Evaluación experimental del polimorfismo génico de ABCB1 C3435T (rs1045642) y su asociación con la analgesia postoperatoria en la cirugía de reemplazo de cadera

Resumen

Este estudio investigó si una variante genética común afecta al control del dolor postoperatorio tras una prótesis de cadera. Los pacientes con diferentes genotipos mostraron diferencias claras en la intensidad del dolor, el uso de analgésicos y las respuestas biológicas relacionadas con el dolor.

Resumen

Este estudio investigó la asociación entre el polimorfismo génico ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) y la analgesia postoperatoria en pacientes sometidos a cirugía de reemplazo de cadera. Un total de 100 pacientes que se sometieron a una prótesis de cadera en nuestro hospital entre enero de 2023 y enero de 2024 recibieron analgesia intravenosa controlada por el paciente postoperatorio con sufentanilo. Se recogieron muestras de suero preoperatorias y se realizó la detección genómica utilizando el ensayo de genotipado TaqMan SNP. Según el genotipo C3435T, los pacientes se clasificaron en homocigotos de tipo salvaje (grupo CC), heterocigotos mutantes (grupo CT) y homocigotos mutantes (grupo TT). Se compararon entre los grupos parámetros clínicos, incluyendo características iniciales, puntuaciones de dolor de la Escala Análoga Visual (VAS), consumo de sufentanilo, mediadores del dolor sérico (prostaglandina E2 (PGE2), sustancia P (SP) y β-endorfina (β-EP)), puntuaciones de ansiedad y depresión de Hamilton, calidad del sueño y la incidencia de eventos adversos en las 24 horas posteriores a la cirugía. Las características basales fueron similares entre los grupos (p > 0,05). Las puntuaciones VAS, la dosis de sufentanil y los niveles séricos de PGE2, SP y β-EP a las 24 horas fueron significativamente más bajos en los grupos CT y TT en comparación con el grupo CC (p < 0,05). El grupo TT también mostró puntuaciones reducidas de ansiedad y depresión de Hamilton en comparación con los grupos de CC y CT (p < 0,05), mientras que el grupo CT mostró puntuaciones más altas en ansiedad y depresión que el grupo CC (p < 0,05). La calidad del sueño y las tasas de eventos adversos no difirieron significativamente entre los grupos (p > 0,05). Estos hallazgos sugieren una posible asociación entre el polimorfismo ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) y la variabilidad en la eficacia analgésica postoperatoria. Los pacientes portadores del genotipo TT tendían a experimentar mejor analgesia, menores requerimientos de sufentanilo y mejores resultados psicológicos. Aunque estos resultados son prometedores, deben interpretarse con cautela debido al tamaño reducido de la muestra y al diseño de un solo centro. Se requieren más estudios a gran escala para confirmar estas observaciones y evaluar su aplicabilidad clínica.

Introducción

El reemplazo de cadera se refiere al reemplazo de la articulación dañada por una prótesis artificial mediante cirugía. Para necrosis femoral cefálica temprana, osteoartritis de cadera y otras enfermedades, los síntomas pueden aliviarse y la condición puede retrasarse mediante un tratamiento conservador de la medicina tradicional china y occidental^integrada. Cuando el dolor y la deformidad de la articulación de la cadera afectan al caminar, no pueden aliviarse con tratamientos conservadores como los medicamentos, que afectan gravemente a la calidad de vida. La cirugía de reemplazo de cadera puede elegirse para aliviar el dolor articular, reconstruir la función de la cadera y mejorar la calidad de vida. Una serie de cambios fisiopatológicos causados por el dolor aumentarán el riesgo de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares en pacientes^{mayores 2,3}. El dolor postoperatorio afecta gravemente la recuperación de la función de la articulación de cadera, prolonga el reposo en cama de los pacientes y aumenta el riesgo de trombosis en las extremidades^inferiores. Una analgesia eficaz no solo puede aliviar las reacciones de estrés tras una operación, sino también reducir el tiempo de hospitalización de los pacientes. La regulación epigenética significa que la secuencia de ADN no cambia, pero la expresión génica se ve afectada por factores ambientales, y así^{sucesivamente 5}. Estudios recientes han demostrado ^6,7 que existe una correlación entre la regulación epigenética y la aparición y desarrollo del dolor crónico, y el dolor crónico o dolor agudo suele ser resultado de la interacción entre factores ambientales y genes. Comprender la relación entre los componentes reguladores epigenéticos y el dolor crónico, así como la identificación de biomarcadores (como los relacionados con la regulación epigenética) estrechamente vinculados a la aparición y desarrollo del dolor, especialmente el dolor crónico, puede ayudar a diagnosticar la susceptibilidad al dolor crónico, evaluar los efectos del tratamiento farmacológico y, en última instancia, promover analgesia individualizada y precisa. El polimorfismo C3435T (rs1045642) en el gen ABCB1 (gen de resistencia multifármaco 1, MDR1) es una variante mononucleótida bien caracterizada situada en el éxón 26. Este polimorfismo codifica una variante de la P-glicoproteína (P-gp), un transportador de eflujo transmembrana que regula la absorción y eflujo celular de varios fármacos, incluidos los opioides, influyendo así en su farmacocinética y respuesta^{terapéutica 8}. Entre las variantes genéticas de ABCB1, el polimorfismo sinónimo C3435T (rs1045642) ha sido estudiado extensamente en relación con la variabilidad interindividual en la respuesta a los fármacos. ABCB1 C3435T (rs1045642) es una sustitución sinónima localizada en el éxón 26 del gen^{MDR1 9}. Aunque no altera la secuencia de aminoácidos, la evidencia acumulada sugiere que esta variante puede influir en la estabilidad del ARNm y la cinética de traslación, afectando así el plegamiento de la P-glicoproteína, los niveles de expresión o la eficiencia del transporte. Aunque los hallazgos entre estudios no son del todo consistentes, varios informes han indicado que el alelo T está asociado con una reducción de la expresión de P-gp o una alteración de la especificidad del^sustrato. Dado que la P-gp expresada en la barrera hematoencefálica limita la penetración del sistema nervioso central de muchos fármacos, incluidos ciertos opioides, el polimorfismo ABCB1 C3435T puede contribuir a diferencias individuales en la sensibilidad al sufentanil y los efectos adversos relacionados con^{opioides 11}.

El propósito de este estudio fue investigar si el polimorfismo ABCB1 C3435T está asociado con la variabilidad interindividual en la eficacia analgésica postoperatoria y los resultados relacionados con el dolor en pacientes sometidos a cirugía de reemplazo de cadera. La cirugía de reemplazo de cadera se asocia comúnmente con dolor postoperatorio moderado a intenso, y opioides como el sufentanil se usan rutinariamente para analgesia postoperatoria. Sin embargo, existen diferencias interindividuales sustanciales en la respuesta analgésica y los efectos adversos relacionados con los opioides, que no pueden explicarse completamente solo por factores clínicos. Dado que la P-glicoproteína codificada por el gen ABCB1 desempeña un papel clave en la regulación del transporte de fármacos a través de membranas biológicas, incluida la barrera hematoencefálica, la variación genética en ABCB1 puede influir en la disposición de los opioides y en los efectos analgésicos centrales. Por lo tanto, examinar la relación entre el polimorfismo ABCB1 C3435T y la analgesia postoperatoria puede ayudar a clarificar la contribución genética a la variabilidad en el control del dolor tras la cirugía de reemplazo de cadera. Al analizar las diferencias en los efectos analgésicos postoperatorios entre pacientes con diferentes genotipos, este estudio pretende revelar las variaciones individuales en el dolor postoperatorio y proporcionar una base teórica para la analgesia individualizada clínica. Simultáneamente, amplía la comprensión del mecanismo por el cual el polimorfismo del gen C3435T influye en la analgesia postoperatoria, proporcionando una base para investigaciones posteriores.

Protocolo

Este estudio se llevó a cabo de acuerdo con la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité de Ética Médica del Hospital de Medicina Tradicional China de Fuzhou (Número de Aprobación: LC-2023-048). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes antes de la inscripción.

Datos y métodos
Basándonos en la hipótesis de investigación, desarrollamos un protocolo de estudio prospectivo de análisis de cohortes. Un total de 100 pacientes sometidos a cirugía de reemplazo de cadera electiva fueron inscritos prospectivamente, con una edad media de 58,41 ± 6,97 años. La Figura 1 ilustra la hoja de ruta técnica de este protocolo, con descripciones detalladas del diseño del estudio proporcionadas en las siguientes secciones.

Diseño del estudio y participantes
Se trató de un estudio de cohorte prospectivo que incluyó a adultos consecutivos programados para una artroplastia primaria de cadera bajo anestesia general entre enero de 2023 y enero de 2024. Los criterios de inclusión fueron de 18 a 60 años, clase I a II de la Sociedad Americana de Anestesiólogos (ASA) y cirugía realizada por el mismo equipo ortopédico. Los criterios de exclusión incluyeron disfunción cardiopulmonar, hepática o renal significativa (definida como creatinina sérica >1,5 mg/dL o ALT >3x límite superior de lo normal); antecedentes de dolor crónico (por ejemplo, fibromialgia, dolor neuropático); abuso de sedantes u opioides; alergia conocida a analgésicos; exposición a otros opioides durante la enfermedad actual; y uso preoperatorio prolongado de analgésicos o esteroides (>1 semana en los 3 meses previos a la cirugía). De los participantes, se recogieron 5 mL de sangre venosa anticoagulada con EDTA preoperatoriamente para la genotipificación. El ADN genómico se extrajo de la sangre periférica utilizando un kit comercial de extracción de ADN según las instrucciones del fabricante. El polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642) fue genotipado utilizando métodos basados en reacción en cadena de la polimerasa, y la determinación del genotipo se realizó según los protocolos^{establecidos 10}. Tras genotipar el polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642), los participantes se estratificaron en grupos CC, CT y TT. No se incluyó ningún grupo control sano externo; Todas las comparaciones se realizaron entre grupos de genotipos (CC, CT, TT). El personal de laboratorio que analizaba biomarcadores y genotipos quedó ciego ante los resultados clínicos.

Anestesia y manejo intraoperatorio
El seguimiento estándar incluía electrocardiografía, presión arterial no invasiva (medida cada 5 minutos), oximetría de pulso y dióxido de carbono al final de la marea (EtCO₂). Se estableció una línea intravenosa usando un catéter de 18G, y los pacientes fueron preoxigenados con 100% de O₂ mediante mascarilla durante 3 minutos. Se indujo anestesia con midazolam 0,05 mg/kg, cisatracurio 0,1 mg/kg, sufentanil 0,4 μg/kg y propofol ajustado a 1-2 mg/kg hasta perder el conocimiento y relajarse adecuadamente la mandíbula. Se realizó intubación traqueal tras confirmar un bloqueo neuromuscular suficiente (recuento de tren de cuatro = 0). La ventilación mecánica se configuró en modo controlado por volumen con una frecuencia respiratoria de 15 respiraciones/min, volumen de marea de 6-8 mL/kg de peso corporal previsto y PEEP de 5 cm H₂O, con ajustes para mantener el EtCO₂ en 35-45 mmHg. La anestesia se mantuvo con propofol 0,08-0,12 mg/kg/min y sufentanil 0,15-0,30 μg/kg/h. Los anestésicos intravenosos se suspendieron al cierre de la herida. La hemodinámica se gestionó con bolos de líquido o vasopresores según fuera necesario para mantener la MAP dentro del 20% del valor basal.

Procedimiento de artroplastia de cadera¹²
Los pacientes se colocaron en la posición de decúbito lateral con el lado operatorio hacia arriba. Se utilizó un enfoque posterolateral: se realizó una incisión cutánea de 15-20 cm centrada sobre el trocánter mayor. Se incisionaron tejido subcutáneo y fascia lata, y el glúteo mayor se partió de forma sin rodeos. La cápsula posterior quedó expuesta, y se realizó una capsulotomía en forma de T a lo largo del borde acetabular. La cadera se dislocó por rotación externa y aducción. La cabeza femoral fue resecada y el cuello femoral recortado a 1,0-1,5 cm por encima del trocánter menor. Para la hemiartroplastia, el conducto femoral se preparó con broches secuenciales (aumento de tamaño: 1 mm escalones), y el tallo femoral se implantó con aproximadamente 15° de anteversión. Para la artroplastia total de cadera, se escarió el acetábulo hasta que se observó sangrado puntual, con un ángulo de abducción en copa de 45° y un ángulo de anteversión de 15°. Los componentes se cementaron o se ajustaron por presión basándose en una evaluación intraoperatoria de la calidad ósea y la estabilidad del implante. Tras la reducción, la estabilidad de la cadera y el rango de movimiento fueron evaluados intraoperatoriamente por el cirujano operario mediante flexión pasiva, extensión, rotación interna y externa, y abducción, con especial atención a la presencia de pinzamiento o luxación. Se colocaba un drenaje de succión cerrado si era necesario, y la herida se cerraba en capas usando suturas absorbibles para la fascia profunda y el tejido subcutáneo, y suturas no absorbibles o grapas para la piel para el cierre de la piel.

Analgesia intravenosa controlada por el paciente (PCIA) postoperatoria
Se utilizó un régimen estandarizado de sufentanil PCIA para todos los participantes. La solución analgésica consistía en sufentanilo a 1,5 μg/mL, diluido en 0,9% de solución salina y cargado en una bomba de infusión programable. La configuración de la bomba era infusión de fondo 1 mL/h, dosis de bolo 1 mL y intervalo de bloqueo de 10 minutos, sin dosis de carga salvo que clínicamente indicara. Los pacientes recibieron instrucción estandarizada sobre el uso de PCIA en el área de recuperación. El consumo acumulado de sufentanil se registró a partir del registro de extracción a las 24 horas postoperatorias. Todos los modelos de bombas, desechables y consumibles están listados en la Tabla de Materiales.

Extracción y procesamiento de sangre
Las muestras de genotipado preoperatorias consistieron en 5 mL de sangre venosa anticoagulada con EDTA mezclada por inversión suave. Para los análisis mediadores del dolor, se recogieron 5 mL de sangre venosa en los días postoperatorios 1, 2, 3 y 7. Para la preparación del suero, las muestras se dejaron coagular durante 30 minutos a temperatura ambiente; Para el plasma, se utilizaba el anticoagulante especificado por el ensayo. Las muestras se centrifugaron a aproximadamente 1.000 x g durante 15 minutos a temperatura ambiente para separar suero o plasma. El sobrenadante se alicuaba en tubos de baja unión etiquetados y se almacenaba a −80 °C hasta el análisis. Para minimizar los ciclos de congelación y deshielo, se prepararon un mínimo de dos alicotas por punto temporal.

Extracción de ADN genómico y genotipado de SNP
El ADN genómico se extrajo de la sangre total utilizando un kit de extracción de ADN genómico basado en columnas de membrana de sílice (disponible comercialmente) siguiendo el protocolo del fabricante. La concentración y pureza del ADN se midieron espectrofotométricamente, considerándose aceptables muestras con proporciones A260/280 de 1,8-2,0. El ADN se almacenaba a −20 °C hasta su uso.

El polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642) fue genotipado usando un ensayo de genotipado TaqMan SNP prediseñado en una plataforma de PCR en tiempo real. El ensayo incluía cebadores preoptimizados y sondas de hidrólisis. Las condiciones de ciclo térmico siguieron las recomendaciones del fabricante (95 °C para activación enzimática, luego 40 ciclos de 95 °C durante 15 s y 60 °C durante 60 s). Se incluyeron controles sin plantilla y muestras duplicadas (≥10% del total) para el control de calidad. La llamada de genotipo se realizó utilizando un software de análisis de discriminación alélica, con una tasa de llamada ≥95% y una concordancia duplicada del 100% requerida para la aceptación.

Ensayos mediadores del dolor
Se midieron prostaglandinas séricas E₂ (PGE₂), sustancia P (SP) y β-endorfina (β-EP) utilizando kits validados de radioinmunoensayo o inmunoensayo sándwich según las instrucciones del fabricante. Se generaron curvas de calibración utilizando al menos cinco estándares que abarcaban el rango de concentración esperado; los desconocidos y los controles se ejecutaban en duplicado. Se registraron los límites inferiores de detección, los coeficientes de variación intraensayos y los coeficientes de variación entre ensayos; se repitieron ensayos con CV intraensayo >10% o CV interensayo >15%). Todos los nombres de kits y números de catálogo están listados en la Tabla de Materiales.

Medidas de resultado
Las características basales incluían edad, sexo, índice de masa corporal, duración quirúrgica, enfoque quirúrgico (anterior/posterior), tipo de prótesis (cementada/no cementada), VAS del dolor preoperatorio (0-10), puntuaciones preoperatorias de ansiedad y depresión, y dosis intraoperatoria de sufentanilo. Los resultados primarios a las 24 horas fueron la intensidad del dolor en reposo, medida mediante la Escala Análoga Visual (VAS, 0-10) y el consumo acumulado de sufentanil registrado en la bomba PCIA. Los resultados secundarios a las 24 horas incluyeron calidad del sueño (puntuación 0-3; puntuaciones más altas indican peor sueño), incidencia de náuseas y vómitos postoperatorios (PONV) y puntuaciones de la Escala de Ansiedad y Depresión de Hamilton. Los resultados exploratorios incluyeron niveles séricos de PGE₂, SP y β-EP en los días postoperatorios 1, 2, 3 y 7.

Análisis estadístico
Las variables continuas se presentan como media ± desviación estándar (DE) o mediana (rango intercuartílico) según la distribución; variables categóricas como conteos (porcentajes). Los datos se analizaron para verificar su normalidad usando la prueba de Shapiro-Wilk y para la homogeneidad de las varianzas usando la prueba de Levene. Para variables distribuidas normalmente con varianzas iguales, se aplicó un análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) con comparaciones post-hoc de Bonferroni (o Tukey); de lo contrario, se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis con el procedimiento post-hoc de Dunn. Las variables categóricas se analizaron usando χ² o la prueba exacta de Fisher, según correspondá. Se calcularon las frecuencias de genotipo y alelo, y se evaluó el equilibrio de Hardy-Weinberg mediante la prueba χ² . Se estimaron razones de probabilidad (OR) con intervalos de confianza (IC) del 95% para asociaciones entre genotipo (por ejemplo, portadores del alelo T frente a CC) y resultados dicotomizados cuando correspondía. Antes de aplicar pruebas paramétricas, se analizaron distribuciones de datos para determinar la normalidad (prueba de Shapiro-Wilk) y la homogeneidad de la varianza (prueba de Levene). En los casos en que se violaron suposiciones, se utilizaron alternativas no paramétricas (prueba de Kruskal-Wallis con prueba de Dunn post-hoc). Realizar la verificación de equilibrio Hardy-Weinberg usando la prueba del chi-cuadrado. Calcular la razón de probabilidades (OR) y el intervalo de confianza (IC) del 95% para analizar la asociación entre el genotipo y la puntuación de dolor postoperatorio, así como el consumo de sufentanilo. Se consideró estadísticamente significativo un p < 0,05 bilateral. Los análisis se realizaron con software estadístico validado.

Resultados

Características de los participantes y distribución del genotipo
Un total de 100 pacientes fueron inscritos y genotipados con éxito para el polimorfismo ABCB1 C3435T. La distribución del genotipo fue del 40,0% (40/100) para CC, 49,0% (49/100) para TC y 11,0% (11/100) para TT. Las frecuencias alelares fueron 64,5% para C (129/200) y 35,5% para T (71/200). La distribución del genotipo se ajustó al equilibrio de Hardy-Weinberg (χ² = 0,49, p = 0,48; Tabla 1). Las carac...

Discusión

La prótesis de cadera es una operación ortopédica mayor común, y el dolor postoperatorio es uno de los principales problemas a los que se enfrentan los pacientes. El efecto de la analgesia postoperatoria está influenciado por muchos factores, incluyendo factores individuales como la edad del paciente, el sexo, el peso y la sensibilidad al dolor, así como factores externos como el modo de operación y el ejercicio de rehabilitación^{postoperatoria 13,14}

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Inyección de cloruro de sodio al 0,9%	Fresenius Kabi	19194	Diluyente para sufentanil (solución PCIA) y otros fármacos; utilizado para la irrigación de heridas durante la cirugía [documento: "PCIA postoperatorio", "Procedimiento de artroplastia de cadera"].
Software de análisis de discriminación alélica (para PCR en tiempo real)	No especificado (igual que la plataforma de PCR en tiempo real)	No especificado	Utilizado para la llamada de genotipos de ABCB1 C3435T; requiere tasa de llamada y GE; 95% y concordancia duplicada 100% [documento: "Extracción genómica de ADN y genotipado SNP"].
Centrífuga (para separación suero/plasma)	Beckman Coulter	Avanti J - E	Opera en ~1000 y horas; g (&asínpico; 3000 rpm, radio de rotor de 10 cm); centrifuga muestras de sangre durante 10-20 minutos a temperatura ambiente para separar suero/plasma [documento: "Muestreo y procesamiento de sangre"].
Inyección de cisatracurio	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	H20060869	Agente bloqueador neuromuscular para intubación traqueal, dosis 0,1 mg/kg [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Analizador de Química Clínica	Roche Diagnostics	Cobas c 501	Detecta biomarcadores séricos (PGE2, SP, β-EP) [documento: "Ensayos mediadores del dolor"].
Anticoagulante EDTA	BD Vacutainer	366450	Utilizado para la recogida de sangre venosa preoperatoria (5 mL) para extracción genómica de ADN y genotipado; muestras mezcladas por inversión suave para prevenir la coagulación [documento: "Diseño del estudio y participantes", "Muestreo y procesamiento de sangre"].
Electrocardiografía (ECG)	Philips	CardioPerfect MX800	Parte del seguimiento intraoperatorio estándar [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Nota final	Clarivate Analytics	X9	Ayuda en la gestión y formato de referencias (conforme a las normas de citación de revistas) [referencia: "JoVE_Materials.xls"].
Monitor de Dióxido de Carbono End-Tidal (ETCO2)	Masimo	Rad - 97	Forma parte de la monitorización intraoperatoria estándar; utilizado para mantener la normocapnia [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Frigorífico de baja temperatura (-80°C; C/-20° C)	Haier	DW - 86L626 (-80° C); DW - 25L262 (-20° C)	-80°C; C para almacenar suero/plasma aquotado; -20º; C para almacenar ADN genómico extraído [documento: "Muestreo y procesamiento de sangre", "Extracción de ADN genómico y genotipado SNP"].
Inyección de midazolam	Jiangsu Enhua Pharmaceutical Co., Ltd	H10980025	Agente de inducción anestesiosa, dosis 0,05 mg/kg [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Monitor de presión arterial no invasivo	Omron	HEM - 9072T	Parte del seguimiento intraoperatorio estándar [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Bomba de analgesia intravenosa programable (PCIA)	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Se utiliza para la administración postoperatoria de sufentanil; Ajustes: infusión de fondo 1 mL/h, dosis de bolo 1 mL, intervalo de bloqueo 10 min; registra el consumo acumulado de sufentanil [documento: "PCIA postoperatorio"].
Inyección de Propofol	AstraZeneca	H20120088	Inducción anestesica (ajustada hasta pérdida de conciencia) y mantenimiento (0,08-0,12 mg· kg-1· min-1) [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Kit de radioinmunoensayo Prostaglandin E2 (PGE2)	Cayman Chemical	514010	Kit validado para detección suero de PGE2; ejecutado en duplicado, con CV y LE intraensayos; 10% y CV y ensayo interensayos; 15% (repetido si supera los límites) [documento: "Ensayos mediadores del dolor"].
Pulsioxímetro			Forma parte del monitoreo intraoperatorio estándar (mide SpO2) [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Plataforma de PCR en tiempo real	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Utilizado para el genotipado ABCB1 C3435T; Condiciones de ciclo térmico: activación enzimática, 40 ciclos de desnaturalización (95&º; C, ~15 s) y recocido/extensión (60° C, ~60 s) [documento: "Extracción genómica de ADN y genotipado SNP"].
Kit de extracción de ADN genómico basado en columnas de membrana sílice	Qiagen	51104	Utilizado para extraer ADN genómico de sangre total; los procedimientos incluyen lisis celular, digestión de proteínas, adsorción de ADN, lavados secuenciales y elución en 100 & mu; Tampón de elución L [documento: "Extracción genómica de ADN y genotipado SNP"].
Espectrofotómetro	Thermo Fisher Scientific	NanoDrop One	Mide la concentración y pureza del ADN; muestras con A260/280 y asínpica; 1.8-2.0 considerado aceptable [documento: "Extracción de ADN genómico y genotipado de SNPs"].
SPSS	IBM Corporation	26	Utilizado para análisis estadístico: prueba de normalidad de Shapiro-Wilk, Levene' prueba s, ANOVA, prueba de Kruskal-Wallis y chi; ² prueba, etc. [documento: "Análisis estadístico"; referencia: "JoVE_Materials.xls"].
Kit de radioinmunoensayo de la sustancia P (SP)	Merck Millipore	RAB0456	Kit validado para la detección de SP en suero; mismos estándares de control de calidad que el kit PGE2 [documento: "Ensayos de mediador del dolor"].
Inyección de Sufentanil	Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd.	NA	Utilizado para inducción anestesica (0,4 y mu; g/kg), mantenimiento intraoperatorio (0,15-0,30 y mu; g· kg-1· h-1), y PCIA postoperatorio (1,5 y mu; g/mL diluido en 0,9% de solución salina) [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio", "PCIA postoperatorio"].
Ensayo de genotipado TaqMan SNP (para ABCB1 C3435T, rs1045642)	Qiagen	51104	Ensayo de sonda de hidrólisis específico para alelos prediseñado para genotipado PCR en tiempo real del polimorfismo ABCB1 C3435T [documento: "Extracción genómica de ADN y genotipado SNP"].
Equipo de intubación traqueal (laringoscopio, tubo endotraqueal)	Draeger	Capnomac Ultima	Utilizado para la intubación traqueal tras confirmar el bloqueo neuromuscular [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Ventilador controlado por volumen	Drä ger	Primus	Utilizado para ventilación mecánica intraoperatoria; Ajustes: frecuencia respiratoria ~15 respiraciones/min, volumen de marea 6-8 mL/kg peso corporal previsto [documento: "Anestesia y manejo intraoperatorio"].
Kit de inmunoensayo sándwich de endorfinas β-EP	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Kit validado para detección sérica y beta-EP; curvas de calibración generadas con ≥ 5 normas [documento: "Ensayos mediadores del dolor"].