Artículo de método
El seguimiento de los niveles de neurotransmisores extracelular en las regiones cerebrales distintas de animales libres de movimiento además de informaciones sobre el vínculo entre la liberación de neurotransmisores y la conducta. Microdiálisis in vivo, junto con detección electroquímica ofrece anatómica excelente y la resolución de químicos, así como información sobre cómo la neurotransmisión basal se ve alterada por las manipulaciones farmacológicas o fisiológicas.
La capacidad de medir los niveles extracelulares basales de los neurotransmisores en el cerebro de los animales despiertos permite la determinación de los efectos de los diferentes retos sistémicos (farmacológica o fisiológica) para el sistema nervioso central. Por ejemplo, uno puede medir directamente cómo las proyecciones de la dopamina del cerebro medio animal responde a la dopamina-la liberación de fármacos, como los estímulos d-anfetamina o naturales como la comida. En este video, te mostramos cómo implantar cánulas guía de orientación sitios específicos en el cerebro de la rata, la forma de insertar e implantar una sonda de microdiálisis y el uso de cromatografía líquida de alto rendimiento, junto con detección electroquímica (HPLC-CE) para medir los niveles extracelulares de oxidables neurotransmisores y metabolitos. Introducción Local precisa de fármacos a través de la sonda de microdiálisis permite un trabajo refinado en la especificidad del sitio en el mecanismo de un compuesto s de la acción. Esta técnica ha anatómica excelente y la resolución de química, pero sólo el tiempo de resolución modesta como muestras de microdiálisis se procesan cada 20-30 minutos para asegurar niveles detectables de neurotransmisores. Complementarias ex herramientas vivo (es decir, cortar y de cultivo celular, electrofisiología) puede ayudar con la monitorización en tiempo real de la neurotransmisión.
Resumen
Dos meses de edad, los ratones C57BL/6J edad media o equivalente o tres meses de edad promedio de edad de las ratas Sprague Dawley o equivalente son anestesiados con ketamina (60 mg / kg ip para las ratas, 100 mg / kg ip de ratones) y xilazina (10 mg / kg, ip, ya sea para las especies). La sedación se controla mediante una pizca punta suave reflejo de retirar demostrado en Walantus et al. (JOVE, 6, 2007) y Szot et al. (JOVE, 9, 2007). Termorregulación puede ser proporcionada a través de una almohadilla eléctrica thermostatregulated (ALA Instruments Inc.) y monitoreados a tra....
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Microdiálisis in vivo es la herramienta de elección para la medición de múltiples neurotransmisores y metabolitos en sitios distintos del cerebro de un animal vivo. Sin embargo, sólo controla los niveles extracelulares de neurotransmisores y que no ofrece el tiempo de resolución de monitor de exocitosis de neurotransmisores en tiempo real. A través de una versión de la técnica llamada "red de flujo", la concentración de neurotransmisores real en un lugar determinado se puede calcular, que a su vez puede dar las medidas exactas de .......
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Los autores no tienen nada que revelar.
Con el apoyo de DK065872 (PEV), una familia Smith Premio de la Fundación de Excelencia en Investigación Biomédica (PEV), F31 DA023760.
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