El apoyo de bicapa plana para la Formación de Estudio de la sinapsis inmunológica y Kinapse

Resumen

Apoyado bicapas planas son potentes herramientas que pueden ser utilizados para modelar las interacciones moleculares en una sinapsis inmunológica. Aquí, se muestra los métodos para el anclaje de las proteínas de adhesión celular sabe que modulan la formación de sinapsis en el folleto superior de la bilyer lípidos y visualizar la formación de sinapsis mediante microscopía TIRF.

Resumen

Apoyado bicapas planas son potentes herramientas que pueden ser utilizados para modelar las interacciones moleculares en una sinapsis inmunológica. Para imitar la interacción entre los linfocitos y las células presentadoras de antígenos, se utiliza Ni2 + quelante de los lípidos para anclar la adhesión celular recombinante y proteínas MHC de la hoja superior de una bicapa con poli-histidina etiquetas. Bicapas planas son generados por la preparación de los lípidos, el tratamiento de las superficies de vidrio en la doble capa se forma, y ​​luego la formación de la bicapa en una cámara especial que contiene una celda de flujo, donde los linfocitos se añadirán. Entonces, bicapas están acusados ​​de Ni y su marcada con proteínas recombinantes se agregan. Finalmente, los linfocitos se inyectan en la celda de flujo y microscopía TIRF se puede utilizar para la formación de imágenes sinapsis y los mecanismos que controlan la locomoción de las células T, los sitios de la clasificación de los receptores, y los sitios de la degradación del receptor.

Protocolo

1. La preparación de los lípidos

1. A fin de vincular las proteínas de la hoja superior de una bicapa, usamos Ni ^{2 +} lípidos quelantes, que anclan las proteínas recombinantes con poli-histidina etiquetas. Ciertos tipos de células pueden adherirse de forma inespecífica a Ni ^{2 +} con recubrimiento bicapa, pero las células T en general, no, por lo que este método óptimo para el estudio de la activación de células T.
2. La solución bicapa lipídica se realiza mediante la preparación de una solución de 20% de Ni ^{2 +} quelante de lípidos y el 80% de fosfatidilcolina en la cuantía apropiada en un tubo de vidrio con 2.1 ml de cloro....