Aplicación avanzada de la electroforesis capilar en la detección de proteínas monoclonales en suero de alta resolución

Resumen

Aquí presentamos un protocolo para el análisis de proteínas séricas de alta resolución utilizando electroforesis capilar. Bajo un campo eléctrico de alto voltaje, las proteínas séricas migran a través de un capilar en función de la carga y la movilidad electroforética. El electroferograma resultante permite la detección, localización y cuantificación de picos de proteínas monoclonales.

Resumen

La inmunoglobulina monoclonal, también conocida como proteína M o paraproteína, se produce por la proliferación clonal de células plasmáticas o linfocitos B y actúa como un biomarcador clave para las gammopatías monoclonales. La detección y cuantificación precisa de la proteína M sérica es esencial para el diagnóstico temprano de la enfermedad, la clasificación clínica y el seguimiento terapéutico. Este protocolo describe un método que utiliza electroforesis capilar (EC) para la separación de proteínas séricas en alta resolución. Las proteínas se separan en un tampón alcalino bajo electroforesis de alto voltaje y se detectan mediante absorbancia ultravioleta, generando electroferogramas que permiten una visualización clara y cuantificación de picos proteicos monoclonales anormales. En comparación con los métodos tradicionales, la CE proporciona una mejor resolución de la región beta y permite un análisis automatizado y rápido con requisitos mínimos de manejo de muestras. Cinco electroferografías representativas demostraron migración de la proteína M en las regiones β1, β2 y γ, con niveles de proteína M de 0, 44,1% (45,8 g/L), 10,5% (8,6 g/L), 35,5% (28,4 g/L) y picos duales del 41,3% (46,0 g/L) y 12,4% (13,8 g/L). En un estudio retrospectivo de 700 muestras clínicas de suero, la CE logró una tasa de detección positiva del 51,86%, frente al 52,86% de la electroforesis por inmunofijación (IFE). Utilizando IFE como método de referencia, la CE demostró una sensibilidad del 92,70% y una especificidad del 93,94%. Estos hallazgos confirmaron que la CE es un enfoque rápido y automatizado para el cribado y cuantificación de la proteína M sérica en laboratorios clínicos rutinarios.

Introducción

Los trastornos relacionados con la proteína M se caracterizan por la presencia de una inmunoglobulina monoclonal (proteína M) en el sérico y/o la orina. Estas proteínas suelen ser secretadas por células plasmáticas clonales o linfocitos B y se asocian principalmente con discrasias malignas de células plasmáticas o gammopatías monoclonales^{benignas 1,2}. El espectro clínico de estas condiciones incluye gammopatía monoclonal de significado indeterminado (MGUS), plasmocitoma solitario (SPC), mieloma múltiple latente (SMM), mieloma múltiple (MM), leucemia de células plasmáticas (PCL....

Protocolo

El protocolo del estudio fue revisado y aprobado por el Comité de Revisión Ética del Hospital Popular Provincial de Guangdong (Número de aprobación: KY2025-176-01). Todos los participantes proporcionaron su consentimiento informado por escrito antes de la recogida de la muestra.

1. Preparación del material

NOTA: El kit de reactivos debe almacenarse a 2–30 °C y tener una vida útil de hasta 3 años.

1. Guarda el buffer de funcionamiento a 2–8 °C y deja que alcance la temperatura ambiente antes de usarlo. Una vez abierta, la solución permanece estable hasta 3 meses. Utiliza esta solución com....

Resultados

Las posiciones de migración, las características máximas y los porcentajes relativos de cada banda proteica se analizaron cuantitativamente detectando la absorción de la proteína sérica. Posteriormente se realizó la interpretación clínica basada en la presencia y el patrón de bandas anormales observadas en el electroferograma. Un electroferograma capilar representativo que muestra el patrón normal de migración de las fracciones de proteínas séricas se muestra en la Figura 1. Las variaciones .......

Discusión

La SPE es una técnica diagnóstica fundamental en laboratorios clínicos, que separa proteínas séricas en función de diferencias en sus puntos isoeléctricos, pesos moleculares y^{conformaciones 19}. Este estudio describe sistemáticamente un protocolo para la detección y cuantificación rápida de la proteína M sérica utilizando EC. El protocolo destaca el excelente rendimiento analítico del método, siendo sus principales ventajas la alta sensibilidad, el alto rendimiento.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
TAMPÓN DE LA PROTEÍNA CAPI 3 (E) 6	SEBIA	2503	Tampón de corrida utilizado para la separación de proteínas séricas en electroforesis capilar (denominado tampón de corrida en el manuscrito).
Solución de lavado de lavado	SEBIA	2062	Solución diluida para enjuague utilizada para limpiar tubos capilares tras electroforesis.
Copas de reactivo	SEBIA	2582	Para dilución de muestras en instrumentos totalmente automáticos.
CAPILARES DE FILTROS	SEBIA		Filtro desechable utilizado para filtrar soluciones tampón y agua desionizada durante la limpieza capilar.
CAPICLEAN	SEBIA	2060	Para la limpieza de tubos capilares de instrumentos CAPILLARYS 3 OCTA (denominados solución de limpieza capilares en el manuscrito)
Solución de hipoclorito de sodio	Fábrica de Reactivos Químicos de Guangzhou	1703079	Para la limpieza de la sonda de muestra.
Agua desionizada	Watsons	/	Se utiliza para el enjuague capilar en el analizador automático de electroforesis capilar.
Control de calidad Randox	Randox	HN1530	Para el control de calidad.
Analizador de electroforesis capilar totalmente automatizado	SEBIA	CAPILARES 3 OCTA	Instrumento utilizado para el análisis de proteínas séricas de alta resolución y alto rendimiento.
Software PHORESIS 9.30	SEBIA	/	Software utilizado para la adquisición y análisis automatizados de patrones de electroforesis.