Name: Modelado de la colitis murino utilizando sulfato de dextrano sódico (DSS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Aprende a inducir colitis aguda en ratones usando sulfato de dextrano sódico al 3% en agua potable durante cuatro días. Este protocolo estandarizado permite analizar cambios tisulares coloniales mediante preparación de rollos suizos o salchichas para microscopía.

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Financiamiento proporcionado por el NIH (1 K08 DK080221-01) y los fondos de Vanderbilt de desarrollo institucional.

Parte 1: Modelo de reparación de lesiones Colitis <ol><li> Peso inicial se debe obtener para cada ratón antes de comenzar el tratamiento DSS. </li><li> Haga un 3% (w / v) de sulfato de dextrano sódico solución de sal en agua y filtrar con un filtro de acetato de 0,45 m de celulosa. </li><li> Reemplazar el agua potable en la jaula del ratón con la solución de DSS 3% durante cuatro días. Los ratones no deben tener acceso a cualquier otra fuente de agua (es decir, la exclusión consejos colocado en los sistemas de riego automático). </li><li> En el cuarto día, reemplazar la solución de DSS con agua por un período adicional de tres días, lo que permite una cierta recuperación del epitelio del colon. Los ratones se pesaron en el día cuatro con el fin de cuantificar las consecuencias sistémicas de la colitis. La pérdida de peso es común en lesiones graves. </li><li> El día 7, peso y sacrificio de los ratones. Los ratones pueden ser sacrificados por sobredosis por inhalación de isoflurano, o institucionalmente, IACUC métodos aprobados. </li></ol> Parte 2: La necropsia y recolección de Colón <ol><li> Exponer el lado ventral del ratón y las piernas seguro para garantizar el acceso sin obstáculos en el abdomen. Mojar el abdomen completamente con etanol al 70%. </li><li> Tome la línea media del abdomen con una pinza el tejido y se extienden hacia arriba lo que acampaban en la piel. Utilice tijeras de punta fina para incidir en el abdomen lo que expone el contenido abdominal. Extender la incisión a la punta de la apófisis xifoides en la línea media y luego se extenderá a lo largo de la cara inferior de los márgenes costal bilateral. </li><li> Identificar el intestino delgado, el ciego y colon. Diseccionar cuidadosamente / se burlan de los dos puntos del mesenterio rodea. Transecto del colon en la pelvis para liberar el colon distal y recto. Transecto de los dos puntos en el margen colonocecal para liberar el colon proximal. Se debe tener cuidado durante este proceso para no dañar el colon como la limpieza del colon será problemático si se produce una perforación. </li><li> Utilizando una aguja 20G de alimentación y una jeringa de 10 ml, intubar y limpiar el colon con helado de PBS hasta que el efluente está completamente libre de heces. </li><li> En este punto, si el análisis macroscópico con un microscopio de disección se desea, los dos puntos se puede fijar como "salchichas". Si el análisis histológico sólo se desea que pase a la Parte 4 "la fabricación de cilindros Suiza para el análisis histológico de colitis aguda". </li></ol> Parte 3: Tratamiento como "salchichas" para el análisis macroscópico de todo el colon <ol><li> Es importante mantener la orientación correcta del colon, por lo tanto, mantenga el extremo distal del colon más cercano al operador. Corte dos piezas de sutura no absorbible (SP116 1,5 seda trenzada métricas), uno de aproximadamente 1 pulgada de largo, los otros 2 pulgadas. </li><li> Utilice la pieza de 2 pulgadas de sutura para atar el extremo distal tan cerca de la margen posible sin dejar de mantener un buen sello. </li><li> Coloque una aguja 20G de alimentación que contiene 5 ml de tampón fosfato 10% de formalina en el extremo proximal del colon. Vagamente atar el pedazo restante de sutura inmediatamente proximal a la bombilla de la aguja de alimentación. Sujete firmemente el colon en el bulbo de la aguja de alimentación y de infundir en formol hasta que el colon se expanda. Apriete el nudo de la sutura que se retira la aguja de alimentación, lo que deja la infusión, colon ampliado como una "salchicha". </li><li> Llenar un tubo cónico de 15 ml con tampón fosfato 10% de formol y el lugar de los dos puntos en el tubo. Fijar durante 24 horas. </li><li> Retirar la formalina y reemplazar con un 70% EtOH durante una 24 horas adicionales. (Los dos puntos se pueden almacenar en un 70% EtOH indefinidamente a temperatura ambiente.) </li><li> Quitar el colon desde el tubo cónico y cortar los hilos en cada extremo con un bisturí, con cuidado de no dañar el colon. Recuerde que el extremo distal tiene el mayor trozo de cuerda. Corte longitudinal de la porción distal de extremo proximal del colon de manera que forme una hoja larga. En este punto, el colon puede ser visto bajo un microscopio de disección. </li></ol> Parte 4: la fabricación de cilindros Suiza para el análisis histológico de colitis aguda <ol><li> Es importante mantener la orientación correcta del colon, por lo tanto, mantenga el extremo distal del colon más cercano al operador. </li><li> Medir la longitud del colon. Esta medida es otro indicador de la gravedad de la lesión. Colitis aumenta el edema y se acorta la longitud del colon en general. </li><li> Utilizando unas tijeras de punta fina, cortar longitudinalmente de distal a proximal final del colon. Use unas pinzas de punta fina para agarrar cualquiera de los bordes de la incisión y abrir lateralmente su forma de trabajo hacia distal-&gt; proximal, lo que muestra el colon como una lámina plana. </li><li> Rolling colon requiere un par de pinzas y una técnica a dos manos. Tome cualquiera de los bordes del margen distal con una pinza. Proceder a rodar de forma secuencial el colon mediante la rotación y la liberación de las pinzas de continuar con el borde proximal. Generando así una espiral con una tercera dimensión o "rodillo suizo".Para mantener la forma enrollada, sujete firmemente el rollo con unas pinzas y transectos con una aguja 27G1 / 2. Asegurar la aguja al doblar la aguja a medida que sale del rollo. </li><li> Coloque el rollo en un casete de tejidos debidamente etiquetados y colocar en un frasco de tampón fosfato 10% de formalina a temperatura ambiente durante 24 horas para asegurar la fijación del tejido. </li><li> Retirar la formalina y reemplazar con un 70% EtOH durante una 24 horas adicionales. (Los dos puntos se pueden almacenar en un 70% EtOH indefinidamente a temperatura ambiente.) </li><li> Una vez que la muestra ha sido fijada, puede ser incluido en parafina, se cortaron y montaron en portaobjetos para su análisis histológico. </li></ol> Parte 5: Resultados de Representante El modelo DSS para la colitis aguda permite al investigador para obtener, corregir y analizar los dos puntos que la colitis aguda modelos. Cuando el brazo de gitano se corta y se monta, se debe formar una parte representativa de la totalidad del colon si se extiende adecuadamente (Figura 1). El rollo montado se puede teñir con H &amp; E con el fin de determinar el grado de daño al colon, de la parte distal (interior) el fin de la proximal (exterior) final (Figura 2). La inmunohistoquímica también se puede realizar en el brazo de gitano para identificar y cuantificar los infiltrados inflamatorios. Si el método de la salchicha se ha realizado correctamente, los dos puntos fijos se dilatan y toda la superficie de la mucosa puede ser fácilmente manipulado y se observa bajo el microscopio de disección (Figura 3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig1.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig1tmb.jpg" alt="Figura 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"></a> Figura 1. Correctamente ejecutado "brazo de gitano". (A) Los dos puntos se rueda desde la parte distal a proximal final, seccionado con una aguja y se asegura doblando el extremo de la aguja. Luego se coloca en una cinta de tejido para su fijación. (B) H &amp; E manchadas sección 5 micras de un brazo de gitano a partir de los dos puntos de un ratón tratado con DSS (d = colon distal p = colon proximal). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig2.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig2tmb.jpg" alt="Figura 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"></a> Figura 2. DSS dos puntos tratados muestran signos de colitis aguda. La inflamación y el daño cripta son evidentes en el colon DSS-tratados en comparación con un control del agua tratada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig3.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig3tmb.jpg" alt="Figura 3" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"></a> Figura 3. Un ejemplo de una "salchicha". La salchicha infundido con formol y se expandió por completo. Una ligera inclinación estará presente secundaria a la curvatura natural del colon. La salchicha abierta deben estar planos.

<ol><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Martinez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Mtgr1+sensitizes+the+colonic+epithelium+to+dextran+sodium+sulfate-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis.</a> Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).</li>
<li>Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22Swiss+roll%22%3A+a+simple+technique+for+histological+studies+of+the+rodent+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine.</a> Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).</li>
<li>Aharoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+therapeutic+effect+of+glatiramer+acetate+on+several+murine+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease.</a> J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).</li>
<li>Hahm, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+transforming+growth+factor+beta+signalling+in+the+intestine+contributes+to+tissue+injury+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 49 (2), 190-198 (2001).</li>
<li>Green, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+modulation+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+adherence+to+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).</li>
<li>Dieleman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
</ol>

Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por Vanderbilt IACUC.

Este protocolo se puede modificar el modelo de lesión aguda, curación de las heridas, lesiones o procesos crónicos de colon. Modificación de lesiones agudas: Tratamiento DSS ad lib durante 4-6 días, seguido por el sacrificio inmediato Lesión-reparación de Modificación: Lesión con 4-6 días de tratamiento DSS seguido de un período de recuperación de 3-4 días y el sacrificio (como se describe en el protocolo anteri...

<table><tbody><tr><td>Sal de sulfato de dextrano sódico</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>peso molecular 40.000-50.000</td></tr><tr><td>Formalina fosfato tamponada al 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>Casetes TISSUE PATH Macrosette</td><td>Fisher Scientific</td><td>15182706</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa BD de 10 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol etílico</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>E190</td><td>Diluir al 70 % con agua destilada</td></tr><tr><td>Aguja recta de alimentación de 20G</td><td>VWR international</td><td>20068-612</td><td></td></tr><tr><td>Aguja PrecisionGlide de 27G1/2</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de disección con punta fina/romas</td><td>VWR international</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de Waugh</td><td>VWR international</td><td>82027-428</td><td></td></tr><tr><td>Sutura no absorbible</td><td>LOOK Surgical</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>Papel absorbente Whatman</td><td>VWR international</td><td>28298-020</td><td>Cortar según sea necesario</td></tr><tr><td>Filtro de acetato de celulosa libre de surfactantes (SFCA) Nalgene</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06731-2</td><td></td></tr><tr><td>Calibre digital de compuestos de fibra de carbono</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-007-958</td><td></td></tr></tbody></table>

modelado de la colitis murino utilizando sulfato de dextrano sódico (dss)

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

La colitis puede ocurrir por infecciones virales o bacterianas, ataque isquémico, o trastornos autoinmunes, colitis ulcerosa y en especial la variante de colon de la enfermedad de Crohn - Colitis de Crohn. Colitis aguda puede presentarse con dolor y distensión abdominal, mala absorción, diarrea, hematoquezia y moco en las heces. Estamos empezando a comprender las complejas interacciones entre el medio ambiente, la genética y la disfunción de la barrera epitelial en la enfermedad inflamatoria intestinal y los modelos animales de colitis han sido esenciales para avanzar en nuestra comprensión de esta enfermedad. Un modelo popular consiste en complementar el agua de bebida de los ratones con el sulfato de bajo peso molecular dextrano (DSS), que resulta en daño epitelial y una sólida respuesta inflamatoria en el colon de varios días<sup&gt; 1</sup&gt;. Las variaciones de este método se puede utilizar para modelar una lesión aguda, lesión aguda seguida de la reparación, y los repetidos ciclos de DSS intercalados con la recuperación de modelos de enfermedades inflamatorias crónicas<sup&gt; 2</sup&gt;. Después de un solo período de cuatro días de tratamiento de DSS del 3% en agua potable, los ratones muestran signos de colitis aguda, incluyendo la pérdida de peso, deposiciones con sangre y diarrea. Los ratones son sacrificados al concluir el curso del tratamiento y en dos puntos la necropsia disecados son procesados ​​y pueden ser &quot;suizo rodó&quot;<sup&gt; 3</sup&gt; Para permitir el análisis microscópico de todo el colon o infundido con formol como &quot;salchichas&quot; para permitir el análisis macroscópico. El tejido se incluyeron en parafina, seccionadas y teñidas para la revisión histológica.

De sodio de sulfato de dextrano (DSS), administrada en el agua potable es un modelo murino estableció una lesión inflamatoria de la colitis aguda. Este protocolo describe el método para el tratamiento de DSS y la preparación de los tejidos.

Modelado de la colitis murino utilizando sulfato de dextrano sódico (DSS)

La colitis puede producirse a consecuencia de infecciones virales o bacterianas, insultos isquémicos o trastornos autoinmunes; especialmente la colitis ulcerosa y la variante colónica de...

A los ratones se les administra DSS al 3 % a voluntad durante cuatro días. Mientras se registra diariamente el peso y la presencia de diarrea y sangre en las heces, el DSS se sustituye por agua esterilizada en autoclave después del cuarto día. Tras tres días con agua, los ratones son sacrificados y se les extraen los colones.Los colones se miden y pesan. Luego, los colones se enrollan en forma de rollos suizos o se preparan como salchichas y se examinan bajo un microscopio. Este artículo en video demostrará la recolección y el procesamiento de colones en un modelo murino de colitis.Este procedimiento se utiliza para estudiar la colitis en el laboratorio del Dr. Christopher Williams del Departamento de Biología del Cáncer de la Universidad de Vanderbilt, antes de iniciar el tratamiento con sulfato de dextrina sódica. Se obtienen pesos basales a lo largo del experimento. Se toman pesos diarios después de pesar a los ratones, preparando una solución al 3 % peso por volumen de sulfato de dextrina sódica, o DSS, en agua.El DSS debe tener un peso molecular bajo para que este modelo sea efectivo; prepare suficiente solución de DSS para llenar una botella de agua para cada jaula de ratones y filtre la solución mediante un filtro de acetato de celulosa de 0,45 micrómetros. Reemplace la botella de agua de bebida en la jaula de los ratones por una botella que contenga una solución de DSS al 3 %. Si su institución utiliza un sistema automatizado de suministro de agua, coloque puntas de exclusión en las boquillas de agua para asegurarse de que los ratones no tengan acceso a ninguna otra fuente de agua.Después de cuatro días, los ratones se pesan nuevamente para cuantificar las consecuencias sistémicas de la colitis. La pérdida de peso es común tras una lesión grave, sin embargo, puede no ser evidente hasta varios días después. En el día cuatro, sustituya la solución de DSS por agua durante tres días adicionales para permitir una cierta recuperación del epitelio colónico.Tres días después, el día siete, se vuelve a pesar a los ratones. A continuación, se puede extraer el colon de los ratones sacrificados como se muestra en la siguiente sección. Para extraer el colon, exponga el lado ventral del ratón sacrificado para asegurar un acceso sin obstáculos al abdomen.Humedezca completamente el abdomen con etanol al 70 %. Sujete la línea media del abdomen con pinzas para tejidos y levántela. De esta manera, levante la piel utilizando tijeras de punta fina.Haga una incisión en el abdomen para exponer el contenido abdominal. Extienda la incisión hasta la punta del proceso xifoides en la línea media y luego a lo largo de la parte inferior de los márgenes costales bilateralmente. Identifique el intestino delgado, el ciego y el colon.Disecar cuidadosamente el colon del mesenterio circundante o separarlo con delicadeza. A continuación, seccionar el colon para profundizar en la pelvis y liberar el colon distal del recto.Se debe tener cuidado para que no se corte ninguna arteria ni vena. Además, tenga en cuenta que el colon puede romperse fácilmente. Por lo tanto, retire suavemente el colon del mesenterio.Seccione el colon en el margen de la secuela colónica para liberar el colon proximal. Retire el colon en su totalidad y, utilizando una aguja de alimentación de calibre 20 y una jeringa de 10 mililitros, intubule y lave el colon con PBS frío con hielo hasta que el EIT esté completamente libre de heces. Es importante mantener la orientación correcta del colon conservando el extremo distal del colon más cercano a usted.Comience midiendo la longitud del colon utilizando un calibre digital. La longitud del colon es otro indicador de la gravedad de la lesión. La colitis aumenta el edema y acorta la longitud total del colon.En este momento, los colones recolectados pueden procesarse como salchichas para análisis macroscópico o convertirse en rollos suizos para análisis histológico de la colitis aguda. Demostraremos estas técnicas en las siguientes secciones para procesar el colon como una salchicha. Para el análisis macroscópico de todo el colon, es importante mantener la orientación correcta del colon. Por lo tanto, mantenga el extremo distal del colon más cercano a usted.Corte dos trozos de sutura no absorbible, uno de aproximadamente una pulgada de longitud y el otro de dos pulgadas de longitud. Utilice el trozo de sutura de dos pulgadas para ligar el extremo distal del colon lo más cerca posible del margen, manteniendo aún así un buen sellado. Luego, introduzca una aguja de alimentación de calibre 20 que contenga cinco mililitros de formalina fosfato tamponada al 10% en el extremo proximal del colon.Amarre ligeramente el trozo restante de sutura inmediatamente proximal a la ampolla de la aguja de alimentación. Ahora sujete firmemente el colon en la ampolla de la aguja de alimentación e infunda una cantidad suficiente de formalina asegurándose de que el colon se expanda. Apriete el nudo de la sutura mientras retira la aguja de alimentación, dejando así el colon expandido infusionado.Como si fuera un embutido, llene un tubo cónico de 15 mililitros con formalina tamponada al 10 % con fosfato y etiquete el tubo. Coloque el colon en el tubo y fíjelo durante 24 horas. Después de 24 horas, vierta la formalina en un recipiente adecuado para desechos y sustitúyala con etanol al 70 % durante 24 horas adicionales.Los colones pueden almacenarse indefinidamente en etanol al 70 % a temperatura ambiente. Cuando esté listo para analizar el colon, retírelo del tubo cónico. Corte los hilos en cada extremo con un escalpelo, teniendo cuidado de no dañar el colon.Recuerde que el extremo distal tiene el trozo de cuerda más largo. Corte el colon longitudinalmente desde el extremo distal hasta el proximal para que forme una lámina alargada. Ahora el colon puede observarse bajo un microscopio estereoscópico.Corte el colon longitudinalmente y extiéndalo como una lámina plana. Para enrollar el colon se requieren dos pares de fórceps y una técnica con ambas manos. Sujete con los fórceps ambos bordes laterales del margen distal del colon y proceda a enrollarlo secuencialmente mediante rotación y liberación de los fórceps hacia el margen proximal, generando así una espiral con una tercera dimensión o rollo suizo.Si el colon se adhiere al papel Watman, humedezca el papel y el colon con una pequeña cantidad de PBS para mantener la forma. Sujete firmemente el rollo con pinzas y seccione con una aguja de calibre 27 y medio. Fije el rollo doblando la aguja mientras sale del mismo.Ahora, coloque el rollo en un casete de tejido etiquetado y coloque el casete en un frasco con formalina tamponada al 10% en fosfato. Deje a temperatura ambiente durante 24 horas para fijar el tejido. Después de 24 horas, vierta la formalina y sustitúyala con etanol al 70% durante un tiempo adicional de cuatro horas.Los colones pueden almacenarse indefinidamente en etanol al 70% a temperatura ambiente. Este modelo permite al investigador obtener, fijar y analizar los colones, posibilitando así el análisis de la gravedad de la colitis. Para el análisis macroscópico de todo el colon, el colon puede procesarse como un embutido que se infunde con formalina y se expande completamente.La porción abierta del embutido debe quedar plana. Si el método del embutido se ha realizado correctamente, el colon fijado estará dilatado y toda la superficie mucosa se podrá manipular y observar fácilmente bajo el microscopio estereoscópico. Para el análisis histológico, el colon puede procesarse en forma de rollo suizo.El rollo se asegura con una aguja y se coloca en un casete de tejido para su fijación. Cuando el rollo se corta y monta, debe formar una sección representativa de todo el colon si se ha enrollado correctamente; las secciones del rollo suizo pueden teñirse con hematina y ASIN para determinar el grado de lesión colónica. Recuerde que el extremo distal del colon se encuentra en el centro del rollo sobre el portaobjetos.En este ejemplo, la inflamación y el daño criptal son evidentes en el colon tratado con DSS en comparación con un control tratado con agua. Acabamos de mostrarle cómo cosechar y procesar colones a partir de un modelo murino de colitis aguda. Al realizar este procedimiento, es importante que esté bien organizado antes de sacrificar al animal.Los ratones, por ejemplo, tienen todos los tubos y casetes etiquetados para cada ratón, y todas las herramientas y reactivos fácilmente disponibles. Además, mantenga registros detallados del peso de los ratones y de la longitud del colon. Finalmente, asegúrese de haber asignado suficiente tiempo para el procesamiento.Por lo general, toma 15 minutos por ratón para un principiante y de seis a ocho minutos para alguien con más experiencia en esta técnica.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Los modelos experimentales de enfermedad inflamatoria intestinal, nos han permitido examinar las respuestas del complejo inmune innata y adaptativa asociada con la patogénesis. El uso de puntuación histológico, la cuantificación de citoquinas pro-inflamatorias y la actividad mieloperoxidasa, se puede comenzar a evaluar las respuestas observadas en la enfermedad inflamatoria intestinal.

La investigación de la inflamación intestinal inducida por DSS en el modelo de la EII

Se demuestra un protocolo en el que la administración del agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por tres ciclos de la sódico pro-inflamatoria agente sulfato de dextrano (DSS) rápida y consistente genera tumores de colon en ratones con similitudes morfológicas y moleculares a las que se observan en la colitis humana asociada a cáncer.

Modelado Colitis asociada a cáncer con azoximetano (AOM) y Sodio sulfato de dextrano (DSS)

Este video muestra una técnica para generar un modelo murino de colitis inducido químicamente, una enfermedad inflamatoria intestinal. Se permite que el ratón consuma una solución de sulfato de sodio de dextrano (DSS) durante un tiempo adecuado. Al consumirlo, el DSS daña la mucosa y la barrera de la capa epitelial en el colon, lo que permite que los microbios intestinales ingresen al tejido subyacente, donde son detectados por las células inmunitarias residentes para mediar una respuesta...

Una técnica para generar un modelo murino de colitis inducida por sodio con sulfato de dextrano

Este video muestra el método de tinción de hematoxilina y eosina (H&amp;E) para evaluar el daño en el colon en un modelo murino de colitis inducida por DSS, una enfermedad inflamatoria intestinal. Al aislar el colon de un ratón tratado con DSS y obtener secciones del tejido, la tinción con H&amp;E de las secciones ayuda a identificar el daño tisular mediado por la inflamación.

Tinción de hematoxilina y eosina para evaluar el daño del colon en la colitis inducida por DSS

DNBS / TNBS colitis inducida ofrece un método alternativo y barato para estudiar la patobiología de la enfermedad inflamatoria del intestino. El protocolo descrito en este documento se describen la aplicación exitosa de DNBS para inducir la colitis en ratones y ratas y permite estudiar a fondo las respuestas intestinales mediados por el huésped.

Modelos DNBS / TNBS colitis: Proporcionar ideas sobre la enfermedad inflamatoria intestinal y efectos de la grasa en la dieta

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Murino colostomía Distal, un modelo novedoso de desvío Colitis en ratones C57BL/6

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