente al día). La evaluación clínica y la recogida de tejidos se realizaron al quinto día tras la infección.
Precauciones en el manejo de animales: Todos los procedimientos que involucren animales anestesiados deben realizarse en condiciones asépticas. Monitoriza continuamente a los animales durante la anestesia para detectar depresión respiratoria. Eliminar la cama contaminada, los residuos quirúrgicos y los tejidos infectados mediante autoclavado seguido de incineración según los protocolos institucionales de gestión de residuos biológicos.
Cultivo celular y tratamiento
Las células epiteliales corneales humanas (HCEC) se obtuvieron de ATCC y se mantuvieron en medio DMEM/F-12 suplementado con suero bovino fetal al 10%, 1% penicilina-estreptomicina y 1% L-glutamina a concentraciones equimolares a 37 °C en una atmósfera humidificada del 5% de CO₂. Las células se subcultivaban cada 3-4 días al alcanzar una confluencia del 80%-90% y se usaban entre los pasos 3-8 para asegurar la consistencia. Para tratamientos experimentales, las células se sembraron en 5 x 10⁴ células por pozo en placas apropiadas y se dejaron adherir durante 24 horas antes del tratamiento. En todos los experimentos mecanicistas in vitro , las células se expusieron primero a conidios de Aspergillus fumigatus con una multiplicidad de infecciones (MOI) de 10:1 durante 4 horas para establecer la infección, seguida de la adición de LA (60 μM), ML385 (5 μM) o SnPPIX (1 μM) sola o en combinación durante 24 horas adicionales antes de la recogida de la muestra. Este diseño secuencial permite evaluar los efectos terapéuticos de LA sobre el desafío fúngico establecido en lugar de un tratamiento profiláctico.
Evaluación de la viabilidad celular (análisis CCK-8)
La viabilidad celular se evaluó utilizando el Kit de Recuento Celular-8 (CCK-8). Las células se sembraron en placas de 96 pozos a 5 x 104 células por pozo e incubadas durante 24 horas antes del tratamiento. Tras la exposición al fármaco, se añadieron 10 μL de solución de CCK-8 a cada pozo y se incubaron placas durante 2 horas a 37 °C. La absorbancia se midió a 450 nm usando un lector de microplacas multimodo. Cada condición experimental se realizó en octuplicat, y los experimentos se repitieron tres veces de forma independiente. La concentración de control del vehículo (DMSO) se mantuvo por debajo del 0,1% para evitar efectos citotóxicos.
Extracción de ARN y PCR cuantitativa en tiempo real
El ARN total se aisló de células cultivadas y tejidos corneales utilizando el Mini Kit RNeasy según el protocolo del fabricante. Las muestras de tejido se homogeneizaron en un tampón RLT utilizando un homogeneizador tisular durante 2 minutos a 50 Hz. La calidad y concentración de ARN se evaluaron con un espectrofotómetro, utilizando muestras con proporciones 260/280 de 1,8-2,0 para análisis posteriores. La síntesis de cDNA de primera cadena se realizó utilizando el Kit de Transcripción Inversa de ADNc de Alta Capacidad con 1 μg de ARN total por reacción. La PCR cuantitativa se realizó utilizando mezcla maestra qPCR basada en SYBR Green en un sistema de PCR en tiempo real, con desnaturalización inicial a 95 °C durante 2 minutos, seguida de 40 ciclos de 95 °C durante 15 s y 60 °C durante 1 minuto. Se realizó un análisis de curva de fusión para verificar la especificidad del amplicón. Todos los cebadores fueron validados para su eficiencia (90%-110%) y especificidad antes de su uso. La expresión relativa de ARNm se calculó utilizando el método 2(-ΔΔCT) con GAPDH como gen de referencia.
Extracción de proteínas y análisis de Western blot
Para la extracción total de proteínas, las células y tejidos se lisaron en un tampón RIPA suplementado con cócteles de proteasa y inhibidores de fosfatasa. Las fracciones de proteínas nucleares y citoplasmáticas se prepararon utilizando los reactivos de extracción nuclear y citoplasmática NE-PER según el protocolo del fabricante. Las concentraciones de proteínas se determinaron mediante el ensayo de Bradford. Cantidades iguales de proteína (30-50 μg) se separaron con SDS-PAGE y se transfirieron a las membranas de PVDF. Tras bloquear con leche desnatada al 5% en solución salina con Tween-20 con 0,1% Tween-20 durante 1 hora, las membranas se incubaron con anticuerpos primarios durante la noche a 4 °C, seguidas de anticuerpos secundarios conjugados con HRP apropiados durante 1 hora a temperatura ambiente. Las bandas proteicas se visualizaron utilizando reactivo de quimioluminiscencia mejorado con tiempos de exposición de 30-180 s dependiendo de la intensidad de la señal. Las bandas se cuantificaron utilizando el software ImageJ, con β-actina como control de carga para proteínas totales y lamina B1 para proteínas nucleares.
Evaluación clínica y análisis histológico
La gravedad de la enfermedad corneal se evaluó mediante un sistema estandarizado de puntuación clínica basado en protocolos establecidos para la queratitis fúngicamurina 22. El sistema de puntuación evalúa tres parámetros en una escala de 0 a 4: opacidad corneal (0 = clara, 4 = completamente opaca), irregularidad superficial (0 = lisa, 4 = ulceración grave con perforación) y respuesta inflamatoria (0 = sin infiltrado, 4 = infiltración densa con hipopión), con puntuaciones totales de 0 a 12. Todas las evaluaciones clínicas fueron realizadas por dos observadores independientes que fueron enmascarados para asignaciones de grupos de tratamiento, con un acuerdo entre observadores superior al 90%. Las fotografías córneas se capturaron utilizando un biomicroscopio de lámpara de rendija equipado con una cámara digital. Para el análisis histológico, los ojos fueron enucleados, fijados en paraformaldehído al 4%, incrustados en parafina y seccionados a 5 μm de espesor. Las secciones se tiñeron con hematoxilina y eosina para una evaluación morfológica general.
Ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas (ELISA)
Los niveles secretados de IL-1β y TNF-α en supernadadores de cultivos celulares y homogeneados de tejido corneal se cuantificaron utilizando kits comerciales de ELISA según las instrucciones del fabricante. Se recogieron supernadores de cultivo celular tras 24 horas de tratamiento, mientras que los tejidos corneales se homogeneizaron en inhibidores de proteasas que contenían PBS. Las muestras se centrifugaron a 12.000 x g durante 10 minutos a 4 °C, y se utilizaron sobrenadantes para el análisis ELISA. Todas las muestras se analizaron en duplicado y las concentraciones de citocinas se calcularon a partir de curvas estándar.
Análisis estadístico
Todos los experimentos se realizaron con réplicas biológicas adecuadas (n ≥6 para estudios in vitro , n =8 para estudios en animales) y se repitieron al menos 3 veces de forma independiente. Los datos se presentan como media ± error estándar de la media (SEM). El análisis de datos se realizó utilizando GraphPad Prism versión 9.0. Específicamente, utilizamos la función de la prueba de normalidad (Shapiro-Wilk) para evaluar la distribución de datos, ANOVA unidireccional con la prueba de comparaciones múltiples de Tukey para experimentos con más de dos grupos, y la prueba t de Student no emparejada para comparaciones entre dos grupos. Los gráficos se generaban como gráficos de barras agrupados con puntos de datos individuales superpuestos como diagramas de dispersión, con barras de error que representaban el error estándar de la media.
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El flujo de trabajo experimental demostró que el tratamiento con ácido lipoico modula eficazmente la vía de señalización Nrf2/HO-1 para suprimir la inflamación en modelos de queratitis fúngica.
Evaluación de citotoxicidad del ácido lipoico e inhibidores específicos de la vía
Se realizaron estudios iniciales dosis-respuesta para establecer concentraciones óptimas para cada compuesto utilizado en esta investigación. LA demostró una excelente biocompatibilidad con los HCECs, m...
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Los hallazgos actuales confirman que el ácido lipoico (LA) es un potente inductor del eje Nrf2/HO-1 que mitiga la queratitis fúngica (FK) al reducir la expresión de citocinas proinflamatorias y preservar la arquitectura corneal. En consonancia con trabajos recientes que muestran una activación robusta de Nrf2 por compuestos de ditiolana en trastornosoxidativos 15, LA produjo un aumento de cinco veces en los transcritos de HO-1 y redujo a la mitad la secreción de I...
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Los autores no declaran conflictos de interés relacionados con esta obra. Ninguna financiación externa ni relaciones comerciales influyó en el diseño, ejecución o interpretación del estudio.
Esta investigación fue financiada internamente por el Departamento de Oftalmología del Hospital Popular Jinan 2. Los autores agradecen con gratitud la asistencia técnica proporcionada por el personal de laboratorio para el mantenimiento de cultivos celulares y los procedimientos de modelos animales. Un agradecimiento especial al Comité de Cuidado y Uso Institucional de Animales por la revisión y aprobación del protocolo.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Anti-HO-1 | Tecnología de Señalización Celular, Danvers, MA, EE. UU. | #8803 | |
| Anti-β-actina | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU. | A5441 | |
| Antilamina B1 | Abcam, Cambridge, MA, EE. UU. | ab16048 | |
| Anti-Nrf2 | Abcam, Cambridge, MA, EE. UU. | ab62352 | |
| Aspergillus fumigatus | ATCC 204305 | N/A | |
| Kit de ensayo Bradford | Laboratorios Bio-Rad | 5000006 | |
| Ratones C57BL/6 | Laboratorios Charles River | N/A | |
| Kit de Recuento de Celdas-8 (CCK-8) | Laboratorios Dojindo, Kumamoto, Japón | 343-07623 | |
| DMEM/F-12 medio | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11320033 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Reactivo ECL | Thermo Fisher Scientific | 32106 | |
| Suero fetal bovino | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
| Imprimación hacia adelante GAPDH | Síntesis personalizada | Costumbres | |
| GlutaMAX | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 35050061 | |
| Kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad | Biosistemas Aplicados, Thermo Fisher Scientific | 4368814 | |
| Cebador delantero HO-1 | Síntesis personalizada | Costumbres | |
| Imprimador inverso HO-1 | Síntesis personalizada | Costumbres | |
| IgG anti-ratón conjugado con HRP | Abcam, Cambridge, MA, EE. UU. | ab205718 | |
| IgG anti-conejo conjugada con HRP | Abcam, Cambridge, MA, EE. UU. | ab205719 | |
| Células epiteliales corneales humanas (HCECs) | ATCC, Manassas, VA, EE.UU. | CRL-11135 | |
| IL-1 y beta; ELISA Kit | R& D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU. | DY201 | |
| Ácido lipoico (LA) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU. | T1395 | |
| ML385 (inhibidor de Nrf2) | MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, EE. UU. | HY-100523 | |
| Espectrofotómetro NanoDrop 2000 | Thermo Fisher Scientific | ND-2000 | |
| Reactivos de extracción nuclear y citoplasmática NE-PER | Thermo Fisher Scientific | 78833 | |
| Primer delantero Nrf2 | Síntesis personalizada | Costumbres | |
| Imprimador inverso Nrf2 | Síntesis personalizada | Costumbres | |
| PBS con 0,05% Tween-80 | Preparación personalizada | Costumbres | |
| Penicilina-estreptomicina | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 15140122 | |
| PowerUp SYBR Green Master Mix | Biosistemas Aplicados, Thermo Fisher Scientific | A25741 | |
| Sistema de PCR en tiempo real QuantStudio 5 | Thermo Fisher Scientific | A28140 | |
| Amortiguador RIPA | Preparación personalizada | Costumbres | |
| RNeasy Mini Kit | Qiagen, Hilden, Alemania | 74104 | |
| Agar de dextrosa Sabouraud | Preparación personalizada | Costumbres | |
| Biomicroscopio de lámpara de rendija | Equipamiento personalizado | N/A | |
| SnPPIX (inhibidor de HO-1) | Frontier Scientific, Logan, UT, EE. UU. | F6140 | |
| Lector de microplacas multimodo Synergy HTX | BioTek Instruments, Winooski, VT, EE. UU. | SYNHXTTR | |
| TBS-T (0,1% preadolescente-20) | Preparación personalizada | Costumbres | |
| TissueLyser LT | Qiagen | 69980 | |
| TNF-& alfa; ELISA Kit | R& D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU. | DY210 |
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