Una técnica para la recolección de serie del líquido cefalorraquídeo de la cisterna magna en el ratón

Resumen

Transgénicos (Tg) los modelos de ratón de Alzheimer proporcionan una excelente oportunidad para investigar cómo y por qué los niveles de Aß y tau en el cambio CSF ​​conforme progresa la enfermedad en pacientes humanos. Este sentido, demuestran una refinada técnica de punción cisterna magna para el muestreo de LCR de serie del ratón.

Resumen

La enfermedad de Alzheimer (EA) es una enfermedad neurodegenerativa progresiva que es caracterizada patológicamente por depósito extracelular de péptidos β-amiloide (Aß) y la acumulación intraneuronal de proteína tau hiperfosforilada. Debido a que el líquido cefalorraquídeo (LCR) está en contacto directo con el espacio extracelular del cerebro, que proporciona un reflejo de los cambios bioquímicos en el cerebro en respuesta a procesos patológicos. LCR de pacientes con EA muestra una disminución de los 42 aminoácidos forma de Aß (Aß42), y el aumento de tau total y tau hiperfosforilada, aunque los mecanismos responsables de estos cambios aún no se entienden completamente. Transgénicos (Tg) los modelos de ratón de Alzheimer proporcionan una excelente oportunidad para investigar cómo y por qué los niveles de Aß y tau en el LCR cambio a medida que progresa la enfermedad. Este sentido, demuestran una refinada técnica de punción cisterna magna para el muestreo de la enfermedad por el ratón. Esta técnica de muestreo muy suave permite que las muestras de LCR en serie que se obtenga de el mismo ratón a intervalos de 2-3 meses, que minimiza en gran medida el efecto de confusión de la variabilidad entre el ratón en los niveles de Aß o tau, por lo que es posible detectar alteraciones sutiles en el tiempo. En combinación con Aß y ELISA tau, esta técnica será útil para los estudios diseñados para investigar la relación entre los niveles de CSF Aß42 y tau, y su metabolismo en el cerebro en modelos de ratón de Alzheimer. Los estudios en ratones Tg podría proporcionar validación importante en cuanto a la posibilidad de Aß CSF o los niveles de tau para ser utilizados como marcadores biológicos de progresión de la vigilancia de las enfermedades, y para controlar el efecto de las intervenciones terapéuticas. Como los ratones pueden ser sacrificados y los cerebros pueden ser examinadas por los cambios bioquímicos o histológicos, los mecanismos subyacentes a los cambios del LCR puede ser mejor evaluado. Estos datos pueden ser de carácter informativo para la interpretación de los cambios humanos AD CSF.

Protocolo

Tirar del tubo capilar de vidrio

1. El tubo capilar de vidrio se compra a La Inc Sutter Instrument (vidrio borosilicato, B100-75-10).
2. Tire de los tubos capilares en un Sutter P-87 Flaming micropipeta extractor, con el índice de calor en 300 y el índice de presión de 330.
3. Recorte el extremo del tubo capilar de vidrio con unas tijeras, de modo que la punta cónica tiene un diámetro interior de 0,5 mm.

Cisterna magna técnica de punción de líquido cefalorraquídeo

Muestras de LCR se han tomado de la cisterna magna (Figura 1) utilizando un método que se publicó anteriormente ^1.

Discusión

Se describe un protocolo de alta fiabilidad para la toma de muestras de LCR en serie de los ratones sin contaminación detectable en plasma.

1. El procedimiento completo generalmente toma 10 minutos por ratón (incluyendo la anestesia). El volumen de líquido cefalorraquídeo obtenido depende de las cepas de ratones. En el PS / APP ratones Tg doble que used2, el volumen promedio es de aproximadamente 5 l (3 a 7 l), mientras que el P301L (JNPL3) 3 ratones dan un rendimiento de alrededor de 10 l-15 l. Para el muestreo de serie, un máximo .......